首页 专利交易 科技果 科技人才 科技服务 商标交易 会员权益 IP管家助手 需求市场 关于龙图腾
 /  免费注册
到顶部 到底部
清空 搜索

用于金钱白花蛇药材、标准汤剂及中药配方颗粒PCR鉴别的引物组合及其应用、鉴别方法 

买专利卖专利找龙图腾,真高效! 查专利查商标用IPTOP,全免费!专利年费监控用IP管家,真方便!

申请/专利权人:广东一方制药有限公司

摘要:本发明公开了一种用于金钱白花蛇药材、标准汤剂及中药配方颗粒PCR鉴别的引物组合,其包括引物一和引物二,其中,引物一为核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的DNA分子,引物二为核苷酸序列如SEQIDNO:2所示的DNA分子。本发明还公开了上述引物组合的应用,以及基于该引物组合的鉴别方法。实施本发明,可有效鉴别金钱白花蛇药材、标准汤剂以及中药配方颗粒。

主权项:1.一种金钱白花蛇药材、金钱白花蛇标准汤剂及金钱白花蛇中药配方颗粒的PCR鉴别方法,其特征在于,包括:取待检测样品0.3~0.8g,研磨成粉末,置离心管中,加入1~1.8mL的CTAB沉淀液、15~25μL蛋白酶K,混合均匀,在50~60℃下加热45~65min,冷却至室温后离心,弃去上清液;加入800~1000μLCTAB沉淀液、15~25μL蛋白酶K,混合均匀,在50~60℃下加热45~65min,冷却至室温后离心,弃去上清液;取沉淀加入800~1000μLCTAB提取液,5~15μLβ-巯基乙醇,混合均匀,在60~70℃下加热100~150min,离心,冷却至室温;取提取后上清液,加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,震荡混匀后离心,取上清液700~800μL,再加入等体积的氯仿-异戊醇混合液,震荡混匀后离心,取上清液400~500μL,加入等体积的异丙醇或异丙醇-乙酸钠混合液,于-30~-20℃静置30~60min,离心后弃去上清液,再用乙醇洗涤沉淀2~4次,弃去上清液,沉淀于35~38℃孵育20~40min,待乙醇挥发后,加入30~50μL灭菌水溶解,即得到待检测样品的基因组DNA;其中,所述CTAB沉淀液的组成为:2%(wv)CTAB,100mmolLTris-HCl,20mmolLEDTA;所述CTAB提取液的组成为:2%(wv)CTAB,100mmolLTris-HCl,20mmolLEDTA,2.5molLNaCl,20%(wv)PVP40;其中,Tris-HCl、EDTA的pH均为8.0;以所述基因组DNA为DNA模板,采用核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的引物一、核苷酸序列如SEQIDNO:2所示的引物二进行PCR扩增,若扩增产物中含有160bp的DNA片段,则待检测样品为金钱白花蛇药材、金钱白花蛇标准汤剂或金钱白花蛇中药配方颗粒;其中,PCR扩增体系由下述物质组成:10×PCRBufferⅠMg2+plus2.5μL,dNTPMixture0.6μL,引物一0.3μL,引物二0.3μL,Ex-Taq0.3μL,DNA模板1μL,去离子水20μL;所述PCR扩增程序为:将所述扩增体系在95℃预变性5min,然后在预设程序下循环35次,最后在72℃延伸5min;其中,所述预设程序为:将扩增体系在95℃变性30s,然后在61℃退火30s,再在72℃延伸30s。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 广东一方制药有限公司 用于金钱白花蛇药材、标准汤剂及中药配方颗粒PCR鉴别的引物组合及其应用、鉴别方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息,力求客观、公正,但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解,仅供参考使用,不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。