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申请/专利权人：汕尾信民生休闲农业有限公司;汕尾市现代畜牧产业研究院
摘要：本发明公开了一种长白猪睾丸间质干细胞系的建立方法，包括步骤：利用选择性培养基从睾丸成纤维细胞中分离猪睾丸间质干细胞克隆集落，传代培养后利用携带LargeT和Egfp基因的慢病毒液侵染睾丸间质干细胞，然后根据荧光标记细胞追踪和筛选，传代至稳定表达Egfp的细胞株；通过RT‑PCR鉴定出睾丸间质干细胞以后，继续传代建立了猪的睾丸间质干细胞系。转入LargeT的睾丸间质干细胞细胞系体外传代已超过50代，表达睾丸间质细胞标志蛋白，以及表达间质干细胞的标记基因，细胞外形维持成纤维状，证明获得与已报到原代间质干细胞相一致特性的猪睾丸间质干细胞系。
主权项：1.一种猪睾丸间质干细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1取5日龄猪睾丸组织，去除脂肪垫、附睾、白膜和结缔组织后，通过两步酶消化法，将睾丸组织消化成为单细胞，通过差速贴壁法去除里面贴壁缓慢的生殖细胞和血细胞，并用完全培养液贴壁培养20~28h后更换新鲜培养液，继续培养；培养至出现三维干细胞集落，利用细胞大小根据沉降速度不同，反复洗涤，纯化和收集睾丸间质干细胞；2利用携带LargeT和Egfp基因的慢病毒液侵染睾丸间质干细胞集落，并根据细胞荧光标记进行示踪筛选，传代至得到稳定表达Egfp的细胞株；3）使用权利要求1或2所述的培养液传代50代以上，经细胞生物学分析检测，获得猪睾丸间质干细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 汕尾信民生休闲农业有限公司 汕尾市现代畜牧产业研究院 猪睾丸间质干细胞系建立用的培养液及猪睾丸间质干细胞系的建立方法和应用
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