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申请/专利权人：依奈特制药公司

摘要：本发明提供了能够与NKp46多肽结合的抗原结合蛋白。所述抗原结合蛋白在治疗以NKp46表达细胞，特别是肿瘤细胞为特征的病症方面具有增强的活性。

主权项：1.一种结合至SEQIDNO:1的NKp46多肽的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含：i含有SEQIDNO:5所示的CDR1、SEQIDNO:8所示的CDR2和SEQIDNO:11所示的CDR3的重链可变区和ii含有aSEQIDNO:14所示的CDR1、SEQIDNO:17所示的CDR2和SEQIDNO:19所示的CDR3，或bSEQIDNO:22所示的CDR1、SEQIDNO:25所示的CDR2和SEQIDNO:27所示的CDR3的轻链可变区，其中所述抗体片段选自由以下组成的组：Fab、Fab'、Fab'-SH、Fab'2、Fv、双抗体或单链抗体片段。

全文数据：Nkp46结合剂相关申请的交叉引用本申请要求2017年1月24日提交的美国临时申请第62449,617号和2017年7月10日提交的美国临时申请第62530,443号的权益，这两个申请均通过引用整体并入本文；包括任何附图和序列表。序列表的引用将本申请连同序列表一起以电子格式提交。序列表以2018年1月22日创建的命名为“NKp46-8PCT_ST25txt”的文件提供，其大小为27KB。电子格式的序列表中的信息通过引用整体并入本文。技术领域本发明提供了能够与NKp46多肽结合的抗原结合蛋白。所述抗原结合蛋白在治疗以NKp46表达细胞，特别是肿瘤细胞为特征的病症方面具有增强的活性。技术背景NK细胞活性受涉及激活和抑制信号的复杂机制调节。已鉴定了几种不同的NK特异性受体，其在NK细胞介导的HLAI类缺陷靶细胞的识别和杀伤中起重要作用。天然细胞毒性受体NCR是指一类在NK细胞中特异性表达的活化受体蛋白，以及表达它们的基因。NCR的实例包括NKp30、NKp44和NKp46参见，例如，Lanier2001NatImmunol2:23-27,Pende等1999JExpMed.190:1505-1516,Cantoni等1999JExpMed.189:787-796,Sivori等1997J.Exp.Med.186:1129-1136,Pessino等1998JExpMed.1885:953-60；Mandelboim等2001Nature409:1055-1060，其全部公开内容通过引用并入本文。这些受体是Ig超家族的成员，并且它们由特异性mAb诱导的交联导致强烈的NK细胞活化，这导致细胞内Ca++水平升高，从而触发细胞毒性和淋巴因子释放，并导致NK对许多类型的靶细胞的细胞毒性的活化。据报道，NCR，特别是NKp46的表达一般限于NK细胞。在西方国家，PCTL占侵袭性淋巴瘤的15％至20％，占所有非霍奇金淋巴瘤NHL的7％至10％。它们通常在中年至老年患者中发生，68％的患者呈现出传播疾病的特征，其中他们中近半数45％为全身性症状，四分之一为骨髓BM受累25.8％以及三分之一为结外疾病37％。尽管采取了积极治疗，但仍有超过一半的患者死于他们的疾病。虽然某些独特的病种如果得到治疗可改善预后，但许多侵袭性PTCL的预后仍然不因使用第二代和第三代化疗方案而相对改变，并且例如，对于PTCL-NOS，5年总生存期OS仍然保持在25％与47％之间。因此，本领域需要针对患有PTCL的患者的改善的益处。发明内容尽管NKp46是健康个体中的NK细胞选择性细胞表面蛋白，但NKp46可在某些恶性肿瘤中由T细胞表达。免疫组织化学显示NKp46可以在外周T细胞淋巴瘤PTCL中以允许用抗-NKp46抗体靶向的表达水平表达。本发明尤其来自对人NKp46上的表位的发现，所述表位允许通过抗体特别是免疫缀合物的高效靶向来消除。通过对一系列候选抗-NKp46抗体的研究，本发明人鉴定了具有特别高的介导NKp46+肿瘤细胞耗尽的能力的抗体抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。本文提供的测定使用药物缀合方法来进行，该方法允许将精确数目的细胞毒性剂与抗体缀合，使得混合物中基本上所有抗体携带有相同数目的细胞毒性部分例如，药物:抗体比率DAR为2或4。该方法允许比较抗体及其表位，而不会偏离不同抗体样品中DAR的差异分布。有趣的是，表现出最高活性的抗体都竞争着与细胞表面NKp46多肽上的单个区域表位的结合。该抗体不与已知的抗-NKp46抗体竞争，表明NKp46上的区域特别适合被免疫缀合物靶向。此外，虽然选择用于与人NKp46结合的许多抗体不能指导NK细胞裂解被制作成表达人NKp46的RAJI肿瘤细胞系，但抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1显示出有希望诱导针对肿瘤细胞的ADCC的能力。鉴于该抗体作为免疫缀合物的高效力，该抗体作为ADCC诱导物的功效特别显著鉴于具有经历细胞内内化的能力，高活性免疫缀合物往往是弱ADCC诱导物。鉴于作为免疫缀合物的特别高的活性如在不存在介导ADCC0的能力的情况下测试的，该抗体可以有利地用作缺乏Fcγ介导的效应活性例如，不介导ADCC的免疫缀合物。然而，应当理解，该抗体还可用作进一步具有Fcγ介导的效应子活性例如，介导ADCC从而将两种作用模式组合起来的免疫缀合物。或者，该抗体可用作不与毒性部分缀合的“裸”ADCC介导抗体。在一个方面，如本文中在使用具有化学计量官能化的受体谷氨酰胺的抗-NKp46抗体免疫缀合物其中混合物中的基本上所有抗体都具有特定的DAR例如，DAR为2或4的实施例中的抗体方面所举例说明的，该抗体尽管缺乏Fc介导的效应子功能，但仍能够以免疫缀合物的形式强效地诱导肿瘤细胞死亡。本公开的抗体可包含经修饰以减少或消除与一种或多种人Fcγ受体例如，CD16A、CD16B、CD32A、CD32b、CD64的结合的人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的Fc结构域或其部分。此种抗体将使由非肿瘤Fcγ受体表达细胞的摄取降至最低。因此，当与具有高效力毒性的细胞毒性剂例如，DNA小沟结合剂，诸如吡咯并苯并二氮杂剂，如实施例中所示的缀合时，该抗体能够以比原本可能的剂量更高的剂量使用，因此可在癌症治疗中比ADCC介导免疫缀合物产生更大的功效。任选地，如本文实施例中所举例说明的，该抗体保留与人FcRn蛋白的结合，从而提供体内半衰期。有利地，被抗体结合的表位存在于如在细胞表面上表达的人和非灵长类动物NKp46多肽上，也存在于如由癌细胞表达的NKp46上。在一个方面提供了抗体或抗体片段，其与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种竞争着与NKp46结合和或与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种结合NKp46上的相同表位。在一个方面提供了几种单克隆抗体，其结合在细胞表面上表达的SEQIDNO:1的人NKp46多肽，并且结合在细胞表面上表达的SEQIDNO:2的非人灵长类动物NKp46多肽，任选地，其中抗体包含人Fc结构域并且是耗尽抗体。在一个方面，提供了与单克隆抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种或它们的任意组合结合相同表位和或竞争着与NKp46多肽结合的抗原结合化合物。在一个实施方案中，提供了与选自由以下组成的组的抗体结合相同表位和或竞争着与NKp46多肽结合的抗原结合化合物：a分别具有SEQIDNO:3和4的VH和VL区的抗体8B6A；b分别具有SEQIDNO:3和21的VH和VL区的抗体8B6B；c分别具有SEQIDNO:29和30的VH和VL区的抗体9H11A；d分别具有SEQIDNO:29和47的VH和VL区的抗体9H11B；以及e分别具有SEQIDNO:55和56的VH和VL区的抗体17E1。本发明人此外还鉴定了被抗体结合的人NKp46上的表位。该抗体在称为“D2”结构域的细胞外结构域中结合人NKp46。因此，在一个方面，本发明提供抗原结合结构域，或包含其的蛋白质或多肽，例如与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基100-187的NKp46区段特异性结合的抗体或抗体片段。在另一方面，该抗体结合对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基101-118或101-105或100-105的NKp46的区段。在另一方面，该抗体与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基150至169的NKp46的区段结合。在另一方面，该抗体与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基133-151或135-151的NKp46的区段结合。在另一方面，该抗体与对应于残基178-187或177-187的NKp46的区段结合。在一个实施方案中，与野生型NKp46氨基酸序列相比，抗体与在本文公开的残基区段中具有氨基酸取代的NKp46多肽的结合降低。此类抗体还可根据具有本文所述的任何性质来表征。在一个方面，结合NKp46多肽的本发明蛋白质例如抗体或抗体片段与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基100-187的区段中的至少一个残基结合。在一个实施方案中，该抗体与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基101-118或101-105或100-105的区段中的至少一个残基结合，所述的残基任选地进一步与SEQIDNO:70的NKp46多肽的区段150-169中的至少一个残基组合。任选地，该抗体与对应于NKp46的残基135至151或133至151的区段中的至少一个残基和或对应于SEQIDNO:70的多肽的残基178-187或177-187的区段中的至少一个残基结合。在一个方面，提供了结合人NKp46多肽的抗原结合结构域或抗原结合蛋白例如，包含其的高变区或蛋白质、抗体或抗体片段、免疫缀合物等，其中所述结构域或蛋白质包含选自由以下组成的组的重链可变区和轻链可变区的组合：a包含SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:4的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；b包含SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:21的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；c包含SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:30的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；d包含SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:47的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；以及e包含SEQIDNO:55的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:56的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区。任选地，对于与被制作成在其表面上表达人NKp46例如，具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的多肽或SEQIDNO:2的非人灵长类动物NKp46例如，食蟹猴的细胞例如，CHO细胞的结合，抗原结合化合物具有不超过2μgml，任选地不超过1μgml，不超过0.5μgml，不超过0.1μgml或不超过0.05μgml的EC50。在一个实施方案中，抗-NKp46抗体结合包含一个、两个或三个氨基酸残基的表位，所述氨基酸残基选自由被8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合的NKp46上的氨基酸残基组成的组。在一个实施方案中，抗体不与抗体Bab281、9E2或195314据报道能中和NK细胞中的NKp46功能竞争着与NKp46结合。在一个实施方案中，提供了结合人NKp46而基本上不阻断NKp46与天然配体例如，其中NKp46及其天然配体各自在细胞表面上表达的相互作用的抗体。优选地，该化合物是抗体，任选地是包含两个Ig重链和两个Ig轻链的四聚体抗体。优选地，如通过例如表面等离子体共振SPR筛选诸如通过用BIAcoreTMSPR分析装置分析所确定的，对于人NKp46多肽，该抗体具有以下结合亲和力KD任选地，其中结合亲和力是二价的，任选地其中结合亲和力是单价的：等于或小于10-8M，优选小于10-9M，优选小于10-10M，或优选小于10-11M。在一个实施方案中，该抗体是耗尽抗体，任选地其中所述抗体是包含细胞毒性部分的免疫缀合物，任选地其中该抗体诱导针对表达NKp46的肿瘤细胞的ADCC和或CDC。在本文中的任何实施方案的一个方面，该抗体在与肿瘤细胞表面上的NKp46结合后能够进行细胞内内化。在本文中的任何实施方案的一个方面，当该抗体与NKp46表达细胞上的NKp46结合时，在NKp46表达细胞中观察到细胞表面NKp46的量显著减少。在一个实施方案中，抗体具有高亲和力和缓慢的解离速率，与食蟹猴和或恒河猴NKp46交叉反应，并且属于耗尽同种型诸如，例如，人IgG1。在一个方面，提供了由式I表示的抗-NKp46免疫缀合物：Ab-X-Zm式I其中，Ab是本公开的抗-NKp46抗体或抗体片段，例如，包含抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1中的任一种或结合NKp46上的相同表位的抗体或抗体片段的重链和轻链CDR1、2和3的抗体。X为连接Ab与Z的部分，例如，通过共价连键连接到Ab和Z之一或两者的接头的残基；Z为剂，任选地为细胞毒性剂，例如，其被递送至NKp46表达细胞；并且m的范围为约1至约15，任选地其中m为2或4。在一个实施方案中，X包含被细胞内肽酶或蛋白酶，任选地，溶酶体或内体蛋白酶切割的接头例如，肽基接头。在一个实施方案中，细胞毒性剂选自由以下组成的组：紫杉烷、蒽环类、喜树碱、埃坡霉素、丝裂霉素、考布他汀、长春花生物碱、氮芥、美登醇、刺孢霉素、多卡米星、微管溶素tubulysins、多拉司他汀、瑞奥他汀auristatins、烯二炔类、吡咯并苯并二氮杂乙烯亚胺、放射性同位素和肽毒素或其片段。在本文中的任何方面的一个实施方案中，免疫缀合物包含细胞毒性剂，所述细胞毒性剂与抗体的Fc区内或附接于抗体的Fc区的受体谷氨酰胺残基Q例如，与重链和或轻链的C-末端融合的TG酶识别标签内的Q共价结合。在一个实施方案中，Fc区内的受体谷氨酰胺位于重链的残基位置295和或297KabatEU编号处。在一个方面，提供了本公开的任何方面的抗-NKp46抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含官能化的受体谷氨酰胺残基Q，所述官能化的受体谷氨酰胺残基包含如下结构：Q–L”–Y–Z或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于所述抗体或抗体片段的恒定区内或附接于所述恒定区的谷氨酰胺残基；L”为赖氨酸基接头，其中氮原子以仲胺形式与Q的γ碳共价键合；Y为间隔子系统；以及Z为细胞毒性剂，任选地DNA小沟结合剂。在一个方面，提供了组合物，所述组合物包含本公开的任何方面的多种抗-NKp46抗体或抗体片段，其中所述组合物中至少90％的抗体或抗体片段中的每个抗体或片段具有m个官能化的受体谷氨酰胺残基Q，其中m是选自2或4的整数，其中每个官能化的受体谷氨酰胺残基具有如下结构：Q–L”–Y–Z或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于所述抗体或抗体片段的恒定区内或附接于所述恒定区的谷氨酰胺残基；L”为赖氨酸基接头，其中氮原子以仲胺形式与Q的γ碳共价键合；Y为间隔子系统；以及Z为细胞毒性剂，任选地DNA小沟结合剂。在一个方面，提供了本公开的任何方面的抗-NKp46抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含官能化的受体谷氨酰胺残基Q，所述官能化的受体谷氨酰胺残基Q包含如下结构：Q–L”–RR’–Y–Z或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于所述抗体或抗体片段的恒定区内或附接于所述恒定区的谷氨酰胺残基；L”为赖氨酸基接头，其中氮原子以仲胺形式与Q的γ碳共价键合；RR'为反应性部分R与互补反应性部分R'之间的加合产物；Y为间隔子系统；以及Z为吡咯并苯并二氮杂例如，吡咯并苯并二氮杂多聚体、吡咯并苯并二氮杂二聚体、吡咯并苯并二氮杂三聚体。在一个方面，提供了组合物，所述组合物包含多种本公开的任何方面的抗-NKp46抗体或抗体片段例如，多种包含抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1的任一种的重链和轻链CDR1、2和3的抗体，其中所述组合物中至少90％的抗体或抗体片段中的每个抗体或片段具有m个官能化的受体谷氨酰胺残基Q，其中m是选自2或4的整数，其中每个官能化的受体谷氨酰胺残基具有如下结构：Q–L”–RR’–Y–Z或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于所述抗体或抗体片段的恒定区内或附接于所述恒定区的谷氨酰胺残基；L”为赖氨酸基接头，其中氮原子以仲胺形式与Q的γ碳共价键合；RR'为反应性部分R与互补反应性部分R'之间的加合产物；Y为间隔子系统；以及Z为吡咯并苯并二氮杂例如，吡咯并苯并二氮杂多聚体、吡咯并苯并二氮杂二聚体、吡咯并苯并二氮杂三聚体。在上述结构的一个实施方案中，抗体或抗体片段与包含8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1的相应VH和VL的抗体结合相同表位和或与所述抗体竞争着与NKp46多肽结合。在上述结构的任一种的一个实施方案中，抗体或抗体片段包含选自由以下组成的组的重链可变区和轻链可变区的组合：a包含SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:4的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；b包含SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:21的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；c包含SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:30的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；d包含SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:47的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区；以及e包含SEQIDNO:55的重链可变区的CDR1、2和3的重链可变结构域和ii包含SEQIDNO:56的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链可变区。在一个方面，提供了特异性结合NKp46的抗体，其中所述抗体具有以下性质中的一种或多种包括其任意组合或全部：a如通过例如表面等离子体共振SPR筛选例如通过用BIAcoreTMSPR分析装置分析确定的，对于与NKp46多肽的结合具有小于10-8M，或优选小于10-9M的单价Kd；b与如本文所述的NKp46上的表位被抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1结合的人NKp46上的一个或多个氨基酸残基结合和或与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1竞争着与NKp46多肽结合和或与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基100-187的区段中的至少一个残基或对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基101-105的区段中的残基和或对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基150-169的区段中的残基结合；c与例如，如在细胞表面上表达的非人灵长类动物NKp46例如，具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的食蟹猴多肽结合；d与如在肿瘤细胞表面上表达的NKp46结合；和或e在与细胞例如,恶性细胞的表面上表达的NKp46多肽结合后能够进行细胞内内化。在本文中的任何实施方案中，本文中的任何抗体可以根据上述a-e的任一个或多个特征进行表征。在一个实施方案中，抗体介导或能够介导针对在其表面上表达NKp46的细胞的补体依赖性细胞毒性CDC和或抗体依赖性细胞毒性ADCC。在一个实施方案中，抗体例如免疫缀合物不介导或不能介导针对在其表面上表达NKp46的细胞的抗体依赖性细胞毒性ADCC。例如，抗体可在其重链中缺乏氨基酸残基N297KabatEU编号处的N-连接糖基化，和或可在Fc结构域中包含氨基酸修饰，所述氨基酸修饰减少或消除与人CD16A和或其它人Fcγ受体的结合。在一个实施方案中，提供了产生和或测试抗-NKp46抗体的方法，所述方法包括：i评估抗体是否与如本文所述的NKp46上的表位或区域被抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1结合的NKp46上的一个或多个氨基酸残基结合，和或是否与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1竞争着与NKp46多肽结合，和或是否与对应于SEQIDNO:1的NKp46多肽的残基100-187的区段中的至少一个残基结合；和或ii评估抗体是否诱导针对在其表面上表达NKp46的细胞的补体依赖性细胞毒性CDC和或抗体依赖性细胞毒性ADCC。步骤i可任选地包括使结合NKp46多肽的抗体与NKp46多肽例如，分离的多肽或在细胞表面上表达的多肽接触，任选地其中NKp46多肽是突变的多肽。步骤ii可任选地包括在免疫效应细胞例如，T细胞、NK细胞存在的情况下使结合NKp46多肽的抗体与表达NKp46多肽的细胞例如，肿瘤细胞接触。在另一个实施方案中，提供了产生、评估、选择或筛选结合哺乳动物受试者中的NKp46多肽，任选地用于治疗癌症的抗体或免疫缀合物的方法，所述方法包括以下步骤：a提供多种免疫缀合物，其包含与细胞毒性部分缀合的结合人NKp46的抗体，其中所述免疫缀合物在其高变区氨基酸序列上存在差异，但携带有相同的细胞毒性部分，并且共享每个抗体的相同数量的细胞毒性部分；以及b执行选择步骤以从所述多种免疫缀合物中选择抗体或免疫缀合物，该步骤包括：i评估免疫缀合物是否能够直接耗尽在其表面上表达NKp46的细胞例如，作为缺乏效应子功能的免疫缀合物，在免疫效应细胞不存在的情况下，在除表达NKp46+的细胞以外的细胞不存在的情况下，和或在非肿瘤细胞不存在的情况下。在一个实施方案中，每种免疫缀合物是包含多种共享高变区的免疫缀合物的组合物，其中每种组合物中至少90％的免疫缀合物中的每个抗体或片段具有m个细胞毒性部分，其中m为选自2或4的整数。在一个实施方案中，每个细胞毒性部分与抗体的一级氨基酸序列内的受体谷氨酰胺结合。任选地，该方法还包括：ii评估抗体是否与如本文所述的NKp46上的区域或表位被抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1结合的NKp46上的一个或多个氨基酸残基结合，和或是否与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1竞争着与NKp46多肽结合，和或是否与SEQIDNO:1的Nkp46多肽的残基100-187的区段中的至少一个残基结合；和或iii评估抗体是否诱导针对在其表面上表达NKp46的细胞的抗体依赖性细胞毒性ADCC。在一个实施方案中，该方法还包括选择能够直接耗尽在其表面上表达NKp46的细胞的免疫缀合物。在一个实施方案中，该方法还包括选择免疫缀合物,所述免疫缀合物与如本文所述的NKp46上的表位被抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1结合的NKp46上的一个或多个氨基酸残基结合，和或与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和或17E1竞争着与NKp46多肽结合，和或与对应于SEQIDNO:1的NKp46多肽的残基100-187的区段中的至少一个残基结合。在一个实施方案中，该方法还包括选择诱导抗体依赖性细胞毒性ADCC的免疫缀合物。在一个实施方案中，该方法还包括以下步骤：进一步处理选定的免疫缀合物，产生一定量的免疫缀合物选定的免疫缀合物，和或进一步测试选定的免疫缀合物的体外或体内生物活性。在另一个实施方案中，提供了产生结合NKp46多肽的抗体的方法，其包括培养表达本文所述的抗-NKp46抗体的重组宿主细胞，以及回收由所述宿主细胞产生的抗-NKp46抗体，任选地还包括配制所述抗体例如，用药物赋形剂以用于向人受试者施用。优选地，本文中的任何实施方案中的化合物是抗体，任选地包含两个Ig重链和两个Ig轻链的四聚体抗体。在一个实施方案中，抗-NKp46抗体是“裸抗体”并且不与毒性剂偶联，任选地，所述裸抗体包含经修饰以增加与Fcγ受体例如CD16的结合的Fc区。在一个实施方案中，裸抗体或偶联的抗体包含重链，所述重链包含结合Fcγ受体例如，CD16的人Fc区例如，IgG1。任选地，这种抗体诱导针对在其表面上表达NKp46的细胞的补体依赖性细胞毒性CDC和或抗体依赖性细胞毒性ADCC。在本文中的任何实施方案的一个方面，抗体可具有重链和或轻链，所述重链和或轻链具有选自由抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1组成的组的抗体的相应重链和或轻链的一个、两个或三个CDR。在一个实施方案中，抗体是嵌合的，例如，含有非鼠恒定区，任选地人恒定区。在一个实施方案中，抗体具有包含人框架氨基酸序列的可变区。在一些实施方案中，该单克隆抗体是人抗体或人源化抗体。在任何实施方案的一个方面，抗体的同种型是人IgG，任选地人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在一个实施方案中，抗体包含人Fc结构域或属于被人FcγR例如，FcγRIIIA结合的同种型，例如IgG1或IgG3同种型的抗体。在一个实施方案中，抗体是免疫缀合物，其包含与细胞毒性剂结合的抗体，其中所述抗体包含这样的同种型的人Fc结构域，其天然地被人FcγR例如，FcγRIIIA结合，但包含一个或多个氨基酸修饰以减少与人FcγR多肽例如，CD16A、CD16B、CD32A、CD32B、CD64的结合。在一个实施方案中，抗体包含这样的同种型的人Fc结构域，其天然地被人FcγR例如，FcγRIIIA结合，但该Fc结构域缺乏N297连接的糖基化KabatEU编号并且与人FcγR多肽例如，CD16A、CD16B、CD32A、CD32B、Cd64没有结合具有低的结合。在任何实施方案的一个方面，抗体是选自以下的抗体片段或包含选自以下的抗体片段：Fab、Fab'、Fab'-SH、Fab'2、Fv、双抗体、单链抗体片段，或包含多种不同的抗体片段的多特异性抗体例如，双特异性抗体、三特异性抗体。任选地，抗体是四聚体两条重链和两条轻链并以二价方式结合NKp46例如，IgG抗体。在一个实施方案中，抗体能够例如在体外测定中直接诱导例如，在免疫效应细胞不存在的情况下至少20％、30％、40％或50％的NKp46表达细胞的细胞死亡。在一个方面，提供了使用特异性结合NKp46的耗尽抗体进行治疗的方法。抗体可用作预防性或治疗性治疗；在本文中的任何实施方案中，抗体的治疗有效量可以与抗体的预防有效量互换。在一个方面，提供了治疗患有癌症或以使NKp46表达细胞增殖为特征的其它增殖性疾病的患者的方法，该方法包括向患者施用药学有效量的本公开的抗体。在一个实施方案中，所述癌症是淋巴瘤。在一个实施方案中，所述癌症或疾病选自由以下组成的组：PTCL-NOS、AITL或ALCLALK+或ALK-、ATL、NK-T细胞淋巴瘤、鼻型结外NK-T细胞淋巴瘤、EATL、乳糜泻、I型难治性乳糜泻RCDI和II型难治性乳糜泻RCDII。在一个实施方案中，抗体是包含选自由以下组成的组的抗体的重链和轻链CDR例如根据Kabat编号方案的抗体：抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。在一个实施方案中，抗体是与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1竞争着与NKp46的结合抗体，或与前述抗体中的任何一种结合相同表位的抗体，和或与对应于SEQIDNO:1的NKp46多肽的残基100-187的区段中的至少一个残基结合的抗体。可将抗NKp46抗体的治疗方法与第二治疗剂组合用于治疗个体，所述第二治疗剂包括用于治疗癌症的抗癌剂例如，化学治疗药物、肿瘤疫苗、与肿瘤细胞上的特异性抗原结合的抗体、耗尽肿瘤细胞的抗体、增强免疫反应的抗体等。还提供了用于选择患有对使用本公开的抗-NKp46剂例如，与NKp46多肽结合的抗体的治疗有反应的病症例如，癌症的受试者的方法，该方法包括确定所述受试者中的细胞例如，肿瘤细胞是否表达NKp46多肽，NKp46多肽的表达指示应答受试者。在一个实施方案中，该方法包括确定所述受试者中的细胞例如，肿瘤细胞、促炎细胞等是否表达具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的NKp46多肽。在一个实施方案中，确定所述受试者中的细胞是否表达NKp46多肽的步骤包括使来自受试者的生物样品例如，通过获得癌细胞的样品、血液或任何组织样品等与本公开的抗-NKp46抗体接触。任选地，在任何方法中，该方法还包括向应答受试者施用与NKp46多肽结合的抗体例如，本公开的抗-NKp46抗体。在优选实施方案中，使用NKp46特异性配体确定疾病相关细胞中NKp46多肽的表达。优选地，所述配体是抗体，或其片段或衍生物。在另一个方面，提供了方法例如，进行诊断测定、应答者测定等的方法，其包括评估患者是否具有表达NKp46多肽，例如，被本公开的抗体结合的NKp46多肽一种或多种NKp46等位基因的疾病相关细胞例如，肿瘤细胞。所述方法可包括，例如，从包含疾病相关细胞的患者获得生物样品，使所述疾病相关细胞与这种抗体接触以及评估所述抗体是否与疾病相关细胞结合。发现疾病相关细胞表达NKp46，表明患者患有以NKp46表达细胞为特征的疾患和或适合利用本公开的抗-NKp46抗体进行治疗。可用适合于以NKp46表达细胞为特征的特定疾病的治疗进一步治疗患者。任选地，用抗-NKp46抗体治疗患者。在一个实施方案中，该方法用于选择患有癌症的受试者，并且疾病相关细胞是癌细胞。还提供了治疗个体的方法，该方法包括：a确定个体是否具有致病性NKp46表达细胞，以及b如果个体被确定为具有致病性NKp46表达细胞的患者，则施用本公开的抗原结合化合物例如，抗体。在一个实施方案中，提供了用于治疗或预防个体的外周T细胞淋巴瘤的方法，该方法包括向个体施用治疗活性量的本文公开的抗-NKp46抗原结合化合物。在一个方面，包含抗-NKp46化合物的组合物可用于治疗或预防LDGL颗粒淋巴细胞的淋巴组织增生性疾病，任选地NK-LDGL颗粒淋巴细胞的NK型淋巴组织增生性疾病；或者称为NK-LGL。在一个方面，包含抗-NKp46化合物的组合物可用于治疗或预防外周T细胞淋巴瘤。任选地，所述治疗或预防包括向患有PTCL包括易于进展成PTCL的疾患的个体施用结合NKp46多肽的化合物。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有NKT淋巴瘤。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有肠病相关T细胞淋巴瘤EATL、RCDI或RCDII。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有间变性大细胞淋巴瘤ALCL。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有PTCL-NOS。在本文的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体中PTCL例如，EATL、RCDI、RCDII、ALCL、PTCL-NOS的治疗或预防包括：a确定患有PTCL的个体内恶性细胞的NKp46多肽状态，以及b在确定NKp46多肽主要在恶性细胞表面上表达的患者后，向个体施用结合本文中的任何实施方案的NKp46多肽的化合物。在本文中的任何方面的一个实施例中，PTCL是侵袭性和或晚期PTCL。在一个实施方案中，PTCL是侵袭性非皮肤PTCL。在一个实施方案中，PTCL是PTCL-NOS也称为PCTL-U。在一个实施方案中，PTCL是结节性例如，主要是结节PTCL，例如PTCL-NOS、AITL或ALCLALK+或ALK-。在一个实施方案中，PTCL是间变性大细胞淋巴瘤ALCL，任选地ALK阴性ALCL。在一个实施方案中，PTCL是血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤AITL，任选地皮肤AITL，任选地非皮肤AITL。在一个实施方案中，PTCL可以是侵袭性的、非皮肤的、原发性结节性PCTL。在一个实施方案中，PTCL是结外例如，原发性结外PTCL。在一个实例中，PTCL可以是侵袭性的非皮肤结外PCTL。在一个实施方案中，PTCL是成人T细胞白血病或淋巴瘤ATL，例如，HTLV+ATL。在一个实施方案中，PTCL是正视区外结节病orthovisceralextranodaldisease，例如NK-T细胞淋巴瘤或肠病相关T细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，PTCL是鼻型结外NK-T细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，PTCL是RCDI、RCDII、肠病相关T细胞淋巴瘤EATL。本发明的这些和另外的有利方面和特征可能在本文其它地方有进一步的描述。附图简述图1示出通过抗-NKp46抗体对NK-T-淋巴瘤细胞的染色。该图还显示NKp46阳性细胞表达CD183CXCR3、CD56和CD54ICAM。图2A-2B示出NK细胞对针对NKp46+NKT淋巴瘤细胞系SNK6的ADCC的诱导。在这些ADCC测定中，用作效应细胞的是：A.用人CD16转染的NK细胞，B.从人血液中纯化的NK。在这两种情况下，在SNK6靶T细胞中加载51Cr，将其在指定浓度的嵌合抗-NKp46存在的情况下以E:T＝10:1的比例与效应E细胞混合。在4小时的孵育时间后评估培养基中的51Cr的释放。相对于最小和最大释放的对照计算特异性裂解的百分比。图3示出在Raji异种移植小鼠模型中使用嵌合抗-NKp46的抗肿瘤功效。将5×106个表达高水平NKp46的Raji细胞静脉内i.v移植到SCID小鼠中。肿瘤细胞移植后一天，每周2次持续3周以300μg小鼠的剂量用同种型对照抗体IC或抗NKp46嵌合抗体8B6-A、9H11-B、17E1腹膜内治疗小鼠。每周对小鼠称重两次。建立卡普兰-迈耶存活曲线以评估经治疗小鼠的存活率。图4示出用于在8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1的组合中评估通过表面等离子共振与人NKp46的结合竞争的研究的结果。每种抗体彼此竞争着与NKp46结合，表明这些抗体都与NKp46上的共同区域结合。图5示出用于在抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1以及已知抗体中评估通过表面等离子体回流细胞术surfaceplasmonreflowcytometry与人NKp46的结合竞争的研究的结果。虽然8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1组都彼此竞争着结合NKp46，但它们都未与已知抗体竞争。图6A、图6B和图6C分别示出NKp46的三级结构在三个方向上，示出了在该三级结构上被抗体9H11A、8B6A和17E1结合的区段。具体实施方式定义如本说明书中所用，“一个种a”或“一个种an”可以指一个种或多个种。如在一项或多项权利要求中所用，当结合词语“包含”使用时，词语“一个种a”或“一个种an”可以指一个种或超过一个种。如本文中所用，“另外的”可指至少第二个种或更多个种。在使用“包含”的情况下，这可用“基本上由......组成”或“由......组成”替代。“NKp46多肽”和“NKp46受体”是指由Ncr1基因或从这种基因制备的cDNA编码的蛋白质或多肽。任何天然存在的同种型、等位基因或变体涵盖于术语NKp46多肽中例如，与SEQIDNO:1具有90％、95％、98％或99％同一性的NKp46多肽，或它的至少20个、30个、50个、100个或200个氨基酸残基的连续序列。人NKp46同种型a的304个氨基酸残基的序列如下所示：SEQIDNO:1对应于NCBI登录号NP_004820，其公开内容通过引用并入本文。人NKp46mRNA序列描述于NCBI登录号NM_004829中，其公开内容通过引用并入本文。本公开的某些方面提供了抗-NKp46抗体，其与人NKp46或其同源物包括但不限于哺乳动物NKp46蛋白和来自其它物种例如非人灵长类动物、食蟹猴的NKp46直系同源物结合。在整个说明书中，无论何时针对抗-NKp46结合剂例如抗体提及“增殖性疾病的治疗”或“肿瘤的治疗”或“癌症的治疗”等，均是指：a治疗增殖性疾病的方法，所述方法包括如下的步骤：以允许治疗所述疾病的剂量治疗有效量，优选以在上文和下文中被指定为优选的剂量量，向需要这种治疗的温血动物，尤其是人施用用于至少一次治疗抗-NKp46结合剂优选在药学上可接受的载体材料中；b抗-NKp46结合剂用于治疗增殖性疾病的用途或抗NKp46结合剂用在所述治疗尤其在人中的治疗中的用途；c抗-NKp46结合剂用于制备治疗增殖性疾病的药物制剂的用途，使用抗-NKp46结合剂制备用于治疗增殖性疾病的药物制剂的方法包括将抗-NKp46结合剂与药学上可接受的载体混合，或包含有效剂量的适用于治疗增殖性疾病的抗-NKp46结合剂的药物制剂；或d根据在本申请提交的国家可允许申请专利的主题的a、b和c的任意组合。术语“转谷氨酰胺酶”可与“TG酶”或“TG”互换使用，是指这样的一种酶，其能够通过肽结合的谷氨酰胺的γ-甲酰胺基与赖氨酸或结构相关的伯胺诸如氨基戊基，例如肽结合的赖氨酸的ε-氨基之间的酰基转移反应来与蛋白质交联，所述反应产生ε-γ-谷氨酰基赖氨酸异肽键。TG酶，尤其，包括细菌转谷氨酰胺酶BTG，诸如具有EC参考EC2.3.2.13蛋白质-谷氨酰胺-γ-谷氨酰转移酶的酶。当提及抗体的谷氨酰胺残基时，术语“受体谷氨酰胺残基”意指谷氨酰胺残基，其被TG酶识别并且可在TG酶作用下通过谷氨酰胺与赖氨酸或结构相关伯胺诸如氨基戊基之间的反应交联。优选地受体谷氨酰胺残基是暴露于表面的谷氨酰胺残基。术语“TG酶识别标签”是指这样的氨基酸序列，其包含受体谷氨酰胺残基，并且当在合适的条件下掺入例如，附接于多肽序列中时，被TG酶识别并且在TG酶作用下通过氨基酸序列内的氨基酸侧链与反应伴侣之间的反应而形成交联。识别标签可以是包含酶识别标签的非天然存在于多肽中的肽序列。如本文中所用，术语“癌症”和“肿瘤”定义为包含不受控制的渐进性增殖的细胞或组织的新生长。在一个具体实施方案中，在自然进程中癌症是致命的。如本文中所用，术语“抗体”是指多克隆和单克隆抗体。根据重链中恒定结构域的类型，将抗体指定为以下五大类别中的一种：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些类别中有几个类别被进一步分为亚类或同种型，诸如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等。示例性免疫球蛋白抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每一对具有一条“轻”链约25kDa和一条“重”链约50-70kDa。每条链的N-末端结构域限定了具有约100至110个或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语可变轻链VL和可变重链VH分别指代这些轻链和重链。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为“α”、“δ”、“ε”、“γ”和“μ”。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是公知的。可以容易地使用IgG，因为它们是生理环境中最常见的抗体，并且因为它们最容易在实验室环境中制备。抗体可以是单克隆抗体。特别优选的是人源化抗体、嵌合抗体、人抗体或以其他方式适合于人的抗体。“抗体”还包括本文所述抗体中的任一种的任何片段或衍生物。当在本文中使用时，术语“高变区”是指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区一般包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基例如，轻链可变结构域中的残基24-34L1、50-56L2和89-97L3以及重链可变结构域中的31-35H1、50-65H2和95-102H3；Kabat等，1991，和或来自“高变环”的那些残基例如，轻链可变结构域中的残基26-32L1、50-52L2和91-96L3以及重链可变结构域中的26-32H1、53-55H2和96-101H3；Chothia和Lesk,J.Mol.Biol1987；196:901-917。通常，该区域中氨基酸残基的编号通过Kabat等同上所述的方法进行的。诸如“Kabat位置”、“如Kabat中的可变结构域残基编号”和“根据Kabat”的短语在本文中是指用于重链可变结构域或轻链可变结构域的这种编号系统。通过使用Kabat编号系统，肽的实际线性氨基酸序列可含有对应于可变结构域的FR或CDR的缩短或至其中的插入的较少的氨基酸或额外的氨基酸。例如，重链可变结构域可在CDRH2的残基52之后包含单个氨基酸插入物根据Kabat的残基52a并且可在重链FR残基82之后包含插入残基例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等。可通过在同源区比对给定抗体的序列与“标准”Kabat编号序列来确定给定抗体的残基的Kabat编号。如本文中所用，“框架”或“FR”残基意指除了定义为CDR的那些区域之外的抗体可变结构域的区域。每个抗体可变结构域框架可被进一步细分为由CDR分隔的连续区域FR1、FR2、FR3和FR4。当抗体被描述为与特定单克隆抗体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1“竞争”时，意指所述抗体在使用重组NKp46分子或表面表达的NKp46分子的结合测定中与单克隆抗体竞争。例如，如果测试抗体在结合测定中使得8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与NKp46多肽或NKp46表达细胞的结合减少，则认为该抗体分别与68B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1“竞争”。如本文中所用，术语“亲和力”意指抗体与表位结合的强度。抗体的亲和力通过被定义为[Ab]x[Ag][Ab-Ag]的解离常数KD给出，其中[Ab-Ag]是抗体-抗原复合物的摩尔浓度，[Ab]是未结合抗体的摩尔浓度，[Ag]是未结合抗原的摩尔浓度。亲和常数Ka由1Kd定义。确定mAb的亲和力的优选方法可见于Harlow等，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,1988,Coligan等，编辑，CurrentProtocolsinImmunology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience,N.Y.,1992,1993，以及Muller,Meth.Enzymol.92:589-6011983所述参考文献通过引用整体并入本文中。本领域公知的用于确定mAb的亲和力的一种优选的标准方法是使用表面等离子体共振SPR筛选诸如通过利用BIAcoreTMSPR分析装置分析。术语“表位”是指抗原决定簇，并且是抗原上的与抗体结合的范围或区域。蛋白质表位可包含直接参与结合的氨基酸残基以及被特异性抗原结合抗体或肽有效阻断的氨基酸残基，即，抗体“足迹”内的氨基酸残基。它是复杂抗原分子上可与例如抗体或受体组合的最简单的形式或最小的结构区域。表位可以是线性表位或构象结构表位。术语“线性表位”被定义为由在氨基酸的线性序列上连续的氨基酸残基组成的表位一级结构。术语“构象或结构表位”被定义为由这样的氨基酸残基组成的表位，所述氨基酸残基并非都是连续的或者是不连续的，因此表示氨基酸线性序列中通过分子的折叠而彼此接近的分开部分二级、三级和或四级结构。构象表位取决于三维结构。因此，术语‘构象’通常可与‘结构’可互换使用。针对NKp46表达细胞的术语“耗尽”意指可以杀伤、消除、裂解或诱导这种杀伤、消除或裂解，从而对存在于样品中或受试者中的NKp46表达细胞的数量产生负面影响的过程、方法或化合物。术语“免疫缀合物”和“抗体缀合物”可互换使用，是指与另一部分例如，可检测部分、治疗剂、细胞毒性剂、抗癌剂缀合的抗原结合剂，例如抗体结合多肽或抗体。当免疫缀合物包含与治疗剂例如细胞毒性剂或抗癌剂缀合的抗原结合剂时，免疫缀合物也可称为“抗体药物缀合物”或“ADC”。术语“剂”在本文中用于表示化学化合物、化学化合物的混合物、生物大分子或由生物材料制得的提取物。术语“治疗剂”是指具有生物活性的剂。术语“毒性剂”和“细胞毒性剂”包括可以减缓、停止或逆转细胞增殖，以任何可检测的方式降低它们的活性，或者直接或间接地杀伤它们的任何化合物。细胞毒性剂可以主要通过直接干扰细胞功能导致细胞死亡，并且包括但不限于烷化剂、肿瘤坏死因子抑制剂、DNA嵌入剂、DNA小沟结合剂、微管抑制剂、激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。如本文中所用，“毒性有效载荷”是指当递送至细胞时导致细胞死亡的足量的细胞毒性剂。可通过施用足量的包含本公开的抗体或抗原结合片段和细胞毒性剂的免疫缀合物来实现毒性有效载荷的递送。通过施用足量的包含细胞毒性剂的免疫缀合物也可以实现毒性有效载荷的递送，其中所述免疫缀合物包含识别并结合本公开的抗体的第二抗体或其抗原结合片段。“人源化”或“人”抗体是指其中一种或多种人免疫球蛋白的恒定区和可变框架区与动物免疫球蛋白的结合区例如CDR融合的抗体。此类抗体被设计成维持结合区所源自的非人抗体的结合特异性，但避免针对非人抗体的免疫反应。此类抗体可获自转基因小鼠或已被“工程改造”为响应抗原攻击产生特异性人抗体的其它动物参见，例如，Green等1994NatureGenet7:13；Lonberg等1994Nature368:856；Taylor等1994IntImmun6:579，其全部教导通过引用并入本文。完全人抗体还可通过遗传或染色体转染方法，以及噬菌体展示技术来构建，所有技术都是本领域已知的参见，例如，McCafferty等1990Nature348:552-553。人抗体还可由体外活化B细胞来产生参见，例如，美国专利第5,567,610号和第5,229,275号，所述美国专利通过引用整体并入。“嵌合抗体”是这样的抗体分子，在所述抗体分子中a恒定区或其部分被改变、替换或交换，使得抗原结合部位可变区与不同或改变的类别、效应子功能和或种类的恒定区或赋予所述嵌合抗体新特性的完全不同的分子诸如酶、毒素、激素、生长因子、药物等连接；或b可变区或其部分用具有不同或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。术语“Fc结构域”、“Fc部分”和“Fc区”是指抗体重链的C末端片段，例如，人γγ重链的约氨基酸aa230至约aa450或其在其它类型的抗体重链例如，人抗体的α、δ、ε和μ或其天然存在的同种异型中的对应序列。除非另有说明，否则在整个本公开中使用普遍接受的免疫球蛋白的Kabat氨基酸编号参见Kabat等1991SequencesofProteinofImmunologicalInterest，第5版，UnitedStatesPublicHealthService,NationalInstituteofHealth,Bethesda,MD，也称为“KabatEU”。术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是本领域公知的术语，并且是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体FcR的非特异性细胞毒性细胞识别靶细胞上结合的抗体，并随后导致靶细胞的裂解。介导ADCC的非特异性细胞毒性细胞包括天然杀伤NK细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。术语“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是本领域公知的术语，并且是指分子在补体存在的情况下裂解靶标的能力。补体活化途径由补体系统的第一组分C1q和与同源抗原复合的分子例如，抗体的结合引发。可与“细胞内内化”互换使用的术语“内化”是指与使分子从细胞的细胞外表面易位到细胞的细胞内表面的过程相关联的分子、生物化学和细胞事件。负责分子的细胞内内化的过程是公知的，并且可尤其涉及，，细胞外分子诸如激素、抗体和小有机分子、膜相关分子诸如细胞表面受体以及与细胞外分子结合的膜相关分子的复合物例如，与跨膜受体结合的配体或与膜相关分子结合的抗体的内化。因此，“诱导和或增加内化”包括其中引发细胞内内化和或增加细胞内内化的速率和或程度的事件。本文中的“氨基酸修饰”是指多肽序列中的氨基酸取代、插入和或缺失。本文中的氨基酸修饰的实例是取代。本文中的“氨基酸修饰”是指多肽序列中的氨基酸取代、插入和或缺失。本文中的“氨基酸取代”或“取代”是指用另一种氨基酸替代蛋白质序列中给定位置处的氨基酸。例如，取代Y50W是指其中位置50处的酪氨酸被色氨酸取代的亲本多肽的变体。多肽的“变体”是指具有与参照多肽通常是天然或“亲本”多肽基本上相同的氨基酸序列的多肽。多肽变体可在天然氨基酸序列内的某些位置处具有一个或多个氨基酸取代、缺失和或插入。术语“分离的”、“纯化的”或“生物纯的”是指这样的材料，它基本上或大体上不含如在它的天然状态下发现的伴随它的组分。通常使用分析化学技术诸如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法来测定纯度和均质性。作为存在于制剂中的主要物质的蛋白质是基本上纯化的。本文所述的任何化合物例如，抗体可任选地被描述为分离的、纯化的或生物学纯的。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，以指代氨基酸残基的聚合物。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。当针对例如细胞或核酸、蛋白质或载体使用时，术语“重组”表示所述细胞、核酸、蛋白质或载体已通过引入异源核酸或蛋白质或改变天然核酸或蛋白质进行修饰，或表示所述细胞源自如此修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达在该细胞的天然非重组形式内没有发现的基因或表达以其它方式异常表达的、表达不足的或根本不表达的天然基因。如本文中所用，“NK细胞”，也称为“天然杀伤细胞”，是指参与非常规免疫的淋巴细胞亚群。NK细胞可借助于诸如以下的某些特征和生物特性来鉴定：人NK细胞的包括CD56和或CD16在内的特定表面抗原的表达、细胞表面上αβ或γδTCR复合物的不存在、与不能表达“自身”MHCHLA抗原的细胞结合并通过激活特定溶细胞机制杀伤所述细胞的能力、杀伤肿瘤细胞或其它表达NK激活受体的配体的患病细胞的能力，以及释放刺激或抑制免疫反应的称为细胞因子的蛋白质分子的能力。“结合”多肽或表位的抗体表示以特异性和或亲和力结合所述决定簇的抗体。产生抗NKp46抗体高变区、重链和轻链CDR、重链和轻链可变区以及包含它们的蛋白质例如，抗体将结合在细胞例如，肿瘤细胞、NK细胞等表面上表达的人和任选地其它非人灵长类动物NKp46。当在用于消除表达NKp46的肿瘤细胞例如，恶性T细胞或用于消除其它免疫细胞的疗法中使用时，所述抗体通常将会耗尽，例如，当与细胞毒性部分缀合时通过直接造成表达NKp46的肿瘤细胞死亡而耗尽，和或通过引导免疫效应细胞例如NK细胞、T细胞、巨噬细胞、ADCC、ADCP抗体依赖性细胞吞噬作用和或CDC朝向肿瘤细胞而耗尽。当在例如，用于检测、用于鉴定、用于分离，和或更一般地用于结合人和或非人灵长类动物NKp46多肽和或NKp46表达细胞例如，NK细胞的其它应用中使用时，抗体不需要耗尽。在一个实施方案中，抗体与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1中的任一种或多种竞争着与NKp46多肽结合。优选地，抗体识别NKp46多肽上基本上或大体上相同，或相同的表位或“表位位点”、与所述表位或“表位位点”结合，或对所述表位或“表位位点”具有免疫特异性。在一个实施方案中，抗体不与抗体Bab281、9E2或195314竞争着与NKp46结合据报道为阻断。本公开的抗体可通过本领域已知的多种技术产生。通常，通过用包含NKp46多肽优选人NKp46多肽的免疫原免疫非人动物优选小鼠来产生它们。NKp46多肽可包含人NKp46多肽的全长序列，或其片段或衍生物，通常为免疫原性片段，即包含暴露于表达NKp46多肽的细胞表面上的表位优选被8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体识别的表位的多肽的一部分。此类片段通常含有成熟多肽序列的至少约7个连续氨基酸，甚至更优选它的至少约10个连续氨基酸。片段通常大体上源自受体的细胞外结构域。在一个实施方案中，免疫原在通常位于细胞表面的脂质膜中包含野生型人NKp46多肽。在一个具体实施方案中，免疫原包含任选地被处理或裂解的完整细胞，特别是完整的人细胞。在另一个优选实施方案中，多肽是重组NKp46多肽。在一个具体实施方案中，免疫原包含完整的NKp46表达细胞。用抗原免疫非人哺乳动物的步骤可以以本领域公知的用于刺激小鼠产生抗体的任何方式进行参见，例如，E.Harlow和D.Lane,Antibodies:ALaboratoryManual.,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY1988，其完整公开内容通过引用并入本文。抗体还可通过从免疫球蛋白的组合文库中选择来产生，如例如在Ward等Nature,3411989第544页，其完整公开内容通过引用并入本文中公开的。一种或多种与NKp46结合，特别是与单克隆抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合至基本上或大体上相同的区域的抗体的鉴定，可使用多种可评估抗体竞争的免疫学筛选测定中的任一种来容易地确定。许多此类测定是常规实施的并且是本领域公知的参见，例如，美国专利第5,660,827号，其通过引用并入本文。例如，当待检查的测试抗体获自不同来源动物，或者甚至属于不同的Ig同种型时，可使用简单的竞争测定，其中将对照例如8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与测试抗体混合或预吸附并施加到含有NKp46多肽的样品上。基于蛋白质印迹和BIACORE分析的使用的方案适用于此类竞争研究。在某些实施方案中，将对照抗体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与不同量的测试抗体例如，约1:10或约1:100预混合一段时间，然后才施加到NKp46抗原样品上。在其它实施方案中，对照和不同量的测试抗体可在暴露于NKp46抗原样品期间简单地混合。只要能够区分结合的抗体与游离的抗体例如，通过使用分离或洗涤技术消除未结合的抗体以及区分8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与测试抗体例如，通过使用物种特异性或同种型特异性第二抗体或通过用可检测标记物特异性标记8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1，就可确定测试抗体是否减少8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与抗原的结合，从而表明测试抗体识别含有8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1的表位的残基的区域。在完全不相关的抗体不存在的情况下标记的对照抗体的结合可用作对照高值。通过将标记的8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体与完全相同类型的未标记抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1一起孵育可以获得对照低值，在所述标记的抗体和未标记的抗体中将会发生竞争并且这种竞争将会减少标记的抗体的结合。在测试测定中，在测试抗体存在的情况下标记抗体反应性的显著降低指示测试抗体识别基本上相同的区域，即，是一种与标记的8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体“交叉反应”或竞争的抗体。在约1:10与约1:100之间的任何8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1:测试抗体比率下，使8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与NKp46抗原的结合减少至少约50％，诸如至少约60％，或更优选至少约80％或90％例如，约65-100％的任何测试抗体，都被认为是与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合基本上相同的区域或决定簇的抗体。优选地，这种测试抗体将使8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与NKp46抗原的结合减少至少约90％例如，约95％。还可通过例如流式细胞术测试来评估竞争。在此种测试中，可以例如将携带有给定NKp46多肽的细胞首先与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1一起孵育，然后与用荧光染料或生物素标记的测试抗体一起孵育。如果在与饱和量的8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1一起预孵育后获得的结合为在未与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1一起预孵育的情况下通过抗体获得的结合如通过荧光平均值测量的的约80％，优选约50％，约40％或更少例如，约30％、20％或10％，则该抗体被描述为与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1竞争。或者，如果利用标记的8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体通过荧光染料或生物素在利用饱和量的测试抗体预孵育的细胞上获得的结合为在未用测试抗体预孵育的情况下获得的结合的约80％，优选约50％，约40％或更少例如，约30％、20％或10％，则所述抗体被描述为与8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1竞争。还可使用简单的竞争测定，其中将测试抗体预吸附并以饱和浓度施加到其上固定有NKp46抗原的表面。简单竞争测定中的表面优选是BIACORE芯片或其它适用于表面等离子体共振分析的介质。然后使对照抗体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1在NKp46-饱和浓度下与表面接触，并测量对照抗体的NKp46和表面结合。将对照抗体的这种结合与在测试抗体不存在的情况下对照抗体与含NKp46的表面的结合进行比较。在测试测定中，在测试抗体存在的情况下，对照抗体对含NKp46的表面的结合的显著减少表明所述测试抗体与对照抗体在NKp46表面上识别的区域基本上相同，使得测试抗体与对照抗体“交叉反应”。使对照诸如8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体与NKp46抗原的结合减少至少约30％或更多，优选约40％的任何测试抗体都可被认为是与对照例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合基本上相同的区域的抗体。优选地，这种测试抗体将使对照抗体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1与NKp46抗原的结合减少至少约50％例如，至少约60％，至少约70％或更多。应当理解，对照和测试抗体的顺序可以颠倒：即，可以首先将对照抗体结合到表面，然后在竞争测定中使测试抗体与表面接触。优选地，使对NKp46抗原具有更高亲和力的抗体首先结合至表面，因为预期对于第二抗体假设抗体发生交叉反应观察到的结合减少将具有更大的幅度。此类测定的其它实例提供于例如Saunal1995J.Immunol.Methods183:33-41其公开内容通过引用并入本文中。抗体将与来自一个或多个患有以NKp46阳性细胞表达为特征的疾病的个体即，作为使用抗-NKp46抗体的本文所述方法之一治疗的候选者的个体的NKp46表达细胞结合。因此，一旦获得特异性识别细胞上的NKp46的抗体，就可任选地测试其与NKp46阳性细胞例如，癌细胞结合的能力。特别地，在用本发明抗体之一治疗患者之前，可以任选地测试所述抗体结合取自患者的例如，血液样品或肿瘤活检物中的恶性细胞的能力，以使得所述疗法对患者有益的可能性最大。在一个实施方案中，在免疫测定中验证所述抗体以测试抗体与NKp46表达细胞例如恶性细胞结合的能力。例如，进行血液样品或肿瘤活组织检查并收集肿瘤细胞。然后使用本领域技术人员公知的标准方法评估给定抗体与细胞结合的能力。为了评估抗体与细胞的结合，可以直接或间接标记抗体。当间接标记时，通常添加标记的第二抗体。确定抗体是否在表位区域内结合可以以本领域技术人员已知的方式进行。作为这种作图表征方法的一个实例，可使用NKp46蛋白中暴露的胺基羧基的化学修饰，通过表位“足迹法”来确定抗-NKp46抗体的表位区域。这种足迹技术的一个具体实例是使用HXMS通过质谱法检测的氢-氘交换，其中发生受体和配体蛋白质酰胺质子的氢氘交换、结合和反交换，其中参与蛋白质结合的主链酰胺基团受到保护而免于反交换，因而将保持氘化。此时可通过消化性蛋白水解、快速微孔高效液相色谱分离和或电喷雾电离质谱法鉴定相关区域。参见，例如，EhringH,AnalyticalBiochemistry，第267卷2第252-259页1999Engen,J.R.和Smith,D.L.2001Anal.Chem.73,256A-265A。合适的表位鉴定技术的另一个实例是核磁共振表位作图NMR，其中通常将游离抗原和与抗原结合肽诸如抗体复合的抗原的二维NMR谱中的信号位置进行比较。通常用15N对抗原进行选择性地同位素标记，使得在NMR谱中仅看到对应于抗原的信号而看不到来自抗原结合肽的信号。源自参与与抗原结合肽相互作用的氨基酸的抗原信号的位置与游离抗原的谱相比在复合物的谱中通常会移位，并且可这样鉴定参与结合的氨基酸。参见，例如，ErnstScheringResFoundWorkshop.2004；44:149-67；Huang等，JournalofMolecularBiology，第281卷1第61-67页1998；以及Saito和Patterson,Methods.1996年6月；93:516-24。还可以使用质谱法进行表位作图表征。蛋白酶消化技术也可用于表位作图和鉴定的背景中。抗原决定簇相关区域序列可通过如下方式来确定：例如通过针对NKp46以约1:50的比率使用胰蛋白酶进行蛋白酶消化或在pH7-8下进行on消化，接着进行肽鉴定的质谱MS分析。随后可通过比较经历胰蛋白酶消化的样品和与抗体一起孵育并然后经历例如胰蛋白酶的消化从而显露结合剂的足迹的样品，来鉴定被抗-NKp46结合剂保护而免受胰蛋白酶切割的肽。其它酶如胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶等也可用于或可替代地可用于类似的表位表征方法。此外，酶促消化可以提供快速方法来分析潜在的抗原决定簇序列是否在NKp46多肽的未暴露于表面的、因而在免疫原性抗原性方面最可能不相关的区域内。定点诱变是用于阐明结合表位的另一种技术。例如，在“丙氨酸扫描”中，将蛋白质区段内的每个残基用丙氨酸残基替代，并测量结合亲和力的结果。如果突变导致结合亲和力显著减小，则它很可能参与结合。对结构表位具有特异性的单克隆抗体即，不结合展开的蛋白的抗体可用于验证丙氨酸替代不影响蛋白质的总体折叠。参见，例如，Clackson和Wells,Science1995；267:383–386；以及Wells,ProcNatlAcadSciUSA1996；93:1–6。还可将电子显微镜术用于表位“足迹”法。例如，Wang等，Nature1992；355:275-278使用冷冻电子显微镜术三维图像重建和X射线晶体学的协调应用来确定Fab片段在天然豇豆花叶病毒的衣壳表面上的物理足迹。用于表位评价的其它形式的“无标记”测定包括表面等离子体共振SPR，BIACORE和反射干涉光谱法RifS。参见，例如，等，JournalOfMolecularRecognition1990；3:208-14；Nice等，J.Chromatogr.1993；646:159–168；Leipert等，Angew.Chem.Int.Ed.1998；37:3308–3311；等，BiosensorsandBioelectronics2002；17:937-944。还应注意，可在一种或多种本文所述的示例性竞争测定中鉴定与抗体结合相同或基本相同的表位的抗体。在脊椎动物或细胞中免疫和产生抗体后，可以进行特定的选择步骤以分离如权利要求所述的抗体。就这一点而言，在具体的实施方案中，提供了产生此类抗体的方法，其包括：a用包含NKp46多肽的免疫原免疫非人哺乳动物；以及b从所述经免疫的动物制备抗体；以及c从步骤b中选择能够结合NKp46的抗体。在一个方面，提供了一种抗体，其对于人NKp46具有如通过例如表面等离子体共振SPR筛选诸如通过用BIAcoreTMSPR分析装置分析确定的以下平均解离常数KD任选地对于单价结合：小于1x10-8M，任选地小于1x10-9M。在更具体的示例性方面，提供了抗-NKp46抗体，其对于NKp46具有约1x10-8M至约1x10-10M，或约1x10-9M至约1x10-11M的的KD。抗体的特征可以例如在于平均KD不大于约即，亲和力好于100、60、10、5或1纳摩尔，优选亚纳摩尔或任选地不大于约500、200、100或10皮摩尔。KD可以例如通过将重组产生的人NKp46蛋白固定在芯片表面上，然后施加溶液形式的待测抗体来确定。在一个实施方案中，该方法还包括步骤d：从b选择能够与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1竞争着与NKp46结合的抗体。在任何实施方案的一个方面，根据本发明方法制备的抗体是单克隆抗体。在另一方面，用于产生抗体的非人动物是哺乳动物，诸如啮齿动物、牛、猪、家禽、马、兔、山羊或绵羊。本发明的抗体可以任选地被指定为除抗体195314、9E2或Bab281，或它们的衍生物例如包含它们各自的重链和轻链CDR或者全部或部分抗原结合区的衍生物中的任一种之外的抗体。从杂交瘤中分离编码结合NKp46多肽上存在的表位的抗体的DNA，并将其置于合适的表达载体中以转染到合适的宿主中。然后将宿主用于重组产生抗体或其变体，诸如该单克隆抗体的人源化形式、该抗体的活性片段、包含该抗体的抗原识别部分的嵌合抗体，或包含可检测部分的形式。编码单克隆抗体例如抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1的DNA可使用常规程序例如，通过使用能够与编码鼠抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针容易地分离和测序。在一个方面提供了编码本文任何实施方案的抗NKp46抗体的重链或轻链的核酸。一旦分离出DNA，可将DNA置于表达载体中，然后将所述表达载体转染至宿主细胞诸如大肠杆菌E.coli细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢CHO细胞或骨髓瘤细胞中，以在所述重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成，所述宿主细胞在不进行所述转染的情况下不产生免疫球蛋白。如本说明书中其它地方所述，可以修饰此类DNA序列以用于例如以下的许多目的中的任一种：用于人源化抗体，产生片段或衍生物，或用于修饰例如抗原结合部位中的抗体序列以便优化抗体的结合特异性。在一个实施方案中，提供了编码抗体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1的轻链和或重链的分离的核酸序列，以及包含例如，在其基因组中包含这种核酸的重组宿主细胞。一旦获得抗体，一般就可评估其活性。例如，可测试抗体抑制表达NKp46的靶细胞的增殖和或导致其消除的能力。例如，可以例如，如本文进一步描述的，将抗体与细胞毒性剂缀合，并评估其耗尽靶细胞的能力。在另一个实例中，评估了诱导针对表达NKp46的靶细胞的ADCC、ADCP或CDC的能力。CDC、ADCP和ADCC的测试可以通过包括本文中的实验实施例中描述的那些测定法在内的各种测定法来进行和确定。ADCC的测试通常涉及评估细胞介导的细胞毒性，其中具有结合的抗-NKp46抗体的表达NKp46的靶细胞例如，癌细胞或其它NKp46表达细胞在没有补体参与的情况下被效应细胞例如，携带有Fc受体的白细胞识别。不表达NKp46抗原的细胞可任选地用作对照。通过测量细胞因子产生例如，IFN-γ产生的增加或细胞毒性标志物例如，CD107动员来评估NK细胞细胞毒性的激活。与对照抗体例如，不与NKp46结合的抗体、具有鼠恒定区的抗-NKp46抗体相比，诱导ADCC的抗体在靶标细胞NKp46表达细胞存在的情况下，通常会诱导细胞因子产生的增加、细胞毒性标志物的表达，或至少50％、80％、100％的靶细胞裂解。在另一个实例中，例如，在铬释放测定中检测靶细胞的裂解，抗体可以例如诱导至少40％或50％的靶细胞裂解。测试免疫缀合物耗尽靶细胞的能力可以通过本领域已知的许多测定法中的任一种进行，以确定免疫缀合物是否对所需细胞系发挥细胞抑制或细胞毒性作用。例如，免疫缀合物的细胞毒性或细胞抑制活性可以通过如下步骤测量：将表达NKp46的哺乳动物细胞暴露在细胞培养基中；将细胞培养约6小时至约5天的一段时间；以及测量细胞活力。基于细胞的体外测定可用于测量活力增殖、细胞毒性以及细胞凋亡的诱导半胱天冬酶活性。细胞活力可以通过评估例如如本文实施例中所描述的培养物中的NKp46表达细胞的ATP产生来测量。在其它实例中，可使用胸苷掺入测定。例如，可将以5,000个细胞孔的密度接种在96孔板中的表达NKp46的癌细胞培养72小时，并在72小时的最后8小时期间将其暴露于0.5μCi的3H胸苷。在免疫缀合物存在和不存在的情况下测量3H胸苷在培养物的细胞中的掺入。在确定细胞毒性的另一个实例中，可以测量坏死或细胞凋亡程序性细胞死亡。坏死通常伴随着质膜通透性增加；细胞肿胀以及质膜破裂。细胞凋亡通常以膜起泡、细胞质浓缩和内源内切核酸酶活化为特征。这些对癌细胞的影响中的任一种的确定表明免疫缀合物可用于治疗癌症。细胞活力还可通过确定细胞对染料诸如中性红、台盼蓝或ALAMARTM蓝的摄取来测量。在这种测定中，将细胞在含有染料的培养基中孵育，洗涤细胞，并用分光光度法测量反映染料细胞摄取的剩余染料。蛋白质结合染料磺酰罗丹明BSRB也可用于测量细胞毒性。或者，通过检测活细胞而非死细胞，将四唑盐诸如MTT或WST用于哺乳动物细胞存活和增殖的定量比色测定。可以通过测量例如DNA片段化来定量细胞凋亡。用于定量地体外确定DNA片段化的商业光度法是可获得的。此类测定的实例包括TUNEL其检测片段化DNA中标记的核苷酸的掺入和基于ELISA的测定。细胞凋亡还可通过测量细胞的形态变化来确定。例如，与坏死一样，质膜完整性的丧失可通过测量某些染料例如，荧光染料诸如，例如吖啶橙或溴化乙锭的摄取来确定。还可用DNA染料例如，吖啶橙、溴化乙锭或碘化丙锭标记细胞，并观察细胞中染色质沿着内核膜的凝聚和边缘化。用于确定细胞凋亡的其他可被测量的形态变化包括例如胞质凝结、膜泡增多、细胞收缩。可以在培养物的附着和“漂浮”区室中测量凋亡细胞的存在。例如，这两个区室都可通过如下方式收集：除去上清液，对附着的细胞进行胰蛋白酶处理，在离心洗涤步骤例如，在2000rpm下10分钟后将制备物组合在一起，并检测细胞凋亡例如，通过测量DNA片段化来检测细胞凋亡。参见，例如，Piazza等，1995,CancerResearch55:3110-16。抗体表位在一个实施方案中，所述抗体与抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合相同或基本相同的表位。在一个实施方案中，所述抗体与NKp46的表位结合，所述表位与被抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合的表位至少部分重叠，或包括其中的至少一个残基。可将被抗体结合的残基指定为存在于NKp46多肽的表面上，例如存在于细胞表面上表达的NKp46多肽中。在另一个实施方案中，所述抗体结合这样的表位，所述表位与对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基100-187，例如残基101至118或101至105或100至105、残基150至169、残基135至151或133至151和或残基178至187或177至187的区段至少部分重叠或包含其中的至少一个残基。在一个实施方案中，所述表位的所有关键残基位于对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基100-187的区段中，或位于所述NKp46多肽的残基101至118或101至105或100至105、残基150至169、残基135至151或133至151和或残基178至187或177至-187中。在一个实施方案中，所述抗体结合这样的表位，所述表位包含对应于SEQIDNO:70的Nkp46多肽的残基100-187、残基101至118或101至105或100至105、残基150至169、残基135至151或133至151或残基178至187或177至187的区段中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基。在另一个实施方案中，所述抗体结合这样的表位，所述表位包含对应于SEQIDNO:70的NKp46多肽的残基101-118或100-105或101-105的区段中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基以及对应于所述NKp46多肽的残基150-169的区段中的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基。应当理解，参考SEQIDNO:70的NKp46氨基酸序列指出的氨基酸残基和或区段也可以可替代地被表达为参考SEQIDNO:1的NKp46氨基酸序列。例如：SEQIDNO:70的残基100-118对应于SEQIDNO:1的残基121-139；SEQIDNO:70的残基101-118对应于SEQIDNO:1的残基122-139；SEQIDNO:70的残基101-105对应于SEQIDNO:1的残基122-126；SEQIDNO:70的残基100-105对应于SEQIDNO:1的残基121-126；SEQIDNO:70的残基133-151对应于SEQIDNO:1的残基154-172；SEQIDNO:70的残基135-151对应于SEQIDNO:1的残基156-172；SEQIDNO:70的残基150-169对应于SEQIDNO:1的残基171-190；SEQIDNO:70的残基177-187对应于SEQIDNO:1的残基198-208；SEQIDNO:70的残基178-187对应于SEQIDNO:1的残基199-208。在另一个实施方案中，本公开的抗体或剂与具有氨基酸序列DTPTLSVHPGPEVISGEKSEQIDNO:71的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。任选地，本公开的抗体或剂还与具有氨基酸序列VQAEFPLGPVTTAHRGTYRCSEQIDNO:72的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在另一个实施方案中，本公开的抗体或剂与具有氨基酸序列DTPTLSEQIDNO:73的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。任选地，本公开的抗体或剂还与具有氨基酸序列VQAEFPLGPVTTAHRGTYRCSEQIDNO:72的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在另一个实施方案中，本公开的抗体或剂与具有氨基酸序列VQAEFPLGPVTTAHRGTYRCSEQIDNO:72的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在任何实施方案中，本公开的抗体或剂可以任选地还与具有氨基酸序列WSFPSEPVKLSEQIDNO:74的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在任何实施方案中，本公开的抗体或剂可以任选地还与具有氨基酸序列AWSFPSEPVKLSEQIDNO:75的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在任何实施方案中，本公开的抗体或剂可以任选地还与具有氨基酸序列LKEGRSSHVQRGYGKVQSEQIDNO:76的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在任何实施方案中，本公开的抗体或剂可以任选地还与具有氨基酸序列LLLKEGRSSHVQRGYGKVQSEQIDNO:77的NKp46多肽区段内的一个或多个氨基酸残基结合。在任何实施方案中，本公开的抗体或剂可以结合存在于NKp46多肽表面上的一个或多个氨基酸，所述氨基酸在被本发明的抗-NKp46抗体结合的表位内。在一个这样的实施方案中，所述抗体结合选自由以下组成的组的1个、2个或3个残基：SEQIDNO:70的NKp46多肽的101、102和104SEQIDNO:1的多肽的残基122、123和125。在一个实施方案中，所述抗体结合选自由以下组成的组的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基：SEQIDNO:70的NKp46多肽的V150、Q151、E153、P155、G157、P158、T160、T161、A162、H163、R164、T166和R168SEQIDNO:1的多肽的残基171、172、174、176、179、181、182、183、184、185、187和189。任选地，所述抗体还结合选自由以下组成的组的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基：SEQIDNO:70的NKp46多肽的Y100、D101、T102和T104。在一个实施方案中，所述抗体结合选自由以下组成的组的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基：SEQIDNO:70的NKp46多肽的D101、T102、T104、S106、H108、P109、P111、E112、I114、S115、G116、E117、K118、V150、Q151、E153、P155、G157、P158、T160、T161、A162、H163、R164、T166和R168。在另一个实施方案中，所述抗体结合选自由以下组成的组的1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或更多个残基：SEQIDNO:70的NKp46多肽的D101、T102、T104、V150、Q151、E153、P155、G157、P158、T160、T161、A162、H163、R164、T166和R168。在一个方面，提供了一种抗-NKp46抗体，其与在选自由以下组成的组的一个、两个或三个残基处具有突变的NKp46多肽的结合减少：参考SEQIDNO:70的101、102和104SEQIDNO:1的多肽的残基122、123和125。在一个方面，提供了一种抗-NKp46抗体，其与在选自由以下组成的组的一个、两个或三个或更多个或全部残基处具有突变的NKp46多肽的结合减少：参考SEQIDNO:70的V150、Q151、E153、P155、G157、P158、T160、T161、A162、H163、R164、T166和R168SEQIDNO:1的多肽的残基171、172、174、176、179、181、182、183、184、185、187和189。在一个方面，提供了一种抗-NKp46抗体，其与在选自由以下组成的组的一个、两个或三个或更多个或全部残基处具有突变的NKp46多肽的结合减少：参考SEQIDNO:70的D101、T102、T104、S106、H108、P109、P111、E112、I114、S115、G116、E117、K118、V150、Q151、E153、P155、G157、P158、T160、T161、A162、H163、R164、T166和R168。在一个方面，提供了一种抗-NKp46抗体，其与在选自由以下组成的组的一个、两个或三个或更多个或全部残基处具有突变的NKp46多肽的结合减少：参考SEQIDNO:70的D101、T102、T104、V150、Q151、E153、P155、G157、P158、T160、T161、A162、H163、R164、T166和R168。在一个方面，提供了一种抗-NKp46抗体，其与在选自由以下组成的组的一个、两个或三个或全部、更多个残基处具有突变的NKp46多肽的结合减少：参考SEQIDNO:70的F180、P181、E183、P184和K186SEQIDNO:1的多肽的残基201、202、204、205和207。在另一个方面，提供了一种抗-NKp46抗体，其与在选自由以下组成的组的一个、两个、三个或全部、更多个残基处具有突变的NKp46多肽的结合减少：参考SEQIDNO:70的E137、G138、R139、S140、S141、H142、Q144、R145、Y147、G148、K149、V150和Q151SEQIDNO:1的多肽的残基158、159、160、161、162、163、165、166、168、169、170、171和172。可测量抗-NKp46抗体与用NKp46突变体转染的细胞的结合，并将其与抗-NKp46抗体结合野生型NKp46多肽例如，SEQIDNO:1或SEQIDNO:70的能力进行比较。抗-NKp46抗体与突变型NKp46多肽之间的结合的减少意味着存在结合亲和力的减小例如，如通过已知的方法诸如表达特定突变体的细胞的FACS测试，或通过与突变型多肽的结合的Biacore测试测量的和或抗-NKp46抗体的总结合能力的降低例如，如通过抗-NKp46抗体浓度与多肽浓度的曲线中Bmax的减小所证明的。结合的显著减少表明突变的残基直接参与与抗-NKp46抗体的结合，或者当抗-NKp46抗体结合至NKp46时突变的残基紧靠结合蛋白。在一些实施方案中，结合的显著减少意味着抗-NKp46抗体与突变NKp46多肽之间的结合亲和力和或能力相对于所述抗体与野生型NKp46多肽之间的结合降低大于40％、大于50％、大于55％、大于60％、大于65％、大于70％、大于75％、大于80％、大于85％、大于90％或大于95％。在某些实施方案中，结合减少至可检测限以下。在一些实施方案中，当抗-NKp46抗体与突变型NKp46多肽的结合小于在抗-NKp46抗体与野生型NKp46多肽之间观察到的结合的50％例如，小于45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％或10％时，证明结合显著减少。在一些实施方案中，提供了对突变型NKp46多肽表现出显著较低的结合的抗-NKp46抗体，其中包含被抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1结合的氨基酸残基的区段中的残基被不同的氨基酸取代。抗体CDR序列抗体8B6A抗体8B6A的重链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:3，轻链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:4。在具体实施方案中，提供了与单克隆抗体8B6A结合大体上相同的表位或决定簇的抗体；任选地，所述抗体包含抗体8B6A的高变区。在本文中的任何实施方案中，抗体8B6A可以以它的氨基酸序列和或编码它的核酸序列为特征。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含8B6A的Fab或Fab'2部分。还提供了包含8B6A的重链可变区的单克隆抗体。根据一个实施方案，单克隆抗体包含8B6A的重链可变区的三个CDR。还提供了单克隆抗体，其还包含8B6A的可变轻链可变区或8B6A的轻链可变区的一个、两个或三个CDR。任选地，所述轻链或重链CDR中的任一个或多个可含有一个、两个、三个、四个或五个或更多个氨基酸修饰例如，取代、插入或缺失。任选地，提供了一种抗体，其中包含抗体8B6A的部分或全部抗原结合区的任何轻链和或重链可变区与人IgG类型的免疫球蛋白恒定区，任选地人恒定区，任选地人IgG1或IgG3同种型融合。在另一方面，提供了一种抗体，其中所述抗体包含：8B6A的HCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6A的HCDR2区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6A的HCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6A的LCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6A的LCDR2区域，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6A的LCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被删除或被不同的氨基酸取代。HCDR1、2、3和LCDR1、2、3序列可以任选地被指定为全部或每个独立地为Kabat编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、Chotia编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、IMGT编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的，或任何其它合适的编号系统的那些序列。抗体8B6B抗体8B6B的重链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:3，轻链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:21。抗体8B6B和8B6A共享相同的重链但与不同的轻链相关联。在具体实施方案中，提供了与单克隆抗体8B6B结合大体上相同的表位或决定簇的抗体；任选地，所述抗体包含抗体8B6B的高变区。在本文中的任何实施方案中，抗体8B6B可以以它的氨基酸序列和或编码它的核酸序列为特征。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含8B6B的Fab或Fab'2部分。还提供了包含8B6B的重链可变区的单克隆抗体。根据一个实施方案，单克隆抗体包含8B6B的重链可变区的三个CDR。还提供了单克隆抗体，其还包含8B6B的可变轻链可变区或8B6B的轻链可变区的一个、两个或三个CDR。任选地，所述轻链或重链CDR中的任一个或多个可含有一个、两个、三个、四个或五个或更多个氨基酸修饰例如，取代、插入或缺失。任选地，提供了一种抗体，其中包含抗体8B6B的部分或全部抗原结合区的任何轻链和或重链可变区与人IgG类型的免疫球蛋白恒定区，任选地人恒定区，任选地人IgG1或IgG3同种型融合。在另一方面，提供了一种抗体，其中所述抗体包含：8B6B的HCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6B的HCDR2区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6B的HCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6B的LCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6B的LCDR2区域，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；8B6B的LCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被删除或被不同的氨基酸取代。HCDR1、2、3和LCDR1、2、3序列可以任选地被指定为全部或每个独立地为Kabat编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、Chotia编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、IMGT编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的或任何其它合适的编号系统的那些序列。抗体9H11A抗体9H11A的重链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:29，轻链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:30。在具体实施方案中，提供了与单克隆抗体9H11A结合大体上相同的表位或决定簇的抗体；任选地，所述抗体包含抗体9H11A的高变区。在本文中的任何实施方案中，抗体9H11A可以以它的氨基酸序列和或编码它的核酸序列为特征。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体含有9H11A的Fab或Fab'2部分。还提供了包含9H11A的重链可变区的单克隆抗体。根据一个实施方案，单克隆抗体包含9H11A的重链可变区的三个CDR。还提供了单克隆抗体，其还包含9H11A的可变轻链可变区或9H11A的轻链可变区的一个、两个或三个CDR。任选地，所述轻链或重链CDR中的任一个或多个可含有一个、两个、三个、四个或五个或更多个氨基酸修饰例如，取代、插入或缺失。任选地，提供了一种抗体，其中包含抗体9H11A的部分或全部抗原结合区的任何轻链和或重链可变区与人IgG类型的免疫球蛋白恒定区，任选地人恒定区，任选地人IgG1或IgG3同种型融合。在另一方面，提供了一种抗体，其中所述抗体包含：9H11A的HCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11A的HCDR2区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11A的HCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11A的LCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11A的LCDR2区域，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11A的LCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被删除或被不同的氨基酸取代。HCDR1、2、3和LCDR1、2、3序列可以任选地被指定为全部或每个独立地为Kabat编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、Chotia编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、IMGT编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的或任何其它合适的编号系统的那些序列。抗体9H11B抗体9H11B的重链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:29，轻链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:47。抗体9H11B和9H11A共享相同的重链但与不同的轻链相关联。在具体实施方案中，提供了与单克隆抗体9H11B结合大体上相同的表位或决定簇的抗体；任选地，所述抗体包含抗体9H11B的高变区。在本文中的任何实施方案中，抗体9H11B可以以它的氨基酸序列和或编码它的核酸序列为特征。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体含有9H11B的Fab或Fab'2部分。还提供了包含9H11B的重链可变区的单克隆抗体。根据一个实施方案，单克隆抗体包含9H11B的重链可变区的三个CDR。还提供了单克隆抗体，其还包含9H11B的可变轻链可变区或9H11B的轻链可变区的一个、两个或三个CDR。任选地，所述轻链或重链CDR中的任一个或多个可含有一个、两个、三个、四个或五个或更多个氨基酸修饰例如，取代、插入或缺失。任选地，提供了一种抗体，其中包含抗体9H11B的部分或全部抗原结合区的任何轻链和或重链可变区与人IgG类型的免疫球蛋白恒定区，任选地人恒定区，任选地人IgG1或IgG3同种型融合。在另一方面，提供了一种抗体，其中所述抗体包含：9H11B的HCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11B的HCDR2区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11B的HCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11B的LCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11B的LCDR2区域，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；9H11B的LCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被删除或被不同的氨基酸取代。HCDR1、2、3和LCDR1、2、3序列可以任选地被指定为全部或每个独立地为Kabat编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、Chotia编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、IMGT编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的，或任何其它合适的编号系统的那些序列。抗体17E1抗体17E1的重链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:55，轻链可变区的氨基酸序列列示为SEQIDNO:56。在具体实施方案中，提供了与单克隆抗体17E1结合大体上相同的表位或决定簇的抗体；任选地，所述抗体包含抗体17E1的高变区。在本文中的任何实施方案中，抗体17E1可以以它的氨基酸序列和或编码它的核酸序列为特征。在一个优选实施方案中，所述单克隆抗体包含17E1的Fab或Fab'2部分。还提供了包含17E1的重链可变区的单克隆抗体。根据一个实施方案，单克隆抗体包含17E1的重链可变区的三个CDR。还提供了单克隆抗体，其还包含17E1的可变轻链可变区或17E1的轻链可变区的一个、两个或三个CDR。任选地，所述轻链或重链CDR中的任一个或多个可含有一个、两个、三个、四个或五个或更多个氨基酸修饰例如，取代、插入或缺失。任选地，提供了一种抗体，其中包含抗体17E1的部分或全部抗原结合区的任何轻链和或重链可变区与人IgG类型的免疫球蛋白恒定区，任选地人恒定区，任选地人IgG1或IgG3同种型融合。在另一方面，提供了一种抗体，其中所述抗体包含：17E1的HCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；17E1的HCDR2区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；17E1的HCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；17E1的LCDR1区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；17E1的LCDR2区域，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被不同的氨基酸取代；17E1的LCDR3区，其包含表A中所示的氨基酸序列或其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列，任选地其中这些氨基酸中的一个或多个可被删除或被不同的氨基酸取代。HCDR1、2、3和LCDR1、2、3序列可以任选地被指定为全部或每个独立地为Kabat编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、Chotia编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的、IMGT编号系统的那些序列如表A中针对每个CDR所示的，或任何其它合适的编号系统的那些序列。在本文中的任何实施方案的另一个方面，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1的重链和轻链可变区中的任一个和或重链和轻链的CDR1、2和3中的任一个可根据其至少4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个连续氨基酸的序列来表征，和或被表征为具有与相应的SEQIDNO中列出的一个或多个特定可变区、CDR或CDR的组共享至少50％、60％、70％、80％、85％、90％或95％序列同一性的氨基酸序列。在抗体例如8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1中的任一种中，指定的可变区和CDR序列可包含序列修饰，例如取代1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或更多个序列修饰。在一个实施方案中，重链和轻链的CDR1、2和或3包含一个、两个、三个或更多个氨基酸取代，其中被取代的残基是存在于人类起源序列中的残基。在一个实施方案中，所述取代是保守修饰。保守序列修饰是指不会显著影响或改变含有所述氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。此类保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。可通过本领域已知的标准技术，诸如定点诱变和PCR介导的诱变来将修饰引入抗体。保守氨基酸取代通常是其中氨基酸残基被带有具有相似物理化学性质的侧链的氨基酸残基替代的那些取代。指定的可变区和CDR序列可包含一个、两个、三个、四个或更多个氨基酸插入、缺失或取代。在进行取代的情况下，优选的取代是保守修饰。本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、酸性侧链例如，天冬氨酸、谷氨酸、不带电荷的极性侧链例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、非极性侧链例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、β-分支侧链例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和芳香族侧链例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸的氨基酸。因此，抗体CDR区内的一个或多个氨基酸残基可用来自相同侧链家族的其它氨基酸残基替换，并且可以使用本文所述的测定测试经改变的抗体的保留功能即，本文所述的特性。当在两个或更多个多肽的序列之间的关系中使用时，术语“同一性”或“同一的”是指如通过两个或更多个氨基酸残基的串之间的匹配数目确定的多肽之间的序列相关性程度。“同一性”测量通过间隙对齐如果有的话的两个或更多个序列中较小的序列之间相同匹配的百分比，所述间隙对齐由特定数学模型或计算机程序即，“算法”解决。可通过已知方法容易地计算相关多肽的同一性。此类方法包括但不限于ComputationalMolecularBiology,Lesk,A.M.，编辑，OxfordUniversityPress,NewYork,1988；Biocomputing:InformaticsandGenomeProjects,Smith,D.W.，编辑，AcademicPress,NewYork,1993；ComputerAnalysisofSequenceData，第1部分，Griffin,A.M.，和Griffin,H.G.，编辑，HumanaPress,NewJersey,1994；SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinje,G.,AcademicPress,1987；SequenceAnalysisPrimer,Gribskov,M.和Devereux,J.,eds.,M.StocktonPress,NewYork,1991以及Carillo等，SIAMJ.AppliedMath.48,10731988中描述的那些方法。用于确定同一性的优选方法被设计成给出所测试的序列之间的最大匹配。确定同一性的方法描述于公开可用的计算机程序中。用于确定两个序列之间的同一性的优选计算机程序方法包括GCG程序包，包括GAPDevereux等，Nucl.Acid.Res.12,3871984；GeneticsComputerGroup,UniversityofWisconsin,Madison,Wis.、BLASTP、BLASTN和FASTAAltschul等，J.Mol.Biol.215,403-4101990。BLASTX程序可从国家生物技术信息中心NCBI和其它来源BLASTManual,Altschul等NCBNLMNIHBethesda,Md.20894；Altschul等，同上公开获得。公知的SmithWaterman算法也可用于确定同一性。根据AbMOxfordMolecular的AbM抗体建模软件定义、Kabat和Chothia定义系统的CDR的序列已概述于下表A中。抗体可变区的序列相应地列于下表B中如果存在前导序列，则任何抗体链可被指定为始于紧接前导序列末端的氨基酸位置，并且每个CDR加有下划线。在本文中的任何实施方案中，可以指定VL或VH序列或对其进行编号，以包含或缺少信号肽或其任何部分。在一个实施方案中，所述抗体属于人IgG1或IgG3同种型。在一个实施方案中，抗体是保留其结合和或功能特性的抗体片段。表A表B片段和衍生物抗体的片段和衍生物除非另有说明或与上下文明显矛盾，否则其涵盖于本申请中使用的术语“抗体antibody”或“抗体antibodies”内，优选地8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1样抗体，可通过本领域已知的技术产生。“片段”包含完整抗体的一部分，一般是抗原结合部位或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、Fab'-SH、Fab'2和Fv片段；双链抗体；作为具有由一个不间断的连续氨基酸残基序列组成的一级结构的多肽的任何抗体片段在本文中称为“单链抗体片段”或“单链多肽”，所述抗体片段包括但不限于1单链Fv分子，2仅含有一个轻链可变结构域的单链多肽，或所述单链多肽的含有轻链可变结构域的三个CDR而无相关联的重链部分的片段，以及3仅含有一个重链可变区的单链多肽，或所述单链多肽的含有重链可变区的三个CDR而无相关联的轻链部分的片段；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。尤其包括纳米抗体、结构域抗体、单结构域抗体或“dAb”。可使用标准方法获得本发明抗体的片段。例如，可根据常规技术，通过蛋白酶消化分离的抗体产生Fab或Fab'2片段。应当理解，可使用已知方法修饰免疫反应性片段，例如以减缓体内清除并获得更期望的药代动力学特征谱，该片段可以用聚乙二醇PEG修饰。或者，可以修饰产生抗体的杂交瘤的DNA以编码片段。然后将经修饰的DNA插入到表达载体中并用于转化或转染合适的细胞，然后所述细胞表达所需片段。在某些实施方案中，产生抗体的杂交瘤的DNA可以在插入到表达载体中之前通过例如如下方式进行修饰：通过用人重链和轻链恒定结构域的编码序列替代同源非人序列，或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或部分与免疫球蛋白编码序列共价连接。以此方式，制备具有原始抗体的结合特异性的“嵌合”或“杂交”抗体。通常，抗体的恒定结构域被此类非免疫球蛋白多肽所取代。在一个实施方案中，对抗体进行人源化。抗体的“人源化”形式是特定的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链，或它们的片段诸如抗体的Fv、Fab、Fab′、Fab′2或其它抗原结合子序列，其含有源自鼠免疫球蛋白的最小序列。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白受体抗体，其中来自受体的互补决定区CDR的残基被来自原始抗体供体抗体的CDR的残基替代，同时保持原始抗体的期望特异性、亲和力和能力。在一些情况下，所述人免疫球蛋白的Fv框架残基也可被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包含既不存在于受体抗体中、也不存在于输入的CDR或框架序列中的残基。进行这些修饰以进一步改进和优化抗体性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个通常两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的CDR区对应于原始抗体的那些CDR区，并且全部或基本上全部的FR区为人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区Fc的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区Fc的至少一部分。关于进一步的细节，参见Jones等，Nature,321，第522页1986；Reichmann等，Nature,332，第323页1988；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2，第593页1992；VerhoeyenetScience,239，第1534页；以及美国专利第4,816,567号，所述文献的完整公开内容通过引用并入本文。制备人源化抗体时使用的人轻链和重链可变结构域的选择对于减弱抗原性非常重要。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知人可变结构域序列的整个文库筛选抗体可变结构域的序列。然后接受最接近小鼠的序列的人序列作为人源化抗体的人框架FRSims等，J.Immunol.151，第2296页1993；Chothia和Lesk,J.Mol.196,1987，第901页。另一种方法使用来自特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于几种不同的人源化抗体Carter等，PNAS89，第4285页1992；Presta等，J.Immunol.,151，第2623页1993。还重要的是，在保留抗体对NKp46受体的高亲和力和其它有利的生物学特性的情况下将抗体人源化。为实现这一目标，根据优选方法，使用亲本和人源化序列的三维模型，通过亲本序列和各种概念人源化产物的分析过程制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型是通常可获得的且是本领域技术人员所熟悉的。说明且展示选定的候选免疫球蛋白序列的可能三维结构的计算机程序是可获得的。对这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中的可能作用，即对影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基的分析。这样，可从共有序列和输入序列中选择和组合FR残基，以便获得所需的抗体特征，诸如增加的对一种或多种靶抗原的亲和力。一般而言，CDR残基直接且最大幅度地参与影响抗原结合。在一个实例中，人源化抗体链的FR衍生自与非人供体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体的可变区具有至少约60％总序列同一性，优选至少约80％总体序列同一性的人可变区。任选地，人源化重链和或轻链可变区与非人供体例如，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1抗体的相应重链和或轻链可变区共享至少约60％、70％或80％总体序列同一性。制备“人源化”单克隆抗体的另一种方法是使用XenoMouseAbgenix,Fremont,CA作为用于免疫的小鼠。XenoMouse是其免疫球蛋白基因已被功能性人免疫球蛋白基因替代的鼠宿主。因此，由这种小鼠产生的抗体或在由这种小鼠的B细胞制成的杂交瘤中产生的抗体已被人源化。XenoMouse在美国专利第6,162,963号中有描述，所述专利通过引用整体并入本文。还可根据各种其它技术，诸如通过使用经工程改造成表达人抗体库的其它转基因动物用于免疫Jakobovitz等，Nature3621993255，或通过使用噬菌体展示方法选择抗体库来产生人抗体。此类技术是本领域技术人员已知的，并且可以从如本申请中公开的单克隆抗体开始实施。还可将抗体衍生化为“嵌合”抗体免疫球蛋白，其中一个或多个重轻链的一部分与原始抗体中的相应序列同一或同源，而所述一个或多个链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的相应序列同一或同源，只要它们表现出所需生物活性和结合特异性即可Cabilly等，同上；Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,第6851页1984。抗-NKp46抗体分子可以例如以包含与可检测剂缀合的抗-NKp46抗体的抗-NKp46免疫缀合物的形式用来检测表达NKp46的细胞。可用于对抗体或抗体部分进行衍生化或进行标记的有用的可检测剂包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、荧光发射金属原子例如铕Eu以及其它镧系元素和放射性物质上述。示例性荧光可检测剂包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、5-二甲胺-1-萘磺酰氯、藻红蛋白等。还可用可检测的酶诸如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等对抗体进行衍生化。当用可检测的酶对抗体进行衍生化时，它可通过添加所述酶用来产生可检测的反应产物的额外试剂来检测。例如，当存在可检测试剂辣根过氧化物酶时，加入过氧化氢和二氨基联苯胺会产生可检测的有色反应产物。抗体还可用辅基例如，链霉抗生物素蛋白生物素和抗生物素蛋白生物素进行衍生化。例如，抗体可用生物素进行衍生化，并且可通过间接测量抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白结合来进行检测。合适的荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的实例包括荧光素酶、萤光素和水母发光蛋白。或者，抗-NKp46抗体可以与结合抗-NKp46抗体的第二抗体缔合，其中用可检测标记物对第二抗体进行衍生化；使所述第二抗体与抗-NKp46抗体在体外或体内接触结合，从而使得抗-NKp46能够用作标记的抗体。当本公开的抗体用于诊断目的时，与可检测部分的缀合尤其有用。此类目的包括但不限于测定生物样品，例如血液样品或组织活检物中的NKp46表达细胞的存在，以及检测个体中NKp46表达细胞的存在、水平或活性。此类测定和检测方法可用在本文中的例如涉及检测患者的细胞中的NKp46表达的诊断治疗方法中，并且如果确定患者的细胞表达NKp46，则随后施用本发明的NKp46调节抗体。在某些实施方案中，本发明的抗体用于从生物样品中纯化NKp46表达细胞。生物样品可以从患者获得，例如用于诊断或离体治疗目的，或者可以从个体或非人灵长类动物获得以获得此类细胞的来源用于研究目的。在一个这样的实施方案中，标记的抗体可用于FACS分选以从生物样品中纯化或分离NKp46表达细胞。或者，在一些实施方案中，本文的抗体与固体支持物的缀合可用作从生物样品，诸如来自个体的血液样品或组织活检物的细胞中亲和纯化细胞表面上携带有NKp46受体的细胞的工具。该纯化方法是另一个替代实施方案，对于所得纯化的细胞群也是如此。无论用于分离或纯化NKp46表达细胞的方法如何，这样做的能力可用于多种目的，例如，用于例如在施用如本文所述的抗-NKp46抗体之前通过评估NKp46表达细胞的数目或活性来诊断NKp46相关病症。另外，纯化的NKp46表达细胞可用于研究环境，例如，用于更好地表征细胞及其各种性质和行为，以及鉴定可用于调节其行为、活性、存活或增殖的化合物或方法。抗体-药物缀合物在一些实施方案中，抗体分子和非抗体部分借助于接头连接。在此类实施方案中，免疫缀合物由式I表示：Ab–X–Znm式I其中，Ab为本公开的抗-NKp46抗体；X为连接Ab与Z的部分，例如，通过共价连键连接到Ab和Z之一或两者的接头的残基；Z为治疗剂例如，任何细胞毒性剂或标记物，或者可替代地为待递送至NKp46表达细胞的任何其它部分；以及n为选自1至10的整数，任选地为1、2、3或4m为选自1至15的整数。变量m表示式I的免疫缀合物中每个抗体分子的-X-Z部分数目。在各种实施方案中，m的范围为1至15、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3、1至2。在一些实施方案中，m的范围为2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在其它实施方案中，m为1、2、3、4、5或6。在包含多种式I的免疫缀合物的一些组合物中，m是每个Ab的–X–Zn部分的平均数目，也称为平均载药量。平均载药量的范围可为每个Ab1至约15个–X–Zn部分。在一些实施方案中，当m表示平均载药量时，m为约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7或约8。在示例性实施方案中，m为约2至约8。在一个实施方案中，m约为8。在一个实施方案中，m约为4。在另一个实施方案中，m约为2。任选地，n为1。每个Ab的-X-Z部分的数目可通过常规方法诸如质谱、ELISA测定和HPLC来表征。还可测定根据m的免疫缀合物的定量分布。在一些情况下，可通过诸如反相HPLC或电泳的手段来实现与具有其它载药量的免疫缀合物相区分的其中m为某一数值的均质免疫缀合物的分离、纯化及表征。式I的免疫缀合物可以作为混合物存在，其中混合物的每种组分具有不同的m值。例如，式I的免疫缀合物可作为包含两种、三种、四种或更多种单独的免疫缀合物组分或由两种、三种、四种或更多种单独的免疫缀合物组分组成的混合物存在，所述混合物包含其中m为1、2、3、4、5、6、7或8的第一免疫缀合物组分和其中m为1、2、3、4、5、6、7或8的第二免疫缀合物组分，以及任选地第三和或第四和或此外的免疫缀合物。在一些实施方案中，例如，如实施例中所述，式I的免疫缀合物作为基本上均质的组合物存在，其中组合物中至少80％、90％或95％的免疫缀合物具有相同的m值例如，相同的m值和相同的n值；任选地n为1或2，并且m为2或4。各种合适的接头例如，用于将抗体分子连接到治疗剂或标记物的异双功能试剂和制备免疫缀合物的方法是本领域已知的。参见，例如，Chari等，CancerResearch52:127-1311992。接头可以是例如在生理条件下，例如在细胞内条件下可切割的，以便接头的裂解使得药物治疗剂或标记物在细胞内环境中释放。在其它实施方案中，接头是不可切割的，并且药物是例如通过抗体降解释放的。接头可以与抗体部分上的化学反应性基团键合，例如与游离氨基、亚氨基、羟基、硫醇或羧基键合例如，与N-末端或C-末端、与一个或多个赖氨酸残基的ε氨基、一个或多个谷氨酸或天冬氨酸残基的游离羧酸基团，或一个或多个半胱氨酰基残基的巯基键合。与接头结合的位点可以是抗体部分的氨基酸序列中的天然残基，或者它可以例如通过DNA重组技术例如，通过在氨基酸序列中引入半胱氨酸或蛋白酶切割位点或通过蛋白质生物化学例如，还原、pH调节或蛋白水解引入到抗体部分中。共价连接的最常用的非特异性方法之一是将化合物的羧基或氨基连接到抗体分子的氨基或羧基的碳二亚胺反应。另外，已使用双功能试剂诸如二醛或亚氨酸酯将化合物的氨基连接至抗体分子的氨基。希夫碱反应也可用于将药物附接至抗体分子。该方法涉及含有二醇或羟基基团的药物的高碘酸盐氧化，从而形成醛，然后醛与抗体分子反应。附接经由与抗体分子的氨基形成希夫碱而发生。异硫氰酸酯也可用作偶联剂，用于将药物共价连接至抗体分子。此类技术是技术人员已知的。在某些实施方案中，作为接头X的前体的中间体在适当的条件下与药物Z反应。在某些实施方案中，在药物和或中间体上使用反应性基团。随后使药物与中间体或衍生化药物之间的反应产物与抗体分子在适当的条件下反应。在一些实施方案中，接头可被存在于细胞内环境中例如，在溶酶体或内体或小窝caveolea内的切割剂切割。接头可以是例如被细胞内肽酶或蛋白酶包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶切割的肽基接头。在一些实施方案中，肽基接头的长度为至少两个氨基酸或至少三个氨基酸。切割剂可包括组织蛋白酶B和D以及纤溶酶，已知所有这些切割剂都能水解二肽药物衍生物，导致活性药物在靶细胞内释放。最典型的是可被存在于细胞中的酶切割的肽基接头。例如，可使用可被在癌组织中高度表达的硫醇依赖性蛋白酶组织蛋白酶-B切割的肽基接头例如，Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly接头。此类接头的其它实例描述于例如美国专利第6,214,345号出于所有目的通过引用整体并入本文中。在具体实施方案中，可被细胞内蛋白酶切割的肽基接头是Val-Cit接头或Phe-Lys接头参见，例如，美国专利6,214,345，其描述了利用val-cit接头合成多柔比星。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点是所述治疗剂在缀合时通常毒性减弱，并且缀合物的血清稳定性通常很高。在其它实施方案中，可切割接头对pH敏感，即在某些pH值下对水解敏感。通常，pH敏感性接头在酸性条件下是可水解的。例如，可使用在溶酶体中可水解的酸不稳定性接头例如，腙、缩氨基脲、缩氨基硫脲、顺式乌头酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮等。此类接头在中性pH诸如血液中的那些pH条件下相对稳定，但在低于pH5.5或5.0溶酶体的近似pH下不稳定。在某些实施方案中，可水解的接头是硫醚接头诸如，例如，通过酰基腙键与治疗剂连接的硫醚参见，例如，美国专利第5,622,929号。在另一些其它实施方案中，接头在还原条件下是可切割的例如，二硫键接头。本领域已知多种二硫化物接头，所述接头包括例如可使用SATAN-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基硫代乙酸酯、SPDPN-琥珀酰亚胺基-3-2-吡啶基二硫代丙酸酯、SPDBN-琥珀酰亚胺基-3-2-吡啶基二硫代丁酸酯和SMPTN-琥珀酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-2-吡啶基-二硫代甲苯形成的那些二硫化物接头。在其它具体实施方案中，接头是丙二酸酯接头Johnson等，1995,AnticancerRes.15:1387-93、马来酰亚胺基苯甲酰基接头Lau等，1995,BioorgMedChem.310:1299-1304或3'-N-酰胺类似物Lau等，1995,Bioorg.Med.Chem.310:1305-12。在另一些其它实施方案中，接头是不可切割的，并且药物是通过抗体降解释放的。参见例如美国公开第20050238649号，其出于所有目的通过引用整体并入本文。在一个实施方案中，接头对细胞外环境基本上是不敏感的。如本文中所用，在接头的上下文中的“对细胞外环境基本上不敏感”，意指当免疫缀合物存在于细胞外环境中例如，在血浆中时，样品中被切割的免疫缀合物不超过约20％，通常不超过约15％，更通常不超过约10％，甚至更多通常不超过约5％。接头是否对细胞外环境基本上不敏感可以例如通过将血浆与免疫缀合物一起孵育预定的时间段例如，2小时、4小时、8小时、16小时或24小时，然后定量血浆中存在的游离药物的量来确定。在其它实施方案中，接头可以充当间隔子以使抗体与剂间隔开，以避免干扰结合能力。在一个实施方案中，接头可包含拉伸器单元，例如与抗体的硫原子、伯氨基或仲氨基或碳水化合物基团形成键的分子，并且该拉伸器将抗体连接至治疗剂或标记物Z或连接至氨基酸单元，所述氨基酸单元又连接至Z。当拉伸器连接至氨基酸单元时，氨基酸单元可直接连接至Z，或者可以包含连接氨基酸单元与Z的间隔子元件例如，非自毁型或自毁型间隔子。氨基酸单元可以是单个氨基酸或肽，例如缬氨酸-瓜氨酸或苯丙氨酸-赖氨酸。在某些实施方案中，利用酶催化方法将细胞毒性剂缀合至抗体的氨基酸残基。有利地，采用转谷氨酰胺酶TG酶来催化利用细胞毒性剂对抗体上的受体谷氨酰胺进行的化学计量官能化。例如，可采用TG酶催化方法，利用大的和或疏水底物例如代表高度疏水性有机分子的吡咯并苯并二氮杂二聚体对抗体进行官能化。在另一个实例中，采用分选酶来催化抗体上，例如，在抗体恒定区内工程改造的或附接于抗体恒定区的分选酶识别肽标签内的受体氨基酸残基的官能化。使用TG酶催化方法将细胞毒性部分与抗体恒定区上的受体谷氨酰胺偶联以及对此合适的接头描述于PCT公开号WO2013309283和WO2014202775InnatePharma，其公开内容通过引用并入本文中。TG-家族的酶通过在一种蛋白质的赖氨酸供体残基与另一种蛋白质的受体谷氨酰胺残基之间形成抗蛋白酶异肽键来催化共价蛋白质交联，并伴随氨的释放。转谷氨酰胺酶的催化机理已如下提出。在含有甘氨酸的第一底物受体谷氨酰胺与酶结合后，它与TG酶的活性中心中的半胱氨酸残基形成γ-谷氨酰基硫酯称为酰基酶中间体，伴随着氨的释放。然后第二种底物供体或K-底物与酰基酶中间体结合并攻击硫酯键。产物通过Nεγ-谷氨酰基赖氨酸异肽桥交联的两种蛋白质形成并释放。这重新建立了以其原始形式存在的酶的活性中心Cys残基，并使它能够参与另一个催化循环。共价酰基酶中间体的形成被认为是这些反应中的限速步骤。许多转谷氨酰胺酶的催化三联体是木瓜蛋白酶样的，含有Cys-His-Asp其中His是组氨酸，Asp是天冬氨酸以及，至关重要地，位于远离活性中心Cys36个残基的位置处的色氨酸Trp残基。相反，从轮枝链霉菌属某种Streptoverticilliumsp见上文分离的细菌TG具有非典型的催化三联体，并且未表现出与其它TG酶的木瓜蛋白酶样催化三联体的序列同源性。TG酶在谷氨酰胺蛋白质底物的识别方面显示出严格的特异性。然而，TG酶显示出对酰基-受体胺基团识别的广泛特异性，所述酰基-受体胺基团可以是肽基赖氨酸的ε-氨基或低分子量的伯胺通常为聚胺参见，例如，Folk，等1980J.Biol.Chem.255,3695-3700。因此，可以设想许多种赖氨酸基接头。例如，除了赖氨酸以外，模拟小赖氨酸的伯胺5-戊胺尸胺及其变体或片段还可高效地与酰基酶中间体结合，并与含谷氨酰胺的蛋白质形成假异肽键。参见，例如，Lorand,L.等1979Biochemistry18,1756-17651979；Murthy,S.N.等1994.J.Biol.Chem.269,22907-229111994；Murthy,P.等2009Biochemistry2009。细菌、古细菌和真核生物TG酶已被表征，并且在几种方面与哺乳动物TG酶相异Lorand,L.&Graham,R.M.2003Nat.Rev.Mol.CellBiol.4,140-156。BTG和更一般的微生物TG酶EC2.3.2.13，蛋白质-谷氨酰胺-γ-转谷氨酰胺酶诸如茂源链霉菌Streptomycesmobaraensis是不依赖于钙的并且具有与哺乳动物TG的氨基酸序列迥然不同的氨基酸序列Ando等1989Agric.Biol.Chem.53,2613-2617。此外BTG要小得多37.8kDa对比豚鼠肝脏TG的76.6kDa。另外，与哺乳动物TG酶相比，BTG对蛋白质中的胺受体谷氨酰胺底物表现出更宽的底物特异性。这些特征连同更高的反应速率、低生产成本和减小的催化脱酰胺的倾向使得BTG成为用于本发明的优选酶。可将抗体与引入到抗体中的受体谷氨酰胺在合适位置处缀合。例如，包含一个或一定数目的所需受体谷氨酰胺的谷氨酰胺识别标签可从一系列肽序列中选择并使其与抗体重链和或轻链的C-末端融合。如果受体谷氨酰胺是天然存在于残基Q295KabatEu编号处和或天然存在于诸如残基N297的附近残基处的谷氨酰胺残基，待与赖氨酸基接头缀合的抗体通常在残基N297KabatEu编号处不含N-连接的糖基化。全长野生型IgG抗体天然地在重链的残基297处包含N-连接的糖基化，其干扰并阻止TG酶介导的在天然存在于CH2结构域中的谷氨酰胺残基Q295上的缀合。因此，可以制备抗体，使得它们缺乏N297连接的糖基化。酶促去糖基化可如本文所述或根据任何合适的方法进行。例如，将PBS缓冲液0.1molLNaCl和0.05molL磷酸钠缓冲液，pH7.4中的抗体1mg与100单位0.2μL来自脑膜炎败血黄杆菌Flavobacteriummeningosepticum的N-糖苷酶FPNG酶FNewEnglandBioLabs,Ipswich,UK一起在37℃下孵育过夜。然后通过离心-透析VivaspinMWCO50kDa,Vivascience,Winkel,Switzerland除去酶。可通过LCMS分析产物。或者，可将抗体Fc结构域工程改造以引入防止N-连接的糖基化的氨基酸取代。例如，可将N297X取代引入到抗体的重链中，其中X为除天冬酰胺以外的任意氨基酸。当X为谷氨酰胺残基时，残基297处的谷氨酰胺将用作受体谷氨酰胺，并通过TG酶与接头偶联。抗体可被工程改造成具有所需数目的受体谷氨酰胺。在一个实例中，抗体在每个重链的残基295处包含单个受体谷氨酰胺例如，抗体包含N297X取代，其中X为除天冬酰胺或谷氨酰胺以外的任意氨基酸，或者抗体被酶促去糖基化；抗体将具有总共两个受体谷氨酰胺。在一个实例中，抗体在每个重链的残基297处包含单个受体谷氨酰胺例如，抗体包含Q295X取代，其中X为除谷氨酰胺外的任意氨基酸；和N297Q取代；抗体将具有总共两个受体谷氨酰胺。在一个实例中，抗体在每个重链的残基295和297处包含受体谷氨酰胺例如，抗体包含N295Q取代；抗体将具有总共四个受体谷氨酰胺。在一个实例中，抗体在任选地通过居间氨基酸残基与轻链和或重链的C端融合的TG酶识别标签内包含一个或多个受体谷氨酰胺。在一个实施方案中，分析产物的载药量例如，每个抗体的缀合物数目。此类方法可用于确定每个抗体的缀合物平均数目例如，平均DAR以及组合物中每个抗体的缀合物数目的分布，即，具有任何给定水平的载药量或DAR的总抗体的百分比。可确定具有一定数量n的缀合的受体谷氨酰胺例如，n＝1、2、3、4、5、6等的抗体的分数。适用于这种测定和更一般地载药量的一种技术是疏水相互作用色谱HIC，可以如例如Hamblett等2004CancerRes.10:7063-7070；Wakankar等2011mAbs32:161-172以及Lyon等2012MethodsinEnzymology，第502卷：123-138其公开内容通过引用整体并入本文中所述进行HIC。有用的TG酶的实例包括诸如例如来自茂原链霉菌、肉桂链霉菌Streptomycescinnamoneum和灰肉链霉菌Streptomycesgriseocarneum的微生物转谷氨酰胺酶关于合适的TG酶的讨论，参见，例如，PCT公开号WO2013309283和WO2014202775。优选TG酶是细菌转谷氨酰胺酶BTG参见，例如，EC2.3.2.13，蛋白质-谷氨酰胺-γ-谷氨酰胺转移酶。在更优选的实施方案中，TG酶来自茂原链霉菌。在另一个实施方案中，TG酶是与天然TG酶具有至少80％序列同源性的突变型TG酶。优选实例是源自茂源链霉菌的重组细菌转谷氨酰胺酶可从Zedira,Darmstadt，德国获得。TG酶催化的反应可以在温和的条件下进行，持续数小时至一天例如，过夜。来自茂源链霉菌的重组BTGEC2.3.2.13Zedira,Darmstadt，德国可以以介于1UmL与20UmL之间，优选介于6UmL与20UmL之间的浓度使用。使赖氨酸基接头底物与抗体1mgmL在介于400molL至600molL之间的配体浓度下反应，提供比抗体过量60至90倍的底物，或者任选地提供过量程度较低，例如，过量1至20倍或10-20倍的底物。该反应在无钾的磷酸盐缓冲盐水PBS；pH8中在37℃下进行。4小时至数天取决于抗体和配体后，实现稳态条件。然后通过离心-透析VivaspinMWCO50kDa,Vivascience,Winkel,Switzerland除去过量的配体和酶。通过LCMS监测反应。可根据不同的赖氨酸衍生物和底物使用更高量的TG酶。存在于抗体例如，抗体的一级结构的一部分，包括例如具有肽标签的抗体或抗体片段上的受体谷氨酰胺将在合适的条件下被TG酶识别并与赖氨酸基接头共价结合。可使用任何合适的方法分析所得的抗体缀合物。优选地，缀合抗体的化学计量可使用自顶向下的途径通过液相色谱质谱法LCMS来表征，以便评估赖氨酸基接头的数目和或在适用的情况下缀合至抗体的目标部分，特别是组成的均质性。可在LCMS分析之前还原缀合物，并单独测量轻链和重链。在一个方面，提供了用于将目标部分Z与抗体缀合的方法，其包括以下步骤：a提供本公开的抗体，其中所述抗体包含重链和或轻链恒定区中的至少一个受体谷氨酰胺残基或附接至重链和或轻链恒定区的至少一个受体谷氨酰胺残基；以及b使所述抗体与包含含有目标部分Z的伯胺的接头赖氨酸基接头在TG酶存在的情况下，在足以获得包含经由所述接头与目标部分Z连接共价地的受体谷氨酰胺的抗体的条件下反应。本公开的某些方面涉及连接试剂，其可在TG酶的作用下在抗体Ab序列内的谷氨酰胺残基Q处与多肽连接。连接试剂包含赖氨酸衍生物Lys或其功能等同物，其与至少一个反应性基团R或目标部分Z连接。赖氨酸衍生物Lys或功能等同物一般可包含作为TG酶的底物的任何伯胺链，例如包含烷基胺、氧代胺。在一个实施方案中，可将多个反应性基团，优选非互补反应性基团与连接试剂连接。反应性基团优选是对水不敏感但选择性地与互补试剂进行具有非常高转化率的加成反应的官能团。赖氨酸衍生物的功能等同物可包含2至20个碳的链或其功能等同物，具有H2N或H2NCH2氨基亚甲基基团，或受保护的H2N或H2NCH2基团其可衍生自位于所述碳链的一个或多个末端的H2N或氨基亚甲基。碳链的功能等同物可包含其中除伯胺外的一个或多个原子可以不是碳，例如是氧、硫、氮或其它原子的3至20个原子的链，其例如具有H2NOCH2基团，或位于碳链的一个或多个末端的受保护的H2NOCH2基团。氧、硫或氮原子可为碳链内的醚、酯、硫醚、硫酯、氨基、烷基氨基、酰氨基或烷基酰胺基官能团。合适的接头描述于例如PCT公开号WO2013309283和WO2014202775中。碳链的一个示例性功能等同物是寡聚环氧乙烷链。可包括碳链内的官能团以将反应性基团偶联至H2NH2NOCH2或H2NCH2基团或受保护的H2N、H2NOCH2或H2NCH2基团。碳链或其功能等同物可以是取代的或未取代的。例如，碳链或其功能等同物可包含多个CH2-CH2-O-基团，任选地CH2-CH2-O-n基团，其中n为在1至6的范围中选择的整数。取代基可以是烷基、芳基、烷基芳基、羧酸基、酰胺基、羟基，或不与氨基竞争着与蛋白质的谷氨酰胺残基缀合或者不抑制与蛋白质的谷氨酰胺残基缀合的任何其它基团。通常，当取代基存在时，它存在于方便的起始材料中，诸如赖氨酸的羧酸基团，赖氨酸衍生物就是由其产生的。在碳链或功能等同物末端的胺必须包含在连接试剂中。赖氨酸的功能等同物的起始材料的实例可以是α,ω-二氨基烷烃，例如1,2-二氨基乙烷、1,3-二氨基丙烷、1,4-二氨基丁烷、1,5-二氨基戊烷、1,6-二氨基己烷、1,7-二氨基庚烷、1,8-二氨基辛烷、1,9-二氨基壬烷、1,10-二氨基癸烷、1,11-二氨基十一烷，或1,12-二氨基十二烷。赖氨酸衍生物的功能等同物的其它起始材料可以是α,ω-二氨基寡聚环氧乙烷，例如H2NCH2CH2OxCH2CH2NH2，其中x为在1至6的范围中选择的整数。α,ω-二氨基寡聚环氧乙烷可以是单一低聚物，或者它可以是寡聚物的混合物，其中x定义平均大小。示例性受保护的H2NCH2为受氨基甲酸叔-丁酯保护的N-5-氨基戊基氨基甲酸叔-丁酯N-Boc-尸胺的胺。用于将目标部分Z与抗体直接一步连接的连接试剂将有利地包含用作间隔子的元件，以使大的带电荷的或疏水目标有机部分Z远离与受体谷氨酰胺。间隔子可以体现在赖氨酸衍生物或其功能等同物中，或体现在接头的另一元件例如，如本文进一步描述的L、V和或Y基团中。在一个实施方案中，用作间隔子的元件是具有结构NH-C-的赖氨酸衍生物Lys或其功能等同物，其中C是取代的或未取代的烷基或杂烷基链，其中链的任何碳任选地被烷氧基、羟基、烷基羰基氧基、烷基-S-、硫醇、烷基-COS-、胺基、烷基胺基、酰胺基或烷基酰胺基取代，并且其中链长为超过10个原子的整数，在10至20的范围中的整数。例如，C可以是包含在一个或多个原子上被取代的10至20个原子的含碳框架。在一个实施方案中，连接试剂包含L、V和或Y基团，其起间隔子的作用并位于NH-C-基团与目标部分Z之间，其中L是在一个或多个原子上被取代的1至200个原子的含碳框架，任选地其中含碳框架是直链烃、对称或不对称支化烃、单糖、聚糖、二糖、直链或支化寡糖不对称支化或对称支化、其它天然直链或支化寡聚物不对称支化或对称支化、氨基酸残基、二肽、三肽或寡肽，或例如由任何链增长或逐步增长聚合过程产生的任何二聚体、三聚体或高级寡聚物直链、不对称支化或对称支化；V是不可切割的部分或可条件切割的部分，任选地在先前的条件转化之后，其可通过化学、光化学、物理、生物学或酶促过程而被切割或转化例如，V的切割最终导致随后或最终与V连接的一个或多个部分，例如Z部分的释放。在一些实施方案中，V优选为二肽、三肽、四肽或寡肽例如，含有缬氨酸-瓜氨酸的肽等，并且Y为间隔子系统例如，自消除间隔子系统或非自消除间隔子系统，其由一个或多个间隔子组成。间隔子系统Y可以自消除或非自消除。“自消除”间隔子单元允许释放药物部分而无需单独的水解步骤。当使用自消除间隔子时，在V的切割或转化后，Y的与V连接的一侧变得无障碍，这导致最终释放一个或多个部分Z。Y可以例如是任何直链、支化和或环状C2-30烷基、C2-30烯基、C2-30炔基、C2-30杂烷基、C2-30杂烯基、C2-30杂炔基，任选地其中可插入一个或多个同素环芳族化合物基团或杂环化合物基团；特别地，任何直链或支化C2-5烷基、C5-10烷基、C11-20烷基、-O-C1-5烷基、-O-C5-10烷基、-O-C11-20烷基或CH2-CH2-O-1-24或CH2x1-CH2-O-CH21-24-CH2x2-基团其中x1和x2独立地为在0至20的范围中选择的整数、氨基酸、寡肽、聚糖、硫酸酯、磷酸酯或羧酸酯。任选地，Y不存在。在一些实施方案中，Y为C2-6烷基。自消除间隔子系统可以是例如WO02083180和WO2004043493其通过引用整体并入本文中描述的那些，以及本领域技术人员已知的其它自消除间隔子。在某些实施方案中，接头的间隔子单元包含对氨基苄基单元。在一个这样的实施方案中，对氨基苄醇通过酰胺键与氨基酸单元连接，并在苄醇与细胞毒性剂之间产生氨基甲酸酯、氨基甲酸甲酯或碳酸酯。在一个实施方案中，间隔子单元是对-氨基苄基氧基羰基PAB。自消除间隔子单元的实例还包括但不限于与对氨基苄醇在电子上相似的芳族化合物参见，例如，US20050256030Al，诸如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物Hay等1999Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237以及邻或对-氨基苄基缩醛。可以使用在酰胺键水解后发生环化的间隔子，诸如取代的和未取代的4-氨基丁酸酰胺Rodrigues等ChemistryBiology,1995,2,223和2-氨基苯基丙酸酰胺Amsberry，等，J.Org.Chem.,1990,55.5867。在甘氨酸的a-位取代的含胺药物的消除Kingsbury等，J.Med.Chem.,1984,27,1447也是自毁型间隔子的实例。V可包括例如在一个或多个原子上被取代的1至200个原子的含碳框架，任选地至少10个原子，例如10至100个原子或20至100个原子的含碳框架，任选地其中所述含碳框架是直链烃或包含环状基团、对称或不对称支化烃、单糖、二糖、直链或支化寡糖不对称支化或对称支化、其它天然直链或支化寡聚物不对称支化或对称支化、氨基酸、二肽、三肽、四肽或寡肽，或更一般地，由任何链增长或逐步增长聚合过程产生的任何二聚体、三聚体或高级寡聚物直链、不对称支化或对称支化。V可以例如是任何直链、支化和或环状C2-30烷基、C2-30烯基、C2-30炔基、C2-30杂烷基、C2-30杂烯基、C2-30杂炔基，任选地其中可插入一个或多个同素环芳族化合物基团或杂环化合物基团；特别地，任何直链或支化C2-5烷基、C5-10烷基、C11-20烷基、-O-C1-5烷基、-O-C5-10烷基、-O-C11-20烷基或CH2-CH2-O-1-24或CH2x1-CH2-O--CH21-24-CH2x2-基团其中x1和x2独立地为在0至20的范围中选择的整数、氨基酸、寡肽、聚糖、硫酸酯、磷酸酯或羧酸酯。任选地，V可以存在或不存在。在一些实施方案中，V为C2-6烷基。在某些实施方案中，V含有二肽、三肽、四肽或寡肽，其由被蛋白酶识别的氨基酸序列组成。三肽可通过其C末端与Y连接。在一个实施方案中，三肽的C-末端氨基酸残基选自精氨酸、瓜氨酸和赖氨酸，三肽的中间氨基酸残基选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、环己基甘氨酸、色氨酸和脯氨酸，三肽的N-末端氨基酸残基选自任何天然或非天然氨基酸。在一个实施方案中，本公开提供了其中V包含二肽的化合物。二肽可通过其C末端与Y连接。在一个实施方案中，二肽的C-末端氨基酸残基选自丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸和赖氨酸，二肽的N-末端氨基酸残基选自任何天然或非天然氨基酸。在一个实施方案中，V选自苯丙氨酸-赖氨酸和缬氨酸-瓜氨酸。在一个实施方案中，提供了包含官能化受体谷氨酰胺残基的抗体或抗体片段，所述官能化受体谷氨酰胺残基具有式II，Q-NH-C-X–L–V-Y-Zzqr式II或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于抗体或抗体片段中的谷氨酰胺残基；C为取代的或未取代的烷基或杂烷基链，任选地其中链的任何碳被烷氧基、羟基、烷基羰基氧基、烷基-S-、硫醇、烷基-COS-、胺、烷基胺、酰胺或烷基酰胺取代；X为NH、O、S、不存在或键；L独立地为不存在、键或键的延续，或在一个或多个原子上被取代的5至200个原子的含碳框架，任选地其中所述含碳框架包含任选地在一个或多个原子上被取代的5至30个碳原子的直链框架，任选地其中所述含碳框架是直链烃、对称或不对称支化烃、单糖、二糖、直链或支化寡糖不对称支化或对称支化、其它天然直链或支化寡聚物不对称支化或对称支化，或由任何链增长或逐步增长聚合过程产生的二聚体、三聚体或高级寡聚物直链、不对称支化或对称支化。r为选自1、2、3或4的整数；q为选自1、2、3或4的整数；Z为选自1、2、3或4的整数；以及V独立地为不存在、不可切割的部分或可条件切割的部分；Y为独立地不存在、键或键的延续,或由1个或多个间隔子组成的间隔子系统；以及Z为细胞毒性剂。在一些实施方案中，特别是当高度疏水性药物与抗体缀合时，一般需要有机溶剂来维持溶解性并避免形成聚集的抗体-药物缀合物。当疏水性接头底物在高浓度有机溶剂不存在的情况下不能溶解例如，包含吡咯并苯并二氮杂部分的接头需要多达50％的溶剂来允许DAR为2的高度均一偶联，利用具有反应性部分的接头的多步偶联方法可用来获得高度均一的组合物。然而，当抗体包含N297Q突变时，当将具有反应性部分的接头与该抗体，例如，在残基Q295处和或297处偶联时，5％或更高的有机溶剂会抑制TG酶高效缀合的能力，从而导致不完全偶联少于90％的受体谷氨酰胺被官能化。因此，偶联可通过在转谷氨酰胺酶存在的情况下使包含受体谷氨酰胺残基的抗体与具有反应性部分R的连接试剂反应来进行，其中溶剂例如，有机溶剂、极性溶剂、非极性溶剂、DMSO不存在或以小于10％vv，任选地进一步小于5％vv、4％vv、3％vv或2％vv的量存在。然后使所得的抗体与包含互补反应性基团R'和疏水性药物例如，吡咯并苯并二氮杂部分的接头反应以产生与疏水性药物或其它目标部分Z偶联例如，通过R和R'的反应产物偶联的抗体。利用包含互补反应性基团R'和疏水性药物的接头的反应步骤可以在溶剂存在的情况下进行，例如，其中溶剂例如，有机溶剂、极性溶剂、非极性溶剂、DMSO存在于反应混合物中，其中溶剂以大于2％vv、3％vv、4％vv、5％vv、10％vv、20％vv、40％vv或50％vv的量存在。参见，例如，本文中的实施例11。R和互补R'反应性基团各自可以是任何合适的反应性部分，例如包含未受保护或受保护的生物正交反应相容性反应性基团的部分，例如未受保护或受保护的硫醇、环氧化物、马来酰亚胺、卤代乙酰胺、o-磷烯芳酯phoshenearomaticester、叠氮化物，雷酸盐fulminate、磺酸酯、炔烃、氰化物、氨基硫醇、羰基、醛、一般任何能形成肟和肼的基团、1,2,4,5-四嗪、降冰片烯、其它应变的或以其它方式电子活化的烯烃、取代的或未取代的环炔、一般任何能通过生物正交环加成反应形成1,3-二取代的或1,5-二取代的三唑的反应性基团、可通过逆电子需求Diels-Alder反应发生反应的任何二烯或应变的烯烃亲二烯体的反应性基团、受保护或未受保护的胺、羧酸、醛或羟基胺oxyamine。反应性基团可以例如经选择用于进行硫代-马来酰亚胺或卤代乙酰胺加成、施陶丁格连接、Huisgen1,3-环加成点击反应或Diels-Alder环加成，其中互补反应性基团连接至包含治疗部分、诊断部分或任何其它用于所需功能的部分的剂。在一个实施方案中，反应性基团是卤代乙酰胺例如，溴-乙酰胺、碘-乙酰胺、氯乙酰胺。此类反应性基团与马来酰亚胺基团相比较在体内和在血清中将更稳定。在一个有利的实施方案中，反应性基团R和R'是能够进行“点击”反应的互补试剂。例如，1,3-偶极-官能化合物可以优选在基本上不存在添加的催化剂例如，CuI的情况下，以环化反应与炔反应从而形成杂环化合物。多种具有至少一个连接其上的1,3-偶极基团具有含有在三个原子上离域的4个电子的三原子π电子体系的化合物可用于与本文公开的炔烃反应。示例性1,3-偶极基团包括但不限于叠氮化物、腈氧化物、硝酮、氧化偶氮基团和酰基重氮基团。实例包括o-磷烯芳酯、叠氮化物、雷酸盐、炔烃包括任何应变的环炔烃、氰化物、蒽、四嗪例如1,2,4,5-四嗪或降冰片烯或其它应变的环烯烃。在一个实施方案中，R和R’之一是叠氮化物，R或R'中的另一个是应变的环炔烃例如环辛炔。在一个实施方案中，R和R’之一是四嗪，R或R'中的另一个是应变的环烯烃例如反式-环辛烯。在一个方面，本公开涉及用于将目标部分Z例如，疏水性、高分子量和或带电荷的有机化合物与本公开的抗-NKp46抗体缀合的方法，其包括以下步骤：a提供包含至少一个受体谷氨酰胺残基的本公开抗-NKp46抗体；以及b使所述抗体与包含含有反应性基团R的伯胺赖氨酸基接头的接头在TG酶存在的情况下，在足以获得包含经由所述接头与反应性基团R连接共价连接的受体谷氨酰胺的抗体的条件下反应，其中反应混合物不含有机溶剂或含有少于10％vv或含有少于5％、4％、3％或2％vv的有机溶剂；以及c任选地在有机溶剂例如，至少2％、3％、4％、5％、10％、20％、25％、40％或50％vv的有机溶剂存在的情况下使：i步骤b的包含经由所述接头赖氨酸基接头与反应性基团R连接的受体谷氨酰胺的抗体与ii包含目标部分Z和能够与反应性基团R反应的反应性基团R'的化合物，在足以获得包含受体谷氨酰胺的抗体的条件下反应，所述受体谷氨酰胺经由包含伯胺的接头赖氨酸基接头与目标部分Z例如，细胞毒性剂连接。所得抗体可以通过式III的结构表征。在一个实施方案中，提供了包含官能化的受体谷氨酰胺残基的抗体或抗体片段，所述官能化受体谷氨酰胺残基具有式III的结构，Q-NH-C-X–L–V-Y-Mzqr式III或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于抗体或抗体片段中的谷氨酰胺残基；C为取代的或未取代的烷基或杂烷基链，任选地其中链的任何碳被烷氧基、羟基、烷基羰基氧基、烷基-S-、硫醇、烷基-COS-、胺、烷基胺、酰胺或烷基酰胺取代；X为NH、O、S、不存在或键；L独立地为不存在、键或键的延续，或在一个或多个原子上被取代的1至200个原子的含碳框架，任选地其中所述含碳框架包含任选地在一个或多个原子上被取代的3至30个碳原子的直链框架，任选地其中所述含碳框架是直链烃、对称或不对称的支化烃、单糖、二糖、直链或支化低聚糖不对称支化或对称支化、其它天然直链或支化寡聚物不对称支化或对称支化，或由任何链增长或逐步增长聚合过程产生的二聚体、三聚体或高级低聚物直链、不对称支化或对称支化。r为选自1、2、3或4的整数；q为选自1、2、3或4的整数；z为选自1、2、3或4的整数；V独立地为不存在、键或键的延续、不可切割的部分或可条件切割的部分；Y独立地为不存在、键或键的延续，或由1个或多个间隔子组成的间隔子系统；M独立地为：R或RR’–L’–V’-Y’-Zz’q’r’，其中R为反应性部分；RR'为R与互补反应性部分R'之间的加成产物；L独立地为不存在、键或键的延续，或在一个或多个原子上被取代的1至200个原子的含碳框架，任选地其中所述含碳框架包含任选地在一个或多个原子上被取代的3至30个碳原子的直链框架，任选地其中所述含碳框架是直链烃、对称或不对称支化烃、单糖、二糖、直链或支化寡糖不对称支化或对称支化、其它天然直链或支化寡聚物不对称支化或对称支化，或由任何链增长或逐步增长聚合过程产生的二聚体、三聚体或高级寡聚物直链、不对称支化或对称支化。V’独立地为不存在、键或键的延续、不可切割的部分或可条件切割的部分；Y’独立地为不存在、键或键的延续，或由1个或多个间隔子组成的间隔子系统；Z为细胞毒性剂，并且当Y不存在时，每个Z直接与Y或V偶联，或者当Y和V都不存在时，每个Z直接与L偶联；以及z’、q’和r’各自独立为选自1、2、3或4的整数。在一个实施方案中，V为不存在、键或键的延续，并且V’为不可切割的部分或可条件切割的部分。在一个实施方案中，Y为不存在、键或键的延续、并且Y’为由1个或多个间隔子组成的间隔子系统。可以通过采用本领域技术人员熟知的方法，例如柱色谱例如，亲和色谱、离子交换色谱、凝胶过滤、疏水相互作用色谱、透析、渗滤或沉淀，从反应物中纯化免疫缀合物。可通过采用本领域技术人员熟知的方法，例如SDS-PAGE、质谱或毛细管电泳，评价免疫缀合物。一个或多个部分Z可以是例如紫杉烷类、蒽环类、喜树碱、埃坡霉素、丝裂霉素、考布他汀、长春花生物碱、氮芥、美登醇、刺孢霉素、多卡米星、微管溶素、多拉司他汀和奥瑞他汀、烯二炔类、吡咯并苯并二氮杂乙烯亚胺、放射性同位素、治疗性蛋白质和肽以及毒素或其片段。在一个实施方案中，Z为DNA小沟结合剂或包含DNA小沟结合剂。在一个实施方案中，Z部分包含吡咯并苯并二氮杂PBD。在一个实施方案中，Z为吡咯并苯并二氮杂单体。在一个实施方案中，Z为包含两个吡咯并苯并二氮杂单元的吡咯并苯并二氮杂二聚体。在一个实施方案中，Z为包含三个吡咯并苯并二氮杂单元的吡咯并苯并二氮杂三聚体。在一个实施方案中，Z为包含超过三个吡咯并苯并二氮杂单元的吡咯并苯并二氮杂多聚体。PBD的结构以及制备它们的配方和方法描述于例如PCT公开号：WO2013177481、WO2011130616、WO2004043880、WO2005085251、WO2012112687和WO2011023883中，其中每篇的公开内容均通过引用并入本文。吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂是一系列与鸟嘌呤残基共价连接的序列选择性小沟结合DNA相互作用剂。据报道，在PBD的C11a位置处的S-手性使它们具有适当的三维形状以完美地适配到DNA小沟内。PBD可具有不同的作用效应和作用模式。PBD可以是不会引起DNA交联的DNA结合剂或DNA-烷化剂，或者PBD可以是DNA交联剂。吡咯并苯并二氮杂单元或单体可具有如下的一般结构：其中PBD可在芳族A环和吡咯并C环两者中具有不同数目、类型和位置的取代基，并且在C环的饱和度上可存在差异。在B环中，在作为负责烷基化DNA的亲电子中心的N10-C11位置处存在亚胺N＝C、甲醇胺NH-CHOH或甲醇胺甲基醚NH-CHOMe。PBD的生物活性可通过使两个PBD单体或单元，通常通过它们的C8C8'-羟基官能团经由柔性亚烷基接头连接在一起来加强。在本文任何实施方案的一个方面，吡咯并苯并二氮杂单体或单元为吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂在本文任何实施方案的一个方面，吡咯并苯并二氮杂二聚体为C8C8'连接的吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮杂二聚体。PBD可通过任何合适的位置与接头连接。例如，PBD可通过下面指示的PBD单元中的任何位置与接头连接例如，与式II的化合物中的Y或V连接，或者当它们不存在时，与L连接；或者与式III的化合物中的Y'或V'连接，或者当它们不存在时，与L'连接。在一个实施方案中，PBD二聚体包含下面通式的结构，其中与式II或式III的化合物内的其它取代基或官能团连接的示例性连接点由箭头指示：其中：R12和R12’，和或R2和R2’各自一起分别形成双键＝CH2或＝CH-CH3；或R2’和R12’不存在并且R2和R12独立选自：iiaC1-5饱和脂族烷基；iiaC3-6饱和环烷基；iic其中R21,R22和R23中的每一个独立地选自H、C1-3饱和的烷基、C2-3烯基、C2-3炔基以及环丙基，其中R12基团中碳原子的总数不超过5；iid其中R25a和R25b之一为H而另一个选自：苯基，所述苯基任选地被选自卤基、甲基、甲氧基、吡啶基和苯硫基的基团取代；以及iie其中R24选自：H、C1-3饱和烷基、C2-3烯基、C2-3炔基、环丙基、苯基，所述苯基任选地被选自卤基、甲基、甲氧基、吡啶基和苯硫基的基团取代；R6和R9独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR'、硝基、Me3Sn和卤基；其中R和R'独立地选自任选地取代的C1-12烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基；R7独立地选自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NHRR’、硝基、Me3Sn和卤基。或者：aR10为H，并且R11为OH、ORA，其中RA为烷基；bR10和R11在它们所结合的氮原子与碳原子之间形成氮-碳双键；或者cR10为H并且R11为SOzM，其中z为2或3并且M为单价药学可接受的阳离子；R"为C3-12亚烷基，所述链可被一个或多个杂原子例如O、S、NRN2其中RN2为H或C1-4烷基中断；和或芳族环例如苯或吡啶；Y和Y'选自O、S或NH；以及R6’、R7’、R9’分别与R6、R7和R9选自相同的基团，并且R10’和R11’与R10和R11相同，其中如果R11和R11为SOzM，则M可代表二价药学上可接受的阳离子。在另一个实例中，PBD二聚体包含下面通式的结构：其中R6、R7、R9、R6’、R7’、R9’、R10、R11、R10’和R11’是如上所定义的，并且其中“K”环是取代的或未取代的芳族环或非芳族环，任选地为6-元环，任选地为苯基。PBD二聚体的实例包括：恒定区在一个方面，鉴于抗-NKp46抗体诱导ADCC的能力，抗体可包含人IgG1或IgG3同种型的Fc结构域或其部分，例如野生型Fc结构域，或任选地经修饰的Fc结构域，所述Fc结构域结合人CD16A，以及此外任选的其它人Fcγ受体，从而允许抗体招募免疫效应细胞并介导针对NKp46表达恶性细胞的ADCC。当将这种抗体另外地与细胞毒性剂缀合时，该抗体可以通过至少两种作用机制：ADCC和直接细胞毒性来消除表达NKp46的靶细胞。人IgG1Fc区的氨基酸序列位置230至447序列的实例GenBank登录号：J00228显示如下：PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNO:69。在一个方面，如本文中在使用具有化学计量官能化的受体谷氨酰胺的抗-NKp46抗体免疫缀合物其中混合物中的基本上所有抗体具有特定的DAR例如，为2或4的DAR的实例中的抗体方面所举例说明的，抗体尽管缺乏Fc介导的效应子功能，但仍能够以免疫缀合物的形式强效地诱导肿瘤细胞死亡。本公开的抗体因而可包含经修饰以减少或消除与一种或多种人Fcγ受体例如，CD16A、CD16B、CD32A、CD32b、CD64的结合的人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的Fc结构域或其部分。这种抗体将避免被非肿瘤Fcγ受体表达细胞摄取。因此，当与具有高效力毒性的细胞毒性剂例如，包含吡咯并苯并二氮杂部分的剂缀合时，所述抗体能够以比原本可能的剂量高的剂量使用，因此可在癌症治疗中导致比ADCC介导免疫缀合物更大的功效。任选地，如本文实施例中所举例说明的，所述抗体保留与人FcRn蛋白的结合，从而提供体内半衰期。在一个实施方案中，所述抗体可在Fc区中包含一个或多个特定突变，其产生与效应细胞具有最小相互作用的“Fc沉默”抗体。沉默的效应子功能可通过抗体的Fc区中的突变来获得，并且在本领域中已有描述：N297X突变其中X为除N外的任何氨基酸、LALA突变Strohl,W.,2009,Curr.Opin.Biotechnol.，第20卷6:685-691；和D265ABaudino等，2008,J.Immunol.181:6664-69，另见Heusser等，WO2012065950，其公开内容通过引用并入本文。在一个实施方案中，抗体在铰链区中包含一个，两个，三个或更多个氨基酸取代。在一个实施方案中，抗体是IgG1或IgG2，并且在残基233-236，任选地233-238EU编号处包含一个、两个或三个取代。在一个实施方案中，抗体是IgG4，并且在残基327、330和或331EU编号处包含一个、两个或三个取代。沉默FcIgG1抗体的实例是在IgG1Fc氨基酸序列中包含L234A和L235A突变的LALA突变体。Fc沉默突变的另一个实例是残基D265处的突变，或例如如在IgG1抗体中作为DAPAD265A、P329A突变使用US6,737,056的D265和P329处的突变。另一种沉默IgG1抗体包含残基N297处的突变例如，N297A、N297S突变，其导致无糖基化非糖基化抗体。在诊断和治疗中的用途在某些实施方案中，本发明的抗体用于纯化或鉴定生物样品中的NKp46阳性细胞。生物样品可以从患者获得，例如用于诊断或离体治疗目的，或从个体或非人灵长类动物获得以获得此类细胞的来源用于研究目的。可使用本发明的抗体用许多标准方法中的任何一种来纯化或鉴定NKp46阳性细胞。例如，可使用FACS扫描仪，利用对NKp46特异的以及任选地针对通常存在于细胞上的其它细胞表面分子的标记抗体对外周血细胞进行分选。无论用于分离、纯化或鉴定NKp46阳性细胞的方法如何，这样做的能力都可用于多种目的，例如，用于通过评估获自患者的NKp46阳性细胞的数目或活性或其它特征诊断以NKp46表达细胞的致病性扩增为特征的病症，或用于在例如实施使用所述抗体的本文所述治疗之一之前评估所述抗体或其片段或衍生物调节患者的细胞的活性或行为的能力。进一步地，纯化的NKp46阳性细胞可用于研究环境，例如，用于更好地表征细胞及其各种性质和行为，以及鉴定可用于调节它们的行为、活性或增殖的化合物或方法。所述抗体还可用于诊断方法，例如用于检测细胞，例如来自患者的疾病细胞上的Kp46多肽的方法。还提供了包含本公开的抗原结合剂例如，抗体的药物组合物，所述抗原结合剂与细胞表面上的NKp46多肽特异性结合。所述抗体抑制所述细胞的生长或活性和或导致NKp46阳性细胞的消除。组合物还包含药学上可接受的载体。还提供了抑制有需要的患者中NKp46阳性细胞的生长或活性和或耗尽有需要的患者中NKp46阳性细胞的方法，所述方法包括向所述患者施用根据本公开的组合物的步骤。此类治疗方法可用于许多病症，包括但不限于癌症的治疗。在一个方面，本公开的治疗方法包括向个体施用包含治疗有效量的结合NKp46的抗原结合化合物的组合物。治疗有效量可以例如足以导致体内NKp46表达细胞例如，肿瘤细胞的消耗增加。本公开的方法有利地用于治疗以NKp46表达细胞为特征的癌症和其它增殖性疾病，包括但不限于淋巴瘤，例如CTCL、PTCL。在一些实施方案中，在施用抗-NKp46抗体或组合物之前，将评估患者的细胞例如，肿瘤细胞上NKp46的存在，例如，以确定患者中NKp46阳性细胞的相对水平和活性，以及确认抗体对患者的细胞的结合功效。然后可用抗-NKp46抗体或组合物治疗肿瘤细胞表达NKp46的患者。这可通过从病症部位获得PBL或肿瘤细胞的样品，并且例如使用免疫测定来测试，以确定NKp46和任选地此外的其它标志物在细胞上的相对显著度来完成。其它方法也可用于检测NKp46和其它基因的表达，诸如基于RNA的方法，例如RT-PCR或Northern印迹。在一个实施方案中，当寻求抑制患者的NKp46阳性细胞的活性或生长或者耗尽患者的NKp46阳性细胞时，可任选地评估抗-NKp46抗体抑制患者的NKp46阳性细胞增殖或耗尽患者的NKp46阳性细胞的能力。如果NKp46阳性细胞被抗-NKp46抗体或组合物耗尽，则确定该患者对利用抗-NKp46抗体或组合物的治疗有反应，并且任选地用抗-NKp46抗体或组合物治疗所述患者。治疗可涉及多轮抗体或化合物施用。例如，在初始一轮施用后，一般将重新测量患者中NKp46表达细胞例如，恶性肿瘤细胞上的水平和或活性，并且如果仍然升高，则可进行另外一轮施用。这样，可以进行多轮NKp46检测以及抗体或化合物施用，例如，直至病症得到控制。在一些实施方案中，该方法可包括向所述患者施用选自以下的适当的另外的第二治疗剂的额外步骤：免疫调节剂、激素剂、化学治疗剂，或与NKp46表达细胞上存在的多肽结合的第二抗体例如，耗尽抗体。可将此类另外的剂作为单一剂型与所述抗体一起或作为单独的剂型向所述患者施用。抗体的剂量或抗体和另外的治疗剂的剂量共同地足以可检测地诱导、促进和或增强患者的治疗反应。当单独施用时，期望在对患者产生可检测的组合治疗益处的条件例如，关于时间安排、剂量数量等下施用抗体、片段或衍生物和另外的治疗剂。对于肿瘤治疗，例如，可将抗-NKp46组合物的施用与经典途径，诸如手术、放射疗法、化学疗法等组合使用。提供了联合治疗，其中将抗NKp46抗体与手术或放射治疗同时使用，在其之前或之后使用；或者与常规化学治疗剂、放射治疗剂或抗血管生成剂或靶向免疫毒素或凝血配体一起、在其之前或之后向患者施用。抗-NKp46化合物可用于例如治疗颗粒淋巴细胞的淋巴组织增生性疾病LDGL，特别是NK-LDGL粒状淋巴细胞的NK型淋巴组织增生性疾病；或者称为NK-LGL。NK-LDGL是指一类增生性病症，其是由NK细胞或NK样细胞，即，显示表面抗原表达例如，CD3-、CD56+、CD16+等的特征性组合的大颗粒淋巴细胞的克隆性扩增引起的。抗-NKp46化合物可用于例如治疗皮肤T细胞淋巴瘤CTCL，例如CD4+T细胞淋巴瘤，诸如塞扎里综合征或蕈样霉菌病。抗NKp46化合物一般可用于治疗多种PTCL。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有NKT淋巴瘤。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有肠病相关T细胞淋巴瘤EATL、RCDI或RCDII。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有间变性大细胞淋巴瘤ALCL。在本文中任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体患有PTCL-NOS未另作特殊说明的PTCL，也称为PCTL-U或未有特殊说明的PTCL；PCTL-NOS是一类侵袭性淋巴瘤，主要是结节型，但结外受累extranodalinvolvement很常见。大多数结节病例是CD4+和CD8-，并且CD30可在大细胞变体中表达。在一个实施方案中，本公开的抗体用于治疗患有包括乳糜泻和晚期或难治性乳糜泻阶段在内的乳糜泻乳糜泻coeliacdisease；CD的个体。在一个实施方案中，所述个体患有难治性、进展性或晚期乳糜泻，任选地其中所述乳糜泻是RCD、RCDI或RCDII。在本文中的任何治疗用途或PTCL治疗或预防方法的一个实施方案中，个体中LDGL或PTCL例如，EATL、ALCL、PTCL-NOS或其癌前病症的治疗或预防包括：a确定患有淋巴瘤或癌前病症例如，CTCL、LDGL、PTCL、乳糜泻等的个体内恶性或癌前细胞的NKp46多肽状态，以及b在确定NKp46多肽在细胞表面上表达例如，被显著地表达；与参照相比，以高水平和或以高抗NKp46抗体染色强度表达的患者后，向个体施用结合本文中任何实施方案的NKp46多肽的化合物。在本文中的任何治疗方法或用途的一个实施方案中，治疗鼻型NKT淋巴瘤，并且该方法不需要例如，不含，或不使用，或不包括在施用结合NKp46多肽的化合物之前，确定患有PTCL的个体内的恶性细胞的NKp46多肽状态的步骤。在此外的方面，已发现患有NKp46阳性PTCL-NOS的患者可具有呈CD30阴性肿瘤细胞不在其表面上表达CD30的肿瘤。因此，提供了治疗CD30阴性PTCL，例如PTCL-NOS的方法，其包括向患有CD30阴性PTCL的患者施用结合NKp46多肽的化合物。在治疗患有PTCL的个体的另一个实施方案中，该方法包括向患有PTCL、用抗CD30抗体治疗难以治愈的个体施用结合NKp46多肽的化合物。在其它实施方案中，当PTCL是CD30阳性例如，广泛表达CD30的间变性大细胞淋巴瘤、某一PTCL-NOS时，可将结合NKp46多肽的化合物与抗CD30抗体例如，耗尽抗CD30抗体，例如与毒性部分连接的抗CD30抗体组合施用。在一个实施方案中，提供了用于检测个体中淋巴瘤，例如，外周T细胞淋巴瘤的方法，该方法包括检测来自个体的生物样品中例如，细胞上的NKp46核酸或多肽。在一个实施方案中，提供了用于检测个体中侵袭性或晚期例如，IV期或更高期外周T细胞淋巴瘤的方法，该方法包括检测来自个体的生物样品中例如，细胞上的NKp46核酸或多肽。确定生物样品表达NKp46表明患者患有淋巴瘤例如，外周T细胞淋巴瘤或晚期侵袭性PTCL。在一个实施方案中，该方法包括确定生物样品中NKp46核酸或多肽的表达水平，并将该水平与对应于健康个体的参照水平例如，值、弱细胞表面染色等进行比较。确定生物样品以与参照水平相比升高的水平表达NKp46核酸或多肽表明患者患有淋巴瘤例如，外周T细胞淋巴瘤。任选地，检测生物样品中的NKp46多肽包括检测在恶性淋巴细胞表面上表达的NKp46多肽。任选地，在任何实施方案中，确定细胞的NKp46多肽状态包括使用来自个体的样品进行免疫组织化学测定。任选地，确定细胞的NKp46多肽状态包括使用来自个体的样品进行流式细胞术测定。IHC和流式细胞术均可检测NKp46的表面表达。任选地，每日一次至每月一次施用结合NKp46多肽的化合物。任选地，将组合物作为单一疗法施用。任选地，将组合物与第二治疗剂组合施用。任选地，将组合物与抗癌剂组合施用。在一个实施方案中，提供了制备用于治疗哺乳动物受试者的外周T细胞淋巴瘤或用于预防哺乳动物受试者的外周T细胞淋巴瘤的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：a提供多种包含本公开的抗-NKp46抗体的测试组合物；b测试每种化合物结合NKp46和或导致NKp46表达细胞耗尽的能力；以及c选择适合于治疗外周T细胞淋巴瘤或癌前病症或适合于预防外周T细胞淋巴瘤例如，通过治疗癌前病症来预防的结合NKp46多肽和或导致NKp46表达细胞耗尽的化合物。任选地，该方法还包括制备一定量的步骤c中选择的化合物和或将一定量的步骤c中选择的化合物与药学上可接受的赋形剂配制在一起。在一个实施方案中，提供了包括以下步骤的方法：a确定个体是否患有外周T细胞淋巴瘤；b如果个体患有外周T细胞淋巴瘤，则用治疗活性量的结合NKp46多肽的本公开的化合物治疗个体。在一个实施方案中，根据标准医学指南确定个体是否患有外周T细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，确定个体是否患有外周T细胞淋巴瘤包括鉴定异常细胞群或异常细胞数目。任选地，所述鉴定是通过流式细胞术进行。任选地，该方法还包括分选或分离异常细胞群。在一个实施方案中，确定个体是否患有外周T细胞淋巴瘤包括检测细胞遗传学畸变例如，评估核型。在一个实施方案中，确定个体是否患有外周T细胞淋巴瘤包括分选异常细胞群；以及将从分选的细胞中分离的核酸与一种或多种寡核苷酸接触，其中所述接触确定赘生物遗传标志物的存在；从而检测外周T细胞淋巴瘤的存在。在一个实施方案中，确定个体是否患有外周T细胞淋巴瘤包括评估个体中血清蛋白质水平。任选地，该方法还包括评估在用结合NKp46多肽的化合物治疗后，个体的外周T细胞淋巴瘤是否有改善，例如，个体的外周T细胞淋巴瘤细胞数目是否减少的步骤。在本文中的任何方面的一个实施例中，PTCL是侵袭性和或晚期PTCL。在一个实施方案中，PTCL是侵袭性非皮肤PTCL。在一个实施方案中，PTCL是PTCL-NOS。在一个实施方案中，PTCL是结节性例如，原发性结节性PTCL，例如PTCL-NOS、AITL或ALCLALK+或ALK-。在一个实施方案中，PTCL是间变性大细胞淋巴瘤ALCL，任选地ALK阴性ALCL。在一个实施方案中，PTCL是血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤AITL，任选地皮肤AITL，任选地非皮肤AITL。在一个实施方案中，PTCL可以是侵袭性的、非皮肤的、原发性结节性PCTL。在一个实施方案中，PTCL是结外例如，原发性结外PTCL。在一个实例中，PTCL可以是侵袭性的非皮肤结外PCTL。在一个实施方案中，PTCL是成人T细胞白血病或淋巴瘤ATL，例如，HTLV+ATL。在一个实施方案中，PTCL是正视区外结节病，例如NK-T细胞淋巴瘤或肠病相关T细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，PTCL是鼻型结外NK-T细胞淋巴瘤。在一个实施方案中，PTCL是肠病相关T细胞淋巴瘤EATL。在本文中的任何方面的一个实施方案中，PTCL是CD30阳性PTCL例如，ALK阴性ALCL，并且将抗-NKp46抗体与抗CD30抗体组合施用。在本文中的任何方面的一个实施方案中，PTCL是CD4阳性PTCL，并且将抗-NKp46抗体与抗CD4抗体组合施用。在本文中的任何方面的一个实施方案中，PTCL的特征在于不存在NK细胞相关或NK特异性标志物，例如CD56和或CD57。在本文中的任何方面的一个实施方案中，PTCL的特征在于存在NK细胞相关或NK特异性标志物，例如CD56和或CD57。可将抗原结合化合物包含在药盒中。药盒还任选地还可含有许多种抗体和或其它化合物，例如1种、2种、3种、4种或任何其它数量的抗-NKp46抗体和或其它化合物。应当理解，对药盒内容物的这种描述不是以任何方式进行限制。例如，药盒可包含其它类型的治疗剂或诊断剂。优选地，药盒还包括使用抗体和或剂，例如，详述本文所述的方法的说明书。剂型通过将具有所需纯度的化合物例如，抗体与任选的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂以冻干制剂或水溶液的形式混合，制备化合物的治疗制剂以用于储存。关于有关制剂的一般信息，参见，例如，Gilman等编辑,ThePharmacologicalBasesofTherapeutics,第8版。PergamonPress，1990年；Gennaro编辑，Remington’sPharmaceuticalSciences,第18版MackPublishingCo.,Easton,Pa.,1990；Avis等编辑,PharmaceuticalDosageForms:ParenteralMedicationsDekker,NewYork,1993；Lieberman等编辑PharmaceuticalDosageForms:TabletsDekker，纽约，1990；Lieberman等编辑PharmaceuticalDosageForms:DisperseSystemsDekker,NewYork,1990；以及Walters编辑,DermatologicalandTransdermalFormulationsDrugsandthePharmaceuticalSciences,第119卷Dekker，纽约，2002。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒性，并且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵、氯化六烃季铵hexamethoniumchloride、苯扎氯铵、苄索氯铵benzethoniumchloride、苯酚、丁醇或苄醇；对羟苯甲酸烷酯，诸如对羟苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间-甲酚；低分子量小于约10个残基多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷酰氨酸、天冬酰氨酸、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖以及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子，诸如钠离子；金属络合物例如，Zn-蛋白质络合物；和或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或PEG。适用于皮下施用的冻干制剂描述于，例如，美国专利第6,267,958号Andya等中。此类冻干制剂可用合适的稀释剂重构至高蛋白质浓度，并且可将重构的制剂皮下施用给本文中待治疗的哺乳动物。本文的制剂还可含有多于一种活性化合物如上所述的第二药剂，优选具有互补活性但彼此不产生不利影响的那些。此类药剂的类型和有效量取决于例如制剂中存在的化合物的量和类型，以及受试者的临床参数。优选的此类第二药剂是如上所述的。还可将所述活性成分包埋在例如通过凝聚技术或界面聚合作用制备的微胶囊，例如分别为羟基甲基纤维素或明胶微胶囊和聚甲基丙烯酸甲酯微胶囊中；包埋在胶体药物递送系统例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊中；或者包埋在粗乳剂中。例如，在Remington'sPharmaceuticalSciences同上中公开了此类技术。可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有所述化合物的固体疏水性聚合物的半渗透性基质，所述基质为成形制品，例如薄膜或微胶囊的形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶例如，聚甲基丙烯酸2-羟基乙酯或聚乙烯醇、聚丙交酯美国专利第3,773,919号、L-谷氨酸与γL-谷氨酸乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LupronDepotTM由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球和聚-D---3-羟基丁酸。用于体内施用的制剂必须是无菌的。这容易通过在无菌过滤膜上过滤来实现。可用在这些组合物中的药学上可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白诸如人血清白蛋白、缓冲物质诸如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、聚羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。本发明的此外的方面和优点将在下面的实验部分中公开，下面的实验部分应被视为说明性的而非限制本申请的范围。实施例实施例1-NKp46表达在PTCL中获得肿瘤活检物并在冷冻样品上进行染色。利用抗人NKp46抗体克隆“9E2”mIgG1,BecktonDickinson,FranklinLakes,NJ,USA，产品参考557911，通过适用于利用BenchMarkXTVentanaRoche免疫染色的根据标准方案的DAB显色检测法来检测NKp46。对对照同种型mIgG1和对照DAB进行所有染色。另外对CD30进行染色。肿瘤3、4和5来自同一患者。肿瘤1-5来自患有未有特殊说明的PTCL的患者。肿瘤6-8是蕈样霉菌病样品、皮肤T细胞淋巴瘤CTCL。来自从其获得肿瘤样品3、4和5的患者的每个样品的PTCL均具有强膜染色，其中高百分比的细胞是NKp46阳性。从其获得样品3-5的患者具有晚期IV期疾病。另一方面，代表不太晚期疾病I或II期的样品1、2、6、7和8都没有染色或具有低百分比的NKp46+肿瘤细胞。因此，虽然一些肿瘤能够以高水平表达NKp46并因此适合用NKp46结合剂靶向，但肿瘤细胞可在疾病的更晚期阶段或更具侵袭性的疾病中获得NK标志物NKp46。因此，NKp46可能是治疗晚期疾病或预防疾病进展至晚期的特别合适的靶标。另外，用NKp46结合剂治疗较早期疾病可受益于用于鉴定在肿瘤细胞表面上具有突出的NKp46表达的患者的诊断例如，治疗诊断测定。NKp46阳性肿瘤呈CD30阴性；因此，当不能使用抗CD30抗体时或当肿瘤对抗CD30抗体耐药时，NKp46因此此外可代表治疗靶标。实施例2-NKp46在来自ALCL和正视区外结节病NKT淋巴瘤和EATL的样品中表达使用流式细胞术FACS针对NKp46表达对MEC04和SNK6NKT淋巴瘤细胞进行染色，并对各种细胞表面标志物进行表征。Nkp46利用与藻红蛋白PE连接的抗-NKp46抗体进行染色，所评价的另外的标志物是hCD56PE、hCD183CXCR3PE、hCD3PE、hCD4PE、hCD8PE和CD54ICAMPE。收获细胞并使用PE标记的抗体染色。洗涤两次后，在BDFACSCantoII上获得染色并使用FlowJo软件分析。结果示于图1中。抗-NKp46抗体在MEC04和SNK6细胞上显示出染色，但是在SNK6上具有更高的表达。MEC04和SNK6细胞另外在CD183CXCR3、CD56和CD54ICAM情况下被强烈染色，但在CD3、CD4或CD8结外NKT淋巴瘤的最常见表型是表面CD3-和CD56+情况下未能如此。NKT淋巴瘤细胞，特别是鼻型结外NKT细胞淋巴瘤，可以表达NKp46，从而提供用抗-NKp46抗体治疗NKT淋巴瘤的可能性。另外，发现NKp46阳性NKT淋巴瘤肿瘤表达CD183CXCR3、CD56和CD54ICAM，这可允许在预后不良的患者，特别是具有通常与疾病预后不良相关的CXCR3表达的那些患者中施用抗-NKp46。通过用标记的抗-NKp46抗体在冷冻组织切片中对来自人患者的原发性肿瘤细胞染色，进行免疫组织化学IHC分析以提供对患者样品和不同适应症的确认。简言之，已知对NKp46表达呈阳性和阴性的细胞系分别用作阳性和阴性对照。接下来，针对NKp46表达对来自健康供体的冷冻造血组织切片染色，所有这些切片都对NKp46表达呈阴性。在鼻型NKT淋巴瘤中，测试了6个患者样品，其中5个样品是可解释的。所有5个可解释的样品都呈阳性染色，证实了NKT淋巴瘤表达NKp46。在来自经诊断患有肠病相关T细胞淋巴瘤EATL的患者的样品中，6个患者样品中有5个样品是可解释的，其中2个呈阳性染色，3个呈染色阴性，证实了EATL细胞可表达NKp46。在来自经诊断患有间变性大细胞淋巴瘤ALCL的患者的样品中，在4个可解释的患者样品中，3个呈阳性染色，1个呈染色阴性，证实了ALCL细胞可表达NKp46。在对NKp46呈阳性染色的ALCL中，2个样品为ALK+，而一个是ALK-。实施例3-新的抗huNKp46抗体的产生制备重组人NKp46细胞外结构域重组Fc蛋白并将其用于免疫Balbc小鼠。小鼠接受利用50μgNkp46蛋白与完全弗氏佐剂的乳液腹膜内进行的一次初次-免疫primo-immunization、利用50μgNkp46蛋白与不完全弗氏佐剂的乳液腹膜内进行的第二次免疫，以及最后用10μgNkp46蛋白静脉内进行的加强免疫。加强后3天使免疫脾细胞与X63.Ag8.653永生化B细胞融合，并在经辐照的脾细胞存在的情况下进行培养。初级筛选：使用在细胞表面表达人NKp46构建体的报告细胞系，通过流式细胞术在初级筛选中测试生长的克隆的上清液SN。通过用编码嵌合蛋白的逆转录病毒颗粒转导DO.11.10小鼠T细胞杂交瘤来产生报造细胞系，在所述嵌合蛋白中小鼠CD3ζ的胞质内结构域与人NKp46的细胞外部分融合。对于FACS筛选，通过用PE标记的山羊抗小鼠多克隆抗体pAb揭示上清液中反应性抗体的存在。选择结合NKp46的120种抗体用于进一步评估，所述抗体尤其包括8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。然后将抗体制作为嵌合人IgG1抗体。实施例4-抗-NKp46抗体在表达人NKp46的细胞上的结合研究测试抗体包括8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1与人NKp46hNKp46蛋白的结合。通过流式细胞术分析数据。流式细胞术：收获细胞并将其在PBS1XBSA0.2％EDTA2mM缓冲液中于4℃下使用一定剂量范围的抗-NKp46mAb染色30分钟。在染色缓冲液中洗涤两次后，将与抗-NKp46抗体一起孵育的细胞在4℃下用来自Miltenyi的小鼠抗人IgG1-PE单克隆抗体稀释度110染色30分钟。洗涤两次后，在HTFCIntellicyt装置上获得染色并使用ForeCyt软件分析。发现8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1以良好的EC50与人NKp46结合。结果示于表1中。表1实施例5-抗-NKp46对NKp46的结合亲和力通过表面等离子体共振术SPR进行的竞争和亲和力研究BiacoreT100通用程序和试剂在BiacoreT100仪BiacoreGEHealthcare上于25℃下进行SPR测量。在所有Biacore实验中，HBS-EP+BiacoreGEHealthcare和NaOH10mMNaCl500mM分别用作运行缓冲液和再生缓冲液。用BiacoreT100Evaluation软件分析传感图。蛋白G购自GEHealthcare，抗-His抗体来自QIAGEN。在InnatePharma处克隆、生产和纯化人6xHis标记的NKp46重组蛋白NKp46-His。蛋白-G和抗His抗体的固定将蛋白-A和抗His抗体共价固定至传感器芯片CM5上的葡聚糖层中的羧基上。用EDCNHSN-乙基-N'-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺BiacoreGEHealthcare活化芯片表面。将蛋白-A和抗His抗体在偶联缓冲液10mM乙酸盐，pH5.6中稀释至10μgml并注射，直至达到适当的固定水平即，2000至2500RU。使用pH8的100mM乙醇胺BiacoreGEHealthcare进行剩余活化基团的灭活。亲和力研究使用蛋白-G芯片进行亲和力研究。在单循环动力学SCK方案之后进行单价亲和力研究。将12.5nM至200nM的五种连续稀释的可溶性NKp46-His重组蛋白注射到捕获的抗-NKp46抗体未再生上，并使其在再生前解离10分钟。对于每种抗体，使用1:1SCK结合模型拟合整个传感图。结果示于表2中。表2抗体kaM-1*s-1kds-1KDM8B6-A2,67E+050,0010894,08E-098B6-B2,71E+050,0011014,07E-099H11-A2,73E+051,99E-047,28E-109H11-B2,83E+052,53E-048,92E-10实施例6-抗-NKp46抗体与食蟹猕猴MacacafascicularisNKp46蛋白的交叉反应评估抗体包括8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1与食蟹猕猴NKp46NKp46蛋白的结合。从食蟹猕猴cDNA克隆犬Nkp46在下面示出的序列并将其转染到CHO细胞系中。通过流式细胞术分析CHG1-M-H46与CHO-犬NKp46的结合。食蟹猕猴NKp46氨基酸序列：流式细胞术：收获CHO细胞并将其在PBS1XBSA0.2％EDTA2mM缓冲液中于4℃下使用一定剂量范围的抗-NKp46mAb染色30分钟。在染色缓冲液中洗涤两次后，将与抗-NKp46抗体一起孵育的细胞在4℃下用来自Miltenyi的小鼠抗人IgG1-PE单克隆抗体稀释度110染色30分钟。洗涤两次后，在HTFCIntellicyt上获得染色并使用ForeCyt软件分析。8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1以良好的EC50与食蟹猴NKp46结合。结果示于表3中。表3克隆CHG1-M-H46EC50μgmlCHO犬NKp468B6-A0.0298B6-B0.0289H11-A0.0269H11-B0.02517E10.059实施例7：NK细胞诱导针对NKp46+NKT淋巴瘤细胞系的ADCC将选择用于与NKp46结合的抗体，以测试它们作为人IgG1指导NK细胞裂解被制作成表达人NKp46的RAJI肿瘤细胞系的功能性能力。虽然许多抗体在该测定中不能诱导细胞毒性，但几种抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1在诱导ADCC方面是有效的。测试抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1指导NK细胞介导针对NKp46阳性肿瘤靶SNK6NKT淋巴瘤细胞的ADCC的功能性能力。简言之，在来自Greiner的96孔板中在经典的4小时51Cr-释放测定中评估用人CD16V同种型或纯化的NK转染的人NK细胞系KHYG-1的溶细胞活性。用51Cr100μCi3.7MBq1x106个细胞标记SNK6细胞，然后将其在指示浓度的抗体存在的情况下，以等于10的效应子靶标比率与用hCD16残基158处的V等位基因转染以结合人IgG1的KHYG-或NK细胞混合。短暂离心并在37℃孵育4小时后，取出50μL上清液，用TopCountNXTβ检测器PerkinElmerLifeSciences,Boston,MA测量51Cr释放。一式三份分析所有实验组，并如下测定特异性裂解的百分比：100x平均cpm实验释放-平均cpm自发释放平均cpm总释放-平均cpm自发释放。通过用2％TritonX100Sigma裂解靶细胞获得的总释放百分比。结果示于图2中。与阴性对照不相关的嵌合IgG1同种型对照抗体相比，8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1诱导人KHYG-1hCD16VNK细胞系或纯化的NK细胞对SNK6淋巴瘤细胞的特异性裂解，从而表明这些抗体诱导针对表达NKp46的靶细胞的ADCC。实施例8-裸抗-NKp46抗体在RAJI异种移植小鼠模型中表现出抗肿瘤功效在其中Raji细胞表达高水平的NKp46的小鼠长期Raji-hNKp46肿瘤模型中测试抗体。用5.106Raji-hNKp46对SCID小鼠进行静脉内iv移植，并从肿瘤细胞移植当天开始持续3周以300μg小鼠的剂量，每周2次用同种型对照抗体IC或嵌合抗体8B6-A、9H11-B或17E1进行腹膜内i.p.治疗。在注射入小鼠之前，在含有补充的10％热灭活的胎牛血清、1％L-谷氨酰胺、1％钠丙酮酸盐且无抗体的完全RPMI1640培养基中培养Raji-hNKp46。每周对小鼠称重两次。建立卡普兰-迈耶存活曲线以评估经治疗小鼠的存活率。结果示于图3中。所有嵌合抗体均表现出抗肿瘤活性。接受同种型对照的动物的中位存活期为27天。用8B6-A、9H11-B或17E1抗体治疗的小鼠有超过50％的动物在第70天仍然存活，这阻止了对中位存活率的计算并且指示非常强的抗肿瘤效果。实施例9-对抗-NKp46与NKp46的结合的表位作图根据针对实施例5所述的方法，使用抗His抗体芯片进行抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1之间的竞争研究。以10μgmL的恒定浓度注射所有可溶性分析物。对于任何给定的抗-NKp46抗体对，竞争性结合抑制循环分四步进行。在第一步骤中，将NKp46-His重组蛋白捕获到Anti-His芯片上。然后，将第一抗体在捕获的NKp46-His上注射两次，以确保其自身表位几乎完全饱和。在第四步骤和最后一个步骤中，将第二抗体注射到第一抗体NKp46复合物上。监测第二抗体信号，并将其与当将第二抗体注射到捕获的裸抗原上时获得的信号进行比较。在每个循环后，通过短时间注射再生缓冲液再生抗His芯片。竞争矩阵示于图4中。所有抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1均彼此竞争着与NKp46结合，表明这些抗体都与NKp46上的共同区域结合。实施例10：通过流式细胞术对抗-NKp46与现有mAb的竞争的表位作图在SNK6细胞系上评估抗体包括8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1与已知的抗-NKp46mAb195314R&D、9E2BD和Bab281BC的结合竞争。Bab281,mIgG1可从BeckmanCoulter,Inc.Brea，CA，USA商购获得参见Pessino等，J.Exp.Med,1998,1885:953-960和Sivori等，EurJImmunol,1999.29:1656-1666，其描述了铬释放细胞毒性测定。9E2,mIgG1可从BectonDickinsonFranklinLakes,NJ,USA和MiltenyiBiotecBergischGladback,Germany商购获得参见Brando等，2005J.Leukoc.Biol.78:359-371；和El-Sherbiny等，2007CancerResearch6718:8444-9。195314,mIgG2b可从R&DSystems,Inc.Minneapolis,USA商购获得参见Nolte-'tHoen等，2007Blood109:670-673。先前已经报道了克隆195314、9E2和Bab281能阻断NKp46与天然配体的相互作用。通过流式细胞术分析结合竞争。先前定义了每种商业mAb的亚最佳剂量。商业mAb的亚最佳剂量确定：收获SNK6细胞，并在4℃下在PBS1XBSA0.2％EDTA2mM缓冲液中使用一定剂量范围的用PE标记的商业抗-NKp46mAb染色30分钟。洗涤两次后，在HTFCIntellicyt装置上获得染色并使用ForeCyt软件分析。选择低于饱和平台的剂量用于竞争测定。结合竞争测定：收获SNK6细胞并在PBS1XBSA0.2％EDTA2mM缓冲液中进行染色。将PE标记的商业mAb以亚最佳剂量与一定剂量范围的未标记的CHG1-M-H46同时加入，并在4℃下孵育30分钟。洗涤两次后，在HTFCIntellicyt装置上获得染色并使用ForeCyt软件进行分析。竞争矩阵示于图5中。将1μgmL的抗体捕获到蛋白A芯片上，并将重组人NKp46蛋白以5μgmL与第二测试抗体一起注射。抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1彼此竞争着与NKp46蛋白结合。然而，抗体8B6A、8B6B、9H11A、9H11B或17E1均未与已知抗体195314、9E2或Bab281中的任一种竞争着与NKp46蛋白结合。实施例11-ADC的制备将实施例3中获得的抗体包括IPH1、IPH2、IPH3、8B6A、9H11A、9H11B和17E1在PBS中用PNG酶FNewEnglandBiolabs,800Umg的mAb在37℃下糖基化过夜。通过LC-ESI-MS控制反应的完成。使用基于利用点击化学反应基团的两步法，其中首先将具有反应基团的赖氨酸基接头与抗体的受体谷氨酰胺在有机溶剂不存在的情况下结合，然后在有机溶剂存在的情况下与包含PBD和互补反应性基团的第二化合物反应。为了获得与反应性接头结合的中间抗体，将1mgmL去糖基化mAb与每个偶联部位20当量的反应性赖氨酸基接头氨基-PEG-叠氮化物，下面的结构和5UmLBTG在PBS中于37℃孵育过夜。抗体均在其重链的氨基酸残基295KabatEU编号处包含受体谷氨酰胺，使得反应性接头与抗体的每个重链上的残基Q295缀合每个抗体具有两个缀合的部分；DAR＝2。反应性接头的结构如下：NH2-PEG-N3间隔子：通过protA上的亲和色谱纯化mAb-反应性接头缀合物。为了制备包含吡咯并苯并二氮杂PBD二聚体的最终ADC，然后将上述叠氮化物官能化的抗体2mgmL，于PBS1,2-丙烷-二醇5050vv中与每个偶联部位1.75摩尔当量的DBCO-衍生的PBD一起孵育DBCO与叠氮化物反应。将混合物在室温下孵育48-72小时，同时轻轻搅拌。通过LC-ESI-MS控制反应的完成。通过透析MWCO＝10kDa除去过量的衍生的PBD，然后通过尺寸排阻层析Superdex20010300GL柱，GEHealthcare纯化。将最终化合物在Amicon30K装置上进行浓缩。DBCO衍生的PBD化合物的结构如下所示：DBCO-val-ala-PBD：与谷氨酰胺连接的化合物的最终结构由“mAb”表示显示如下：mAb-PEG-DBCO-PBD:实施例12-在淋巴瘤模型中对作为ADC的抗体进行的比较评价使用第一天然或NKp46转导的高NKp46表达人Raji细胞分别为Raji和Raji-NKp46在不同肿瘤模型中测试DAR＝2的携带有PDB二聚体的实施例11的抗-NKp46抗体-药物缀合物，以在高NKp46表达的背景下评估功效。在第二模型中，在源自天然表达NKp46的人鼻型NK-T淋巴瘤的人SNK6细胞系中测试抗-NKp46ADC。材料和方法细胞系和培养基：将Raji和Raji-NKp46在37℃,5％CO2下于补充有10％去补体的FBSLifeTechnologiesSAS+2mML-谷氨酰胺LifeTechnologiesSAS+1mM丙酮酸钠LifeTechnologiesSAS的RPMI1640培养基LifeTechnologiesSAS中培养。将SNK6细胞在37℃,5％CO2下于补充有15％去补体的FBSLifeTechnologiesSAS+2mML-谷氨酰胺LifeTechnologiesSAS+1mM丙酮酸钠LifeTechnologiesSAS+100Uml重组人IL-2的RPMI1640培养基LifeTechnologiesSAS中培养。抗体药物缀合物ADC在实施例11中将抗人NKp46或阴性对照抗体Ab以药物Ab比率为2与PBD毒素偶联。使用的Ab克隆为：8B6A、9H11A、9H11B、17E1，以及与NKp46上的不同表位结合的对NKp46具有高亲和力的抗体：Ab1、Ab2、Ab3以及Ab阴性对照。细胞毒性实验：通过使用CellTiterGlo发光细胞存活力测定Promega测量细胞的ATP产生反映细胞活力来评估PBD偶联的抗-NKp46或对照抗体ADC的功效。在白色不透明平底96孔板FisherScientific的每孔中，将10000个Raji或Raji-NKp46或7500个SNK6细胞接种在在80μL培养基中。在每孔中加入20μL的5X浓缩的ADC一式三份，以获得范围为10μgml至0.01pgml的4或8种不同的终浓度+0μgml对照取决于实验。在37℃，5％CO2下孵育72小时后，加入100μL孔的CellTiterGlo试剂Promega。在室温下于黑暗中孵育10分钟后，使用Glomax发光计Promega测量每个孔中的生物发光信号。使用GraphPadPrism软件分析数据。细胞计数实验：在细胞毒性实验开始时使用100000个细胞点评价细胞NKp46表达。将细胞在冰上于100μl含有110缀合有PE的抗hNKp46克隆9E2NKp46，BDPharmingen或110的缀合有PE的小鼠IgG1同种型对照克隆MOPC-21,BDpharmingen的FACS缓冲液PBS1X,SVF0.2％,EDTA2mM,0.22μm过滤的中孵育。将细胞洗涤两次，并在即将使用细胞计数器BDFACSCanto10-ColorSystem-BDBiosciences之前重悬于含有110000SYTOX蓝色死亡细胞染料MolecularProbes的FACS缓冲液中。使用FlowJo软件分析数据。结果确定每种免疫缀合物的针对肿瘤细胞的细胞毒性的半数最大抑制浓度IC50。Raji-NKp46高表达在高表达Raji-NKp46细胞中，将基于抗体8B6A、9H11A、9H11B、17E1的免疫缀合物与基于与NKp46上的不同表位结合的抗体：Ab1、Ab2、Ab3以及Ab阴性对照的免疫缀合物进行比较。所有免疫缀合物均表现出高功效和相似的IC50值，但是8B6A、9H11A、9H11B和17E1ADC显示出相较于Ab1、Ab2、Ab3的最佳IC50值略有降低的IC50值提高15％至3倍mAb17E1。在不表达NKp46的Raji非转导的细胞中，包括阴性对照在内的所有免疫缀合物的IC50值都是相似的。SNK6NKT细胞淋巴瘤在天然表达NKp46的SNK6细胞中，将基于抗体8B6A、9H11A、9H11B、17E1的免疫缀合物与基于与NKp46上的不同表位结合的抗体：Ab1、Ab2、Ab3以及Ab阴性对照的免疫缀合物进行比较。在此背景下，8B6A、9H11A、9H11B、17E1ADC具有比mAbAb1、Ab2、Ab3中的任一种低得多的IC50值。ADC的IC50比mAbAb1、Ab2、Ab3低50倍9H11A:IC50＝0.00002μgml；9H11B:IC50＝0.00001μgml；17E1:IC50＝0.00001μgml；Ab1:IC50＝0.00059μgml；Ab2:IC50＝0.0007μgml；Ab3:IC50＝0.0001μgml。实施例13-抗体在表达NKp46的B细胞淋巴瘤和NKT淋巴瘤鼻型中内化使用缀合有CypHer5E的抗体通过流式细胞术测试抗-NKp46抗体8B6A或阴性对照不结合NKp46的抗体的内化。CypHer5E染料是一种红色可激发的、pH敏感的花青染料衍生物，其在碱性pH下如在细胞表面处具有最弱的荧光，在酸性pH下如在内部酸性内体中具有最强的荧光。荧光信号增加将与缀合有CypHer5的抗体的内化相关。根据制造商的说明，使用CypHer5ENHS酯试剂盒GEHealthcareLifeSciences将抗体与CypHer5E偶联。将每孔50,000个细胞Raji缺乏表面NKp46、Raji-NKp46和SNK6接种在96孔板中，并在37℃，5％CO2下孵育24小时。在不同时间点将CypHer5偶联的抗体1μgml添加到含有细胞的孔中，以获得细胞与抗体孵育的以下动力学：0分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟、240分钟和24小时。24小时后，将板置于冰上10分钟以停止内化。然后将CypHer5E-抗体加入到对应于0分钟点的孔中。用冷FACS缓冲液洗涤细胞，并将细胞重悬浮于含有110000SYTOX蓝色死亡细胞染料MolecularProbes的冷FACS缓冲液中，并保持在冰上直至使用细胞计数器BDFACSCanto10-ColorSystem-BDBiosciences。使用FlowJo软件分析数据。结果显示抗体8B6A但非对照抗体在表达NKp46的肿瘤细胞Raji-NKp46和SNK6中经历显著的细胞内内化，但在不表达NKp46的Raji细胞中未经历显著的细胞内化。对照抗体未在任何细胞系中内化。实施例14-通过HD交换的表位作图HX-MS技术利用了蛋白质的氢交换HX可以很容易地通过质谱MS跟踪。通过用含氘的含水溶剂代替含氢的含水溶剂，在蛋白质的给定位置掺入氘原子将导致质量增加1Da。可以通过质谱法在交换反应的猝灭样品中监测这种质量增加随时间的变化。可通过在淬灭条件下进行胃蛋白酶消化并跟踪所得肽的质量增加来将氘标记信息亚定位至蛋白质中的区域。HX-MS的一个用途是通过鉴定蛋白质-蛋白质复合物形成后氢交换减少的区域来探测参与分子相互作用的位点。通常，可通过由于溶剂的空间排阻而导致的氢交换的显著减少来揭示结合界面。蛋白质-蛋白质复合物的形成可用HX-MS简单地通过测量在存在和不存在相应结合伴侣的情况下掺入任一蛋白质成员中的氘的总量随时间的变化来检测。HX-MS技术使用天然组分，即蛋白质和抗体或Fab片段，并在溶液中进行。因此，HX-MS提供了模拟体内条件的可能性关于最近对HX-MS技术的综述，参见Wales和Engen,MassSpectrom.Rev.25,1582006。材料和方法：制备NKp46:NKp46-His蛋白，并将其配制成20μM的在PBS中的溶液。将mAb:8B6A、9H11A以及17E1和在PBS中配制成20μM溶液。HX-MS实验。使用PAL系统CTCAnalytics机器人将HDX实验自动化，从而允许启动和停止交换，控制温度和消化持续时间，注射氘代肽，控制注射和洗涤阀门，以及触发质谱仪和HPLC的采集。在4℃下通过Peltier效应冷却的聚苯乙烯盒包含两个Rhéodyne阀6个用于注射的通道和10个用于脱盐的通道、脱盐盒Michrommicrotrap和UPLC柱RRHDEclipsePlusC18,2.1x50mm,1.8u。使用AgilentHPLC泵利用200μl分钟的0.4％甲酸脱盐后，使用AgilentUPLC泵以50μl分钟利用15％至70％的B的梯度A:0.4％的甲酸，B:95％的乙腈，0.08％FA在UPLC柱上分离肽。质谱仪是电喷雾-TOF6210Agilent。使用BrukerSolarixXR15T质谱仪通过串联质谱MS-MS进行作图实验。除了Bruker和Agilent软件以外，还使用Magtran2和HDExaminerSierraAnalytics进行数据处理。在氘代PBS中存在或不存在抗体的情况下，用10μL的NKp4620μM引发氢-氘交换。交换在4℃下进行15秒。通过将10μLNkp4620μM和10μL抗体20μM在4℃下混合至少30分钟来形成抗原-抗体复合物。通过将氯化胍溶液3M与TCEP400mM混合在最终pH为2.5的甘氨酸-HCl1M中来阻断交换。在4℃下进行还原和变性5分钟。每个实验至少重复3次。结果：8B6A、9H11A和17E1的表位作图。在8B6A、9H11A或17E1存在和不存在的情况下监测肽的HX时程15秒，所述肽覆盖了下文SEQIDNO70中所示的NKp46多肽序列的主要序列的实质部分。在这些抗体之一存在或不存在的情况下观察到的氘掺入可以分成两组：一组肽显示出不受抗体与NKp46的结合影响的氘掺入。相反，NKp46中的另一组肽表现出较低的氘掺入，这反映形成了复合物，因为在复合形式中的氘掺入比在非复合形式中低。对于区域100-118、133-151、150-169、177-187的肽，在游离NKp46与含有抗体的复合形式之间观察到氘化的差异。在8B6A存在或不存在的情况下在15秒交换时测量的观察到的氘掺入以百分比表示显示NKp46中的4种以下肽显示出受8B6A与NKp46的结合影响的氘掺入：在8B6A结合后在区域101-105以及区域150-169中观察到氘吸收减少至约12，而在133-151和177-187区域观察到的差异较弱。在9H11A存在或不存在的情况下观察到的氘掺入显示NKp46中的4种以下肽显示出受9H11A与NKp46的结合影响的氘摄取：在区域101-118中的肽存在的情况下氘掺入的百分比下降至约14，在区域150-169中下降至约12，而在135-151和178-187区域中观察到的差异较弱。在17E1存在或不存在的情况下观察到的氘摄取：NKp46中的4种以下肽显示出受17E1A与NKp46的结合影响的掺入：在区域150-169区域中观察到氘摄取减少至12以下，在区域100-105中减少至约13，而在133-151和178-187区域中观察到的差异较弱。结论残基101-118或101-105或100-105内的表位区域以及残基150-169内的区域在结合三种mAb8B6A、9H11A和17E1中的任一种后显示出相对强的保护作用。含有残基135-151或133-151和178-187或177-187的区域在结合在mAb上后显示出较弱的9H11A、8B6A、17E1的交换保护。抗体9H11A两种NKp46肽在9H11A存在的情况下受到强烈影响：NKp46_101-118:DTPTLSVHPGPEVISGEKSEQIDNO:71NKp46_150-169:VQAEFPLGPVTTAHRGTYRCSEQIDNO:72对肽中分子表面有显著贡献的残基是：D101T102T104S106H108P109P111E112I114S115G116E117K118V150Q151E153P155G157P158T160T161A162H163R164T166R168两种NKp46肽在9H11A存在下受到轻微影响：NKp46_178-187:WSFPSEPVKLSEQIDNO:74NKp46_135-151:LKEGRSSHVQRGYGKVQSEQIDNO:76对肽中分子表面有显著贡献的残基是：F180P181E183P184K186E137G138R139S140S141H142Q144R154Y147G148K149V150Q151抗体8B6A在8B6A存在的情况下，两种NKp46肽受到显着影响：NKp46_101-105:DTPTLSEQIDNO:73NKp46_150-169:VQAEFPLGPVTTAHRGTYRCSEQIDNO:72对肽中分子表面有显著贡献的残基是：D101T102T104V150Q151E153P155G157P158T160T161A162H163R164T166R168在8B6A存在的情况下，两种NKp46肽受到微弱影响：NKp46_177-187:WSFPSEPVKLSEQIDNO:75NKp46_133-151:LLLKEGRSSHVQRGYGKVQSEQIDNO:77对肽中分子表面有显著贡献的残基是：F180P181E183P184K186E137G138R139S140S141H142Q144R145Y147G148K149V150Q151抗体17E1在17E1存在的情况下，一种NKp46肽受到强烈影响：NKp46_150-169:VQAEFPLGPVTTAHRGTYRCSEQIDNO:72对肽中分子表面有显著贡献的残基是：V150Q151E153P155G157P158T160T161A162H163R164T166R168在17E1存在的情况下，一种NKp46肽受到显著影响：NKp46_100-105:YDTPTLSEQIDNO:78对肽中分子表面有显著贡献的残基是：Y100D101T102T104在17E1存在的情况下，两种NKp46肽受到微弱影响：NKp46_178-187:WSFPSEPVKLSEQIDNO:74NKp46_133-151:LLLKEGRSSHVQRGYGKVQSEQIDNO:77对肽中分子表面有显著贡献的残基是：F180P181E183P184K186E137G138R139S140S141H142Q144R145Y147G148K149V150Q151图6A、图6B和图6C分别示出NKp46的三级结构在三个方向上，示出了在该三级结构上被抗体9H11A、8B6A和17E1结合的区段。如图所示，抗体与NKp46的D2结构域结合。所有标题和子标题在本文仅为了方便，不应被解释为以任何方式限制本发明。在其所有可能的改变中上述组分的任何组合涵盖于本发明中，除非本文另外说明或与上下文明显矛盾。本文中值的范围的引用仅旨在用作单独地参考落在该范围内的每个单独值的速记方法，并且除非本文另外说明，否则将每个单独的数值并入说明书如同其在本文单独列举。除非另有说明，否则本文提供的所有精确值均代表相应的近似值例如，在适当的情况下，关于特定因子或测量提供的所有精确的示例性值可被视为还提供相应的由“约”修饰的近似测量。除非本文另外指明或以其他方式与上下文明显矛盾，否则可按任何合适的顺序来执行本文所述的所有方法。除非另有说明，否则本文提供的任何和所有实例或示例性语言例如，“诸如”的使用仅旨在更好地说明本发明，而不是对本发明的范围施加限制。除非常明确说明外，本说明书中的语言都不应被解释为说明任何要素对本发明的实践是必要的。本文中引用和并入专利文献仅是为了方便，并不反映此类专利文献的有效性、可专利性和或可执行性的任何观点。使用诸如参考一个或多个要素的术语在本文中描述本发明的任何方面或实施方案旨在为本发明的类似方面或实施方案提供支持，除非另有说明或与上下文明显矛盾，否则“由......组成”、“基本上由......组成”或“基本上包含”一个或多个该特定要素例如，除非另有说明或与上下文明显矛盾，在本文中描述为包含特定要素的组合物应当被理解为也描述由该要素组成的组合物。本发明在适用法律允许的最大程度上包括在本文提出的方面或权利要求书中叙述的主题的所有修改和等同物。本说明书中引用的所有出版物和专利申请均通过引用整体并入本文，就如同每篇单独的出版物或专利申请被具体单独地指出通过引用并入。尽管出于清楚理解的目的，已经通过举例说明和实施例相当详细地描述了前述发明，但是根据本发明的教义，本领域的普通技术人员将容易明了，在不背离所附权利要求书的精神和范围情况下，可以对本发明进行某些改变和修改。序列表依奈特制药公司INNATEPHARMANKP46结合剂NKP46-8US62449,6172017-01-24US62530,4432017-07-1078PatentIn3.5版1304PRT智人homosapiens1MetSerSerThrLeuProAlaLeuLeuCysValGlyLeuCysLeuSer151015GlnArgIleSerAlaGlnGlnGlnThrLeuProLysProPheIleTrp202530AlaGluProHisPheMetValProLysGluLysGlnValThrIleCys354045CysGlnGlyAsnTyrGlyAlaValGluTyrGlnLeuHisPheGluGly505560SerLeuPheAlaValAspArgProLysProProGluArgIleAsnLys65707580ValLysPheTyrIleProAspMetAsnSerArgMetAlaGlyGlnTyr859095SerCysIleTyrArgValGlyGluLeuTrpSerGluProSerAsnLeu100105110LeuAspLeuValValThrGluMetTyrAspThrProThrLeuSerVal115120125HisProGlyProGluValIleSerGlyGluLysValThrPheTyrCys130135140ArgLeuAspThrAlaThrSerMetPheLeuLeuLeuLysGluGlyArg145150155160SerSerHisValGlnArgGlyTyrGlyLysValGlnAlaGluPhePro165170175LeuGlyProValThrThrAlaHisArgGlyThrTyrArgCysPheGly180185190SerTyrAsnAsnHisAlaTrpSerPheProSerGluProValLysLeu195200205LeuValThrGlyAspIleGluAsnThrSerLeuAlaProGluAspPro210215220ThrPheProAlaAspThrTrpGlyThrTyrLeuLeuThrThrGluThr225230235240GlyLeuGlnLysAspHisAlaLeuTrpAspHisThrAlaGlnAsnLeu245250255LeuArgMetGlyLeuAlaPheLeuValLeuValAlaLeuValTrpPhe260265270LeuValGluAspTrpLeuSerArgLysArgThrArgGluArgAlaSer275280285ArgAlaSerThrTrpGluGlyArgArgArgLeuAsnThrGlnThrLeu2902953002306PRT食蟹猕猴Macacafascicularis2MetSerSerThrLeuArgAlaLeuLeuCysLeuGlyLeuCysLeuSer151015GlnArgIleSerAlaProLysGlnThrLeuProLysProIleIleArg202530AlaGluSerThrTyrMetValProLysGluLysGlnAlaThrLeuCys354045CysGlnGlySerTyrGlyAlaValGluTyrGlnLeuHisPheGluGly505560SerLeuPheAlaValGluArgProLysProProGluArgIleAsnGly65707580ValLysPheHisIleProAspMetAsnSerArgLysAlaGlyArgTyr859095SerCysIleTyrArgValGlyGluLeuTrpSerGluArgSerAspLeu100105110LeuAspLeuValValThrGluMetTyrAspThrProThrLeuSerVal115120125HisProGlyProGluValThrSerGlyGluLysValThrPheTyrCys130135140ArgLeuAspThrAlaThrSerMetPheLeuLeuLeuLysGluGlyArg145150155160SerArgAspValGlnArgSerTyrGlyLysValGlnAlaGluPhePro165170175MetGlyProValThrThrAlaHisArgGlySerTyrArgCysPheGly180185190SerTyrAsnAsnTyrAlaTrpSerPheProSerGluProValLysLeu195200205LeuValThrGlyAspIleGluAsnThrSerLeuAlaProThrAspPro210215220ThrPheProAspSerTrpAspThrCysLeuLeuThrArgGluThrGly225230235240LeuGlnLysAspLeuAlaLeuTrpAspHisThrAlaGlnAsnLeuLeu245250255ArgMetGlyLeuAlaPheLeuValLeuValAlaLeuValCysLeuLeu260265270ValGluAspTrpLeuSerArgLysArgThrArgGluGlnAlaSerArg275280285AlaSerThrTrpGluGlyArgArgArgLeuAsnLysHisLysAspSer290295300GluGlu3053115PRT小家鼠Musmusculus3GlnValGlnLeuGlnGlnProGlySerGluLeuValArgProGlyAla151015SerValLysLeuSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrSerTyr202530TrpMetHisTrpValLysGlnArgProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle354045GlyThrIleTyrProGlySerAspIleThrAsnTyrAspGluLysPhe505560LysAsnLysAlaThrLeuThrValAspThrSerSerSerThrAlaTyr65707580MetGlnLeuSerSerLeuThrSerGluAspSerAlaValTyrTyrCys859095ThrArgAspGlyArgPheAlaAsnTrpGlyGlnGlyThrLeuValThr100105110ValSerAla1154105PRT小家鼠Musmusculus4GluIleValLeuThrGlnSerProAlaIleThrAlaAlaSerLeuGly151015GlnLysValThrIleThrCysSerAlaSerSerSerValSerTyrMet202530HisTrpTyrGlnGlnLysSerGlyThrSerProLysProTrpIleTyr354045GluIleSerLysLeuAlaSerGlyValProAlaArgPheSerGlySer505560GlySerGlyThrSerTyrSerLeuThrIleSerSerMetGluAlaGlu65707580AspAlaAlaIleTyrTyrCysGlnGlnTrpAsnLeuProLeuThrPhe859095GlyAlaGlyThrLysLeuGluLeuLys10010555PRT小家鼠Musmusculus5SerTyrTrpMetHis1567PRT小家鼠Musmusculus6GlyTyrThrPheThrSerTyr1578PRT小家鼠Musmusculus7GlyTyrThrPheThrSerTyrTrp15817PRT小家鼠Musmusculus8ThrIleTyrProGlySerAspIleThrAsnTyrAspGluLysPheLys151015Asn94PRT小家鼠Musmusculus9ProGlySerAsp1108PRT小家鼠Musmusculus10IleTyrProGlySerAspIleThr15116PRT小家鼠Musmusculus11AspGlyArgPheAlaAsn15124PRT小家鼠Musmusculus12GlyArgPheAla1138PRT小家鼠Musmusculus13ThrArgAspGlyArgPheAlaAsn151410PRT小家鼠Musmusculus14SerAlaSerSerSerValSerTyrMetHis1510156PRT小家鼠Musmusculus15SerSerSerValSerTyr15165PRT小家鼠Musmusculus16SerSerValSerTyr15177PRT小家鼠Musmusculus17GluIleSerLysLeuAlaSer15185PRT小家鼠MusmusculusX4..5X可以是任意氨基酸18GluIleSerXaaXaa15198PRT小家鼠Musmusculus19GlnGlnTrpAsnLeuProLeuThr15205PRT小家鼠Musmusculus20TrpAsnLeuProLeu1521107PRT小家鼠Musmusculus21GluIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerLeuGly151015GluArgValSerLeuThrCysArgAlaSerGlnAspIleGlySerSer202530LeuAsnTrpLeuGlnGlnGluProAspGlyThrIleLysArgLeuIle354045TyrAlaThrSerSerLeuAspSerGlyValProLysArgPheSerGly505560SerArgSerGlySerAspTyrSerLeuThrIleSerSerLeuGluSer65707580GluAspPheValAspTyrTyrCysLeuGlnTyrAlaSerSerProTyr859095ThrPheGlyGlyGlyThrLysLeuGluIleLys1001052211PRT小家鼠Musmusculus22ArgAlaSerGlnAspIleGlySerSerLeuAsn1510237PRT小家鼠Musmusculus23SerGlnAspIleGlySerSer15246PRT小家鼠Musmusculus24GlnAspIleGlySerSer15257PRT小家鼠Musmusculus25AlaThrSerSerLeuAspSer15265PRT小家鼠MusmusculusX4..5X可以是任意氨基酸26AlaThrSerXaaXaa15279PRT小家鼠Musmusculus27LeuGlnTyrAlaSerSerProTyrThr15286PRT小家鼠Musmusculus28TyrAlaSerSerProTyr1529117PRT小家鼠Musmusculus29GlnValGlnLeuGlnGlnProGlyAlaGluLeuValLysProGlyAla151015SerValLysLeuSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrSerTyr202530TrpMetHisTrpValLysLeuArgProGlyGlnGlyPheGluTrpIle354045GlyGluIleIleProSerAsnGlyValThrAsnTyrAsnGluLysPhe505560LysArgLysAlaThrLeuThrValAspLysSerSerSerThrAlaTyr65707580MetGlnLeuSerSerLeuThrSerGluAspSerAlaValTyrTyrCys859095ThrIleArgLeuArgTyrAlaLeuAspTyrTrpGlyGlnGlyThrSer100105110ValThrValSerAla11530107PRT小家鼠Musmusculus30AspIleGlnMetThrGlnThrThrSerSerLeuSerAlaSerLeuGly151015AspArgValThrIleSerCysArgAlaSerGlnAspIleSerAsnPhe202530LeuAsnTrpTyrGlnGlnLysProAspGlyThrValLysLeuLeuIle354045TyrTyrThrSerArgLeuHisSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspTyrSerLeuThrIleSerAsnLeuGluGln65707580GluAspIleAlaThrTyrPheCysGlnGlnGlyAsnThrLeuProPro859095ThrPheGlyGlyGlyThrLysLeuGluIleLys100105315PRT小家鼠Musmusculus31SerTyrTrpMetHis15327PRT小家鼠Musmusculus32GlyTyrThrPheThrSerTyr15338PRT小家鼠Musmusculus33GlyTyrThrPheThrSerTyrTrp153417PRT小家鼠Musmusculus34GluIleIleProSerAsnGlyValThrAsnTyrAsnGluLysPheLys151015Arg354PRT小家鼠Musmusculus35ProSerAsnGly1368PRT小家鼠Musmusculus36IleIleProSerAsnGlyValThr15378PRT小家鼠Musmusculus37ArgLeuArgTyrAlaLeuAspTyr15386PRT小家鼠Musmusculus38LeuArgTyrAlaLeuAsp153910PRT小家鼠Musmusculus39ThrIleArgLeuArgTyrAlaLeuAspTyr15104011PRT小家鼠Musmusculus40ArgAlaSerGlnAspIleSerAsnPheLeuAsn1510417PRT小家鼠Musmusculus41SerGlnAspIleSerAsnPhe15426PRT小家鼠Musmusculus42GlnAspIleSerAsnPhe15437PRT小家鼠Musmusculus43TyrThrSerArgLeuHisSer15445PRT小家鼠MusmusculusX4..5X可以是任意氨基酸44TyrThrSerXaaXaa15459PRT小家鼠Musmusculus45GlnGlnGlyAsnThrLeuProProThr15466PRT小家鼠Musmusculus46GlyAsnThrLeuProPro1547107PRT小家鼠Musmusculus47AspIleValMetThrGlnSerGlnLysPheMetSerThrSerValGly151015AspArgValSerValThrCysLysAlaSerGlnAsnValGlyThrAsn202530ValAlaTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnSerProLysAlaLeuIle354045TyrSerThrSerPheArgTyrSerGlyValProAspArgPheThrGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerAsnValGlnSer65707580GluAspLeuAlaGluTyrPheCysGlnGlnTyrAsnSerTyrProPhe859095ThrPheGlySerGlyThrLysLeuGluIleLys1001054811PRT小家鼠Musmusculus48LysAlaSerGlnAsnValGlyThrAsnValAla1510497PRT小家鼠Musmusculus49SerGlnAsnValGlyThrAsn15506PRT小家鼠Musmusculus50GlnAsnValGlyThrAsn15517PRT小家鼠Musmusculus51SerThrSerPheArgTyrSer15525PRT小家鼠MusmusculusX4..5X可以是任意氨基酸52SerThrSerXaaXaa15539PRT小家鼠Musmusculus53GlnGlnTyrAsnSerTyrProPheThr15546PRT小家鼠Musmusculus54TyrAsnSerTyrProPhe1555115PRT小家鼠Musmusculus55GlnValGlnLeuGlnGlnProGlySerValLeuValArgProGlyAla151015SerValLysLeuSerCysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrSerSer202530TrpMetHisTrpAlaLysGlnArgProGlyGlnGlyLeuGluTrpIle354045GlyHisIleHisProAsnSerGlyIleSerAsnTyrAsnGluLysPhe505560LysGlyLysAlaThrLeuThrValAspThrSerSerSerThrAlaTyr65707580ValAspLeuSerSerLeuThrSerGluAspSerAlaValTyrTyrCys859095SerArgGlyGlyArgPheAspAspTrpGlyAlaGlyThrThrValThr100105110ValSerSer11556107PRT小家鼠Musmusculus56AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerLeuSerAlaSerLeuGly151015GluArgValSerLeuThrCysArgAlaSerGlnAspIleGlySerSer202530LeuAsnTrpLeuGlnGlnGluProAspGlyThrIleLysArgLeuIle354045TyrAlaThrSerArgLeuAspSerGlyValProLysArgPheSerGly505560SerArgSerGlySerAspTyrSerLeuThrIleSerSerLeuGluSer65707580GluAspPheValAspTyrTyrCysLeuGlnTyrAlaSerSerProTrp859095ThrPheGlyGlyGlyThrLysLeuGluIleLys100105575PRT小家鼠Musmusculus57SerSerTrpMetHis15587PRT小家鼠Musmusculus58GlyTyrThrPheThrSerSer15598PRT小家鼠Musmusculus59GlyTyrThrPheThrSerSerTrp156017PRT小家鼠Musmusculus60HisIleHisProAsnSerGlyIleSerAsnTyrAsnGluLysPheLys151015Gly614PRT小家鼠Musmusculus61ProAsnSerGly1628PRT小家鼠Musmusculus62IleHisProAsnSerGlyIleSer15636PRT小家鼠Musmusculus63GlyGlyArgPheAspAsp15644PRT小家鼠Musmusculus64GlyArgPheAsp1658PRT小家鼠Musmusculus65SerArgGlyGlyArgPheAspAsp15667PRT小家鼠Musmusculus66AlaThrSerArgLeuAspSer15679PRT小家鼠Musmusculus67LeuGlnTyrAlaSerSerProTrpThr15686PRT小家鼠Musmusculus68TyrAlaSerSerProTrp1569218PRT智人homosapiens69ProAlaProGluLeuLeuGlyGlyProSerValPheLeuPheProPro151015LysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThrProGluValThrCys202530ValValValAspValSerHisGluAspProGluValLysPheAsnTrp354045TyrValAspGlyValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGlu505560GluGlnTyrAsnSerThrTyrArgValValSerValLeuThrValLeu65707580HisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsn859095LysAlaLeuProAlaProIleGluLysThrIleSerLysAlaLysGly100105110GlnProArgGluProGlnValTyrThrLeuProProSerArgAspGlu115120125LeuThrLysAsnGlnValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPheTyr130135140ProSerAspIleAlaValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGluAsn145150155160AsnTyrLysThrThrProProValLeuAspSerAspGlySerPhePhe165170175LeuTyrSerLysLeuThrValAspLysSerArgTrpGlnGlnGlyAsn180185190ValPheSerCysSerValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyrThr195200205GlnLysSerLeuSerLeuSerProGlyLys21021570234PRT智人homosapiens70GlnGlnGlnThrLeuProLysProPheIleTrpAlaGluProHisPhe151015MetValProLysGluLysGlnValThrIleCysCysGlnGlyAsnTyr202530GlyAlaValGluTyrGlnLeuHisPheGluGlySerLeuPheAlaVal354045AspArgProLysProProGluArgIleAsnLysValLysPheTyrIle505560ProAspMetAsnSerArgMetAlaGlyGlnTyrSerCysIleTyrArg65707580ValGlyGluLeuTrpSerGluProSerAsnLeuLeuAspLeuValVal859095ThrGluMetTyrAspThrProThrLeuSerValHisProGlyProGlu100105110ValIleSerGlyGluLysValThrPheTyrCysArgLeuAspThrAla115120125ThrSerMetPheLeuLeuLeuLysGluGlyArgSerSerHisValGln130135140ArgGlyTyrGlyLysValGlnAlaGluPheProLeuGlyProValThr145150155160ThrAlaHisArgGlyThrTyrArgCysPheGlySerTyrAsnAsnHis165170175AlaTrpSerPheProSerGluProValLysLeuLeuValThrGlyAsp180185190IleGluAsnThrSerLeuAlaProGluAspProThrPheProAlaAsp195200205ThrTrpGlyThrTyrLeuLeuThrThrGluThrGlyLeuGlnLysAsp210215220HisAlaLeuTrpAspHisThrAlaGlnAsn2252307118PRT智人homosapiens71AspThrProThrLeuSerValHisProGlyProGluValIleSerGly151015GluLys7220PRT智人homosapiens72ValGlnAlaGluPheProLeuGlyProValThrThrAlaHisArgGly151015ThrTyrArgCys20735PRT智人homosapiens73AspThrProThrLeu157410PRT智人homosapiens74TrpSerPheProSerGluProValLysLeu15107511PRT智人homosapiens75AlaTrpSerPheProSerGluProValLysLeu15107617PRT智人homosapiens76LeuLysGluGlyArgSerSerHisValGlnArgGlyTyrGlyLysVal151015Gln7719PRT智人homosapiens77LeuLeuLeuLysGluGlyArgSerSerHisValGlnArgGlyTyrGly151015LysValGln786PRT智人homosapiens78TyrAspThrProThrLeu15

权利要求：1.一种与选自由以下组成的组的抗体竞争着与SEQIDNO:1的NKp46多肽结合的抗体或抗体片段：8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。2.一种与选自由以下组成的组的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸结合的抗体或抗体片段：i.SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或101-105或100-105，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或101-105或100-105的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；ii.SEQIDNO:70的氨基酸残基150-169，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基150-169的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；iii.SEQIDNO:70的氨基酸残基135-151或133-151，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基135-151或133-151的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；iv.SEQIDNO:70的氨基酸残基178-187或177-187，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基178-187或177-187的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基；v.SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或100-105或101-105和150-169，或对应于SEQIDNO:70的氨基酸残基101-118或100-105或101-105和150-169的哺乳动物NKp46蛋白上的氨基酸残基。3.一种包含选自由以下组成的组的高变区的抗体或抗体片段：a包含以下的高变区：i含有SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链和ii含有SEQIDNO:4的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；b包含以下的高变区：i含有SEQIDNO:3的重链可变区的CDR1、2和3的重链和ii含有SEQIDNO:21的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；c包含以下的高变区：i含有SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链和ii含有SEQIDNO:30的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；d包含以下的高变区：i含有SEQIDNO:29的重链可变区的CDR1、2和3的重链和ii含有SEQIDNO:47的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链；以及e包含以下的高变区：i含有SEQIDNO:55的重链可变区的CDR1、2和3的重链和ii含有SEQIDNO:56的轻链可变区的CDR1、2和3的轻链。4.一种单克隆抗体或抗体片段，其包含如权利要求3所述的高变区。5.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中将所述抗体与细胞毒性剂缀合。6.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段包含官能化的受体谷氨酰胺残基Q，所述官能化的受体谷氨酰胺残基包含如下结构：Q–L”–Y–Z或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：Q为存在于所述抗体或抗体片段的恒定区内或附接于所述恒定区的谷氨酰胺残基；L”为赖氨酸基接头，其中氮原子以仲胺形式与Q的γ碳共价键合；Y为间隔子系统；以及Z为细胞毒性剂。7.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述细胞毒性剂是DNA小沟结合剂。8.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述细胞毒性剂包含吡咯并苯并二氮杂部分。9.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含基本上不结合人FcγIIIA受体多肽的人重链恒定区。10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含含有氨基酸修饰的人重链恒定区，所述氨基酸修饰使得与人FcγIIIA受体的结合同不含此种修饰的相同同种型的抗体相比减少。11.如权利要求1-8中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含结合人FcγIIIA受体多肽的人重链恒定区。12.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体具有包含人框架氨基酸序列的重链和轻链可变区。13.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体与SEQIDNO:2的非人灵长类动物NKp46多肽结合。14.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体对于与NKp46多肽的结合具有小于10-9M的二价Kd。15.如上述权利要求中任一项所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体或抗体片段是嵌合的、人的或人源化的。16.如上述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体是四聚体抗体。17.如权利要求3-16所述的抗体或抗体片段，其中所述抗体与选自由以下组成的组的抗体竞争着与SEQIDNO:1的NKp46多肽结合：8B6A、8B6B、9H11A、9H11B和17E1。18.一种蛋白质，其包含如权利要求1-16所述的抗体片段。19.如权利要求18所述的蛋白质，其中所述蛋白质是嵌合细胞表面受体蛋白质。20.如权利要求18所述的蛋白质，其中所述蛋白质包含Fc结构域。21.如权利要求1-18所述的抗体，其中所述抗体片段选自由以下组成的组：Fab、Fab'、Fab'-SH、Fab'2、Fv、双抗体、单链抗体片段或包含多个不同抗体片段的多特异性抗体。22.一种核酸或一组核酸，其编码如权利要求1至21中任一项所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质。23.一种药物组合物，其包含根据上述权利要求中任一项所述的抗体、抗体片段、高变区、核酸或蛋白质，以及药学上可接受的载体。24.一种药盒，其包含如上述权利要求中任一项所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质，任选地还包含特异性识别如上述权利要求中任一项所述的抗体的标记的第二抗体。25.一种重组宿主细胞，其产生如权利要求1至21所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质。26.一种用于治疗或预防有需要的个体的疾病的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的如权利要求1-21所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质，或如权利要求23所述的组合物。27.如权利要求26所述的方法，其中所述疾病是癌症。28.一种用于鉴定个体中NKp46表达细胞的存在的方法，所述方法包括从包含细胞的个体获得生物样品，使所述细胞与如权利要求1-21所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质接触，以及评估所述抗体是否与所述细胞结合。29.一种用于选择患有对利用如权利要求1-21所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质或如权利要求23所述的组合物的治疗有反应的疾病的个体的方法，所述方法包括确定所述个体中的肿瘤细胞是否表达NKp46多肽，NKp46多肽的表达指示应答受试者。30.如权利要求29所述的方法，所述方法还包括向应答个体施用如权利要求1-23所述的组合物。31.如权利要求26-30所述的方法，其中所述疾病是淋巴瘤。32.如权利要求26-31所述的方法，其中所述个体患有难治性乳糜泻，任选地为RCDI或RCDII。33.一种用于治疗或预防有需要的个体的淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量的如权利要求1-21所述的抗体、抗体片段、高变区或蛋白质或如权利要求23所述的组合物。34.如权利要求31所述的方法，其中所述淋巴瘤是外周T细胞淋巴瘤PTCL。35.如权利要求34所述的方法，其中所述PTCL选自由以下组成的组：PTCL-NOS、AITL或ALCLALK+或ALK-、ATL、NK-T细胞淋巴瘤、鼻型结外NK-T细胞淋巴瘤和EATL。

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