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摘要:本发明公开了肿瘤抑制基因编码蛋白ZMYND10通过与组蛋白甲基化酶EZH2互作调控细胞增殖在抗癌生物治疗中的应用,属于抗癌生物治疗技术领域,目前已在培养细胞和实验动物的人类肿瘤移植瘤证实,BLU基因的转移能通过调控胞内的信号通路和染色质的表观遗传学修饰,调节与细胞周期运行和细胞凋亡相关基因的表达,BLU基因的编码产物ZMYND10,能结合阻遏复合物,或者影响组蛋白中阻遏性标识的修饰,改变细胞周期调节物的表达水平,阻滞细胞周期运行,从而抑制组织细胞增殖,发挥肿瘤抑制活性。
主权项:1.肿瘤抑制基因编码蛋白ZMYND10通过与组蛋白甲基化酶EZH2互作调控细胞增殖在抗癌生物治疗中的应用,包括如下步骤:步骤一:于培养板接种上肿瘤细胞,细胞贴壁之后,更换生长液,向生长液中滴加重组腺病毒Ad5悬液或使用DNA溶液和脂质体的混合液孵育细胞;步骤二:在规定时间收获细胞,转入细胞的基因表达载体带有绿色荧光蛋白标签,故于收获前于荧光显微镜下观察细胞的荧光着色情况,以了解转移的基因是否表达,并使用试剂盒染色测定细胞活力;步骤三:收获后免疫吸印法验证ZMYND10表达,以及EZH2表达水平、H3K27甲基化水平改变和p16CDKN2A的表达水平;步骤四:收获的细胞染色固定后,碘化丙啶染色,以流式细胞仪分析细胞周期;步骤五:培养细胞收集后,进行PBS溶液冲洗,悬液接种于免疫缺陷小鼠皮下,观察移植瘤生长;步骤六:瘤内注射插入BLu的重组腺病毒和对照病毒,观察BLu基因表达对移植瘤生长的影响;步骤七:改建质粒表达载体的框架,插入干扰RNA片段,当期在腺病毒病毒颗粒的基因组进行同源重组时,表达的siRNA能沉默病毒的凋亡抑制蛋白E1B。
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百度查询: 广东医科大学 肿瘤抑制基因编码蛋白ZMYND10通过与组蛋白甲基化酶EZH2互作调控细胞增殖在抗癌生物治疗中的应用
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