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申请/专利权人：中国农业科学院蜜蜂研究所

摘要：本发明属于食品医药检测技术领域，提供一种基于金雀异黄酮含量鉴别人工饲喂蜂王浆的方法，利用80%乙腈‑水溶液（含0.1%甲酸）从蜂王浆样品中提取金雀异黄酮，然后对其进行定性和定量分析，根据不同饲喂方式下蜜蜂所生产的蜂王浆中金雀异黄酮的含量差异来鉴别是否饲喂豆粕饲料。该方法根据饲料中的蛋白质源进行蜂王浆的鉴别，对原有根据饲料中的碳水化合物源进行鉴别的方法进行了补充。

主权项：1.一种基于金雀异黄酮含量鉴别人工饲喂蜂王浆的方法，其特征在于，采用含0.1vv%甲酸的80%乙腈水溶液提取蜂王浆样品中的金雀异黄酮，以金雀异黄酮-氘4为内标物质，利用液相色谱串联质谱法对其进行定性和定量分析，根据不同饲喂方式下蜜蜂所生产的蜂王浆中金雀异黄酮的含量差异来鉴别是否给蜜蜂饲喂了豆粉饲料；包括以下步骤：S1.标准溶液配制：用甲醇配制以下系列的含内标物质的金雀异黄酮标准工作液：0.5µgL、1µgL、5µgL、10µgL、20µgL、50µgL；标准工作液中内标物质的含量为10µgL；S2.供试品溶液制备：取1g蜂王浆，加入1µgmL的内标中间液200µL，加入2mL0.1vv%甲酸水溶液，涡旋1-5min后加入8mL含0.1%vv甲酸的乙腈，涡旋5-10min，将混合溶液置于50mL离心管中，4℃下8000rmin离心5-8min；取3mL上清液转移至EMR过滤柱中，重力作用下自然洗脱流出，收集全部洗脱液；取1mL洗脱液加入装有1mL水的离心管中，充分涡旋混合均匀，过0.2µm滤膜，得到供试品溶液；S3.液相色谱串联质谱检测：取系列金雀异黄酮标准工作液、供试品溶液分别进样，以色谱峰面积为纵坐标，以系列金雀异黄酮标准工作液浓度为横坐标，绘制标准曲线，用标准曲线对样品进行定量；液相色谱串联质谱的检测条件为：液相色谱条件如下：流动相A为0.1vv%甲酸水溶液，流动相B为甲醇；洗脱条件见表1；AgilentPoroshell120EC-C18色谱柱，2.1mm×100mm，2.7µm，柱温为35℃；流速为0.3mLmin；进样量为5.0µL；表1液相梯度洗脱表 ；质谱条件如下：电喷雾离子源；正离子扫描方式；多反应监测模式；雾化器温度290℃，雾化器流速11Lmin，雾化器压力40psi，毛细管电压3500V，鞘流气温度350℃，鞘流气流速12Lmin。

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