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游离睾酮的检测方法 

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申请/专利权人:广州金域医学检验中心有限公司

摘要:本发明公开了一种游离睾酮的检测方法,在包括底板和平衡透析膜的平衡透析系统中,加入待测血清样品、生理盐水和透析缓冲液,封膜后进行透析;透析结束后,在透析液中加入内标工作液,加入甲基叔丁基醚,振荡后离心;冷冻后取上清,氮气吹干,复溶,进行液相色谱‑质谱检测。本发明的检测游离睾酮的方法不仅可以减少取样量,减少透析平衡时间,提高样本处理通量,无需衍生化即具有高灵敏度,可检测低至<1pmolL的浓度水平,且可以有效分离多种内源与外源干扰物,确保方法定量的精准性。

主权项:1.一种游离睾酮的检测方法,其特征在于,包括以下步骤:1、在包括底板和平衡透析膜的平衡透析系统中,加入待测血清样品、生理盐水和透析缓冲液,封膜后进行透析;所述待测血清样品占待测血清样品与生理盐水体积和的50%~90%;所述血清样品和生理盐水的体积和,与所述透析缓冲液的体积比为1:0.9~1.1;所述透析包括:35℃~38℃,200rpm~300rpm条件下,恒温孵育3h~5h;2、透析结束后,在透析液中加入内标工作液,加入甲基叔丁基醚,振荡后离心;冷冻后取上清,氮气吹干,复溶,进行液相色谱-质谱检测;所述液相色谱的条件包括:色谱柱:C18柱;流动相A为甲醇,流动相B为质谱级水;所述液相色谱的洗脱程序为:0~4.5min,流动相A48-65%,流动相B52-35%;4.5~5.8min,流动相A65%,流动相B35%;5.8~5.81min,流动相A65%→100%,流动相B35%→0%;5.81~6.50min,流动相A100%,流动相B0%;6.50~6.51min,流动相A100%→58%,流动相B0%→42%;6.51~8.00min,流动相A58%,流动相B42%;所述质谱检测的离子源为电喷雾离子源,在正离子模式下,采用多反应监测模式;游离睾酮定量离子对的质荷比为:母离子289.2,子离子97.0;游离睾酮定性离子对的质荷比为:母离子289.2,子离子109.0;内标离子对1的质荷比为:母离子292.2,子离子100.042;内标离子对2的质荷比为:母离子292.2,子离子112.047。

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