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申请/专利权人：深圳华大智造科技股份有限公司
申请日：2019-06-26
公开（公告）日：2024-06-28
公开（公告）号：CN118256597A
主分类号：C12Q1/6806
分类号：C12Q1/6806;C12Q1/686;C12Q1/6869;C12Q1/6876;C40B50/06;C12N15/11
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.28#公开
摘要：一种巢式多重PCR高通量测序文库制备方法及试剂盒，该方法包括：使用正向引物和反向引物对目标区域进行扩增，正向引物是正向特异性序列，反向引物包括3’端的反向特异性序列和5’端的第一通用测序序列；对第一轮PCR扩增的产物进行纯化；使用巢式引物、第一标签引物和第二通用引物对纯化后的产物进行扩增，其中巢式引物位于正向引物的下游，巢式引物包括5’端的第二通用测序序列和3’端的特异性序列，第一标签引物3’端序列和反向引物5’端的部分或全部序列相同，且第一标签引物还包括第一标签序列，第二通用引物3’端序列和巢式引物5’端的部分或者全部序列相同。本发明有效避免多重PCR扩增过程中产生的二聚体，并且采用巢式扩增方法大大增加PCR扩增的特异性。
主权项：1.一种检测低频突变的巢式多重PCR扩增方法，所述方法包括：第一轮PCR扩增：使用正向引物和反向引物对样本的目标区域进行扩增，其中所述正向引物是与所述目标区域结合的正向特异性序列，所述反向引物包括3’端的与所述目标区域结合的反向特异性序列、5’端的第一通用测序序列、以及标签序列；第二轮PCR扩增：使用巢式引物和第一标签引物对第一轮PCR扩增产物进行扩增，其中所述巢式引物位于所述正向引物的下游，所述巢式引物包括5’端的第二通用测序序列和3’端的特异性序列，所述第一标签引物3’端序列和所述反向引物5’端的第一通用测序序列部分或全部序列相同。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 深圳华大智造科技股份有限公司 巢式多重PCR高通量测序文库制备方法及试剂盒
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