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申请/专利权人：山东省滨州畜牧兽医研究院
摘要：本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一种高效表达禽法氏囊病毒VP2蛋白的方法。方法为将表达菌株的种子液接种至发酵罐中，于32‑37℃下开始发酵，待发酵液OD600值≥3时，加入培养保护液，提高发酵温度至40‑42℃，开始升温诱导，直至发酵结束；培养保护液包括100gL海藻糖和100gL谷氨酸钠。本发明在升温诱导时添加培养保护液，可高效表达可溶性VP2蛋白，蛋白效价可得到3‑4倍的提高，且培养基成本低廉，发酵工艺简单易行，为工业化生产VP2疫苗奠定了坚实的基础。
主权项：1.一种高效表达禽法氏囊病毒VP2蛋白的方法，其特征在于，将表达菌株的种子液接种至发酵罐中，于32-37℃下开始发酵，待发酵液OD600值≥3时，加入培养保护液，提高发酵温度至40-42℃，开始升温诱导，直至发酵结束；培养保护液为100gL海藻糖和100gL谷氨酸钠；培养保护液的加入量≥10mL1L发酵体积；发酵过程中控制pH值为6.7-7.0，溶氧为30%-50%，通气量为2-8Lmin，搅拌转速为200-800rmin；发酵罐所使用的发酵培养基原料包含5gL酵母浸出物、10gL胰蛋白胨、8gLNaCl、3gLNa2HPO4·12H2O，发酵培养基的pH值为7.5；当发酵培养基中糖类耗完后，pH值升高到7.5时，流加500gL的葡萄糖溶液，维持发酵液中残糖浓度在1-2gL；表达菌株按如下步骤获得：S1、用EcoRI和SalI双酶切含有目的基因的pMD18T-vp2载体，获得目的片段，胶回收纯化目的片段，目的基因序列如SEQIDNO.2所示；S2、双酶切pBV220载体并胶回收；S3、用T4DNA连接酶将目的基因片段和双酶切pBV220载体得到的质粒片段连接；S4、转化E.coliDH5a感受态，即得。
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权利要求：
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