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申请/专利权人：浙江工业大学

摘要：本发明公开了一种同时检测人血浆中敌草快及其人体代谢物含量的方法，该方法采用乙腈蛋白萃取法对血浆样品进行前处理，然后利用Hilic离子色谱柱进行分离，最后采用安捷伦高效液相色谱联用质谱，通过化合物的离子碎片信息和化合物的浓度与质谱信号强度之间的关系，实现对血浆样品中敌草快及其代谢物的定量和定性分析。本发明可有效地同时检测人血浆中敌草快及其代谢物的含量，有利于提高其回收率，有助于降低相对标准偏差，有利于提高检出限，本发明具有灵敏度高、准确及重复性好的优点，为急性敌草快中毒患者的血浆样本中的母本及代谢物的含量检测提供指导。

主权项：1.一种同时检测人血浆中敌草快及其人体代谢物含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1配制标准工作溶液：首先配制敌草快母液、敌草快单吡啶酮母液、敌草快双吡啶酮母液，具体为：用万分之一天平精密称取敌草快、敌草快单吡啶酮和敌草快双吡啶酮各0.5mg，分别加入80％乙腈水溶液溶解，摇匀，得到质量浓度为1mgmL的敌草快母液、敌草快单吡啶酮母液和敌草快双吡啶酮母液；然后配制内标化合物母液，具体为：精密称取0.5mg的敌草快氘代同位素，将其置于1.5mL的EP进样瓶中，用80％乙腈水溶液溶解，得到质量浓度为1mgmL的内标化合物母液；最后配制混合标准工作溶液，具体为：分别取敌草快母液、敌草快单吡啶酮母液、敌草快双吡啶酮母液和内标化合物母液各250μL置于EP进样瓶中进行混合，得到质量浓度为0.25mgmL的混合标准工作溶液；上述溶液均置于-20℃冰箱储存备用；2样品前处理：首先将处于-80℃条件下的人血浆样品放在25℃下解冻，并进行涡旋混合，再取100μL血浆样品于1.5mL的EP管中，然后加入内标化合物母液20μL，进行涡旋混合，再加入300μL乙腈，进行涡旋混合，再在14000×g下离心20min，用0.22μm的有机滤头过滤，在40℃低流速下氮吹浓缩至干，最后用100μL体积浓度为80％的乙腈水溶液复溶，转移至EP进样瓶中进样分析；3采用液相色谱串联质谱在色谱条件和质谱条件下对进样进行定量测定和定性鉴定，以获取血浆样品中的敌草快及其代谢物含量；其中，所述色谱条件具体包括：采用安捷伦HilicZ色谱柱进行分离，色谱柱的内径为2.1mm，柱长为100mm，该色谱柱的填料颗粒直径为2.7μm，柱温为35℃；进样体积为2μL，采用浓度为20mM的甲酸铵溶液和纯乙腈溶液作为流动相对进样进行梯度洗脱，流速为0.30mLmin；所述质谱条件具体包括：使用电喷雾源正离子模式，源气体温度为350℃，流速为8Lmin；喷雾器压力为55psi，鞘气温度为380℃，流速为12Lmin；毛细管电压为1.0kV，在正离子模式下测定敌草快、敌草快单吡啶酮、敌草快双吡啶酮和内标化合物的质谱参数。使用安捷伦Masshunter软件采集数据，根据采集到的质谱参数以及色谱图进行定量测定和定性鉴定，获取血浆样品中的敌草快、敌草快单吡啶酮和敌草快双吡啶酮含量。

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