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申请/专利权人：苏州大学
摘要：本发明涉及一种抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗及其构建方法与应用。合成5’端依次为体外T7（或S6）转录启动子、脑心肌炎病毒的内部核糖体进入位点IRES、N6‑甲基腺嘌呤m6A位点、传染性脾肾坏死病毒ISKNV主要衣壳蛋白MCP开放读码框的融合序列P‑IRES‑m6A‑MCP，以P‑IRES‑m6A‑MCP为模板，用T7（或S6）转录酶体外转录RNA，用DNaseI去除DNA模板后，用T4RNA连接酶连接环化，用RNaseR酶去除线性RNA后获环状RNA，即circRNA‑MCP。该circRNA‑MCP免疫注射后可减少传染性脾肾坏死病的发生。
主权项：1.一种抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：（1）合成5’端依次为体外转录启动子、内部核糖体进入位点IRES、N6-甲基腺嘌呤m6A位点、传染性脾肾坏死病毒开放读码框的融合序列P-IRES-m6A-MCP；所述体外转录启动子为T7或SP6启动子；所述内部核糖体进入位点IRES为脑心肌炎病毒的内部核糖体进入位点IRES；所述传染性脾肾坏死病毒开放读码框为传染性脾肾坏死病毒衣壳蛋白MCP开放读码框；（2）将P-IRES-m6A-MCP序列克隆进载体，获重组质粒pP-IRES-m6A-MCP；（3）pP-IRES-m6A-MCP酶切后回收得到P-IRES-m6A-MCP片段或以pP-IRES-m6A-MCP模板PCR扩增得到P-IRES-m6A-MCP片段；（4）以P-IRES-m6A-MCP片段为模板，进行体外转录，然后消化去除DNA，获体外转录的RNA；（5）体外转录的RNA连接为环状RNA，即抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗；所述传染性脾肾坏死病毒开放读码框的序列为SequenceID:AF370008.1的CDS序列。
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权利要求：
百度查询： 苏州大学 一种抗传染性脾肾坏死病毒的circRNA疫苗及其构建方法与应用
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