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申请/专利权人：中国药科大学

摘要：本发明属于医药技术领域，公开了一种诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针，其特征在于：所述的筛选探针为在适配体SYL3C的5’端修饰在适配体SYL3C的3’端修饰6‑羧基荧光素，形成的探针。本发明探针通过识别上皮间质转化过程中下调的生物标志物上皮黏附分子，依据给药后细胞活力归一化荧光强度信号下降筛选上皮间质转化阳性药物。此外，将阻断上皮间质转化的化疗增敏剂与上皮间质转化诱导剂TGF‑β联合给药，依据给药后细胞活力归一化荧光强度信号恢复情况筛选化疗增敏剂。

主权项：1.一种采用诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针筛选EMT相关的药物的方法，其特征在于：EMT相关的药物为诱导上皮肿瘤细胞产生EMT副作用的药物时，包括：将可传代的肿瘤细胞接种于黑色96孔板中，置于37℃、含5%CO2的细胞培养箱中培养24h，弃去培养基，加入浓度为5μM待测药物，37℃孵育24h，PBS清洗，加入由PBS缓冲液配制的浓度为10nM的探针溶液，孵育；以不含待测药物的PBS缓冲液为空白对照组；以多功能酶标仪检测器λex=306nm，λem=445nm测得荧光强度I445I524；采用MTT法测定细胞活力；对待测药物和空白对照组的荧光强度进行归一化处理：MTT归一化荧光强度=荧光强度细胞活力；与空白对照组相比，若待测药物的MTT归一化荧光强度降低，表示待测药物诱上皮导癌细胞产生EMT转化；EMT相关的药物为拮抗EMT过程的化疗增敏剂时，包括：将可传代的肿瘤细胞接种于黑色96孔板中，置于37℃、含5%CO2的细胞培养箱中培养24h，弃去培养基，以无胎牛血清培养基饥饿细胞48h，PBS清洗，继续以含5ng•mL-1TGF-β1和1～10μM待测化疗增敏剂的无胎牛血清培养基处理细胞48h，以只含5ng•mL-1TGF-β1的无胎牛血清培养基培养细胞48h作为对照组；弃去培养基，PBS清洗，加入由PBS缓冲液配制的浓度为10nM的探针溶液，孵育；以多功能酶标仪检测器λex=306nm，λem=445nm测得荧光强度I445I524；采用MTT法测定细胞活力；对待测化疗增敏剂和对照组的荧光强度进行归一化处理：MTT归一化荧光强度=荧光强度细胞活力；与对照组相比，若待测化疗增敏剂的MTT归一化荧光强度增加，表示待测化疗增敏剂拮抗EMT过程；其中，所述的筛选探针为在适配体SYL3C的5’端修饰，在适配体SYL3C的3’端修饰6-羧基荧光素，形成的探针TPE-SYL3C-FAM。。

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百度查询： 中国药科大学 一种诱导肿瘤细胞上皮间质转化药物的筛选探针及其制备方法和应用