申请/专利权人：拜康有限公司

申请日：2017-12-09

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN110291099B

主分类号：C07K4/00

分类号：C07K4/00;C07K1/10

优先权：["20161210 IN 201641042252"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2020.01.03#实质审查的生效;2019.09.27#公开

摘要：本发明涉及由式‑I表示的利拉鲁肽的高效固相合成。本发明涉及通过采用固相途径的依次偶联来制备利拉鲁肽的高效方法。该方法涉及依次偶联受保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链，并且在完成线性序列后，通过添加γ‑谷氨酸和棕榈酸从赖氨酸侧链扩展合成，然后脱除保护基团，从固体载体上切割该肽并纯化获得的粗制的利拉鲁肽。本发明还涉及在偶联过程中使用无机盐、在Fmoc‑脱保护步骤后用HOBt的DMF溶液洗涤以抑制肽的聚集并确保反应完成，从而避免缺失序列并提高方法产率。

主权项：1.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上；b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链；c使用哌啶的DMF溶液或哌啶DBUDMF混合物使每个加载的氨基酸进行Fmoc基团脱保护；d在每个Fmoc脱保护步骤之后，使用HOBt的DMF溶液进行洗涤步骤；e使赖氨酸的甲基三苯甲基保护基团脱保护；f在偶联剂和无机盐的存在下，使谷氨酸和棕榈酸以依次的方式偶联到赖氨酸的侧链上或使棕榈酰-谷氨酸酯侧链偶联到赖氨酸的侧链上；以及g通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽；其中所述无机盐包含0.01-0.1当量的选自MgCl2、ZnCl2和CuCl2中的至少一种，并且其中所述方法包括在30-45℃的温度下偶联利拉鲁肽的氨基酸9至13。

全文数据：利拉鲁肽的合成技术领域本发明涉及由式-I表示的利拉鲁肽liraglutide的有效固相合成。利拉鲁肽是一种胰高血糖素样肽-1GLP-1受体激动剂，其标示为改进2型糖尿病成人的血糖控制的饮食和运动的辅助手段。背景技术利拉鲁肽是一种天然存在的人胰高血糖素样肽-1GLP-17-37的长效类似物，该类似物中34位的赖氨酸已被精氨酸所取代，并且棕榈酰基已通过谷氨酰间隔基与26位的赖氨酸相连。在2010年，由诺和诺德NovoNordisk开发的利拉鲁肽在美国获得皮下注射的初步批准。专利号为6268343的美国专利公开了利拉鲁肽及其制备方法。其中重组技术涉及制备Arg34-GLP-17-37-OH，然后与Nα-hexadecanoyl-GluONSu-OtBu反应。US7273921B2和US6451974B1公开了用于酰化Arg34-GLP-17-37-OH以获得利拉鲁肽的方法。US9260474B2公开了利拉鲁肽的固相合成，其特征在于包括：a基于利拉鲁肽的肽主链序列，依次偶联N-末端保护且侧链保护的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc-LysAlloc-OH；b使在赖氨酸侧链上的Alloc脱保护；c偶联棕榈酰-Glu-OtBu或依次偶联谷氨酸和棕榈酰氯到赖氨酸的该侧链上；d脱除保护基团并切割树脂以获得粗制的利拉鲁肽。WO2014199397A2公开了使用依次偶联途径和片段途径进行利拉鲁肽的固相合成，其中赖氨酸采用Fmoc-Lysdde-OH。WO2016059609A1公开了使用铜剂来酰化Arg34-GLP-17-37-OH以获得利拉鲁肽的方法。用于制备利拉鲁肽的现有方法具有缺点。由于技术复杂且成本高，该方式不适合利拉鲁肽的大规模生产；在采用Alloc作为赖氨酸侧链保护基团的方法中，Alloc的脱保护需要金属催化剂，诸如相当昂贵的PdPPh34。此外，催化剂对水分敏感，反应必须在受控条件下进行，并考虑最终产品中的重金属含量。因此，该方法在商业上不可行或存在执行问题。在固相合成期间，观察到在采用的条件下肽稳健趋于聚集。这是由于以下原因：a增长的肽序列易于形成β-折叠类型的结构，这导致肽基树脂的塌陷以及b存在引起肽链折叠的疏水性氨基酸。在该条件下，试剂在肽基树脂中的分散是有限的，偶联反应和脱保护反应将是缓慢且不完全的，从而产生肽杂质，导致纯化困难并导致低产率。因此，仍然需要通过避免重复的繁琐且冗长的纯化步骤来提供高产率、可扩展、有成本效益的、环境友好且商业上可行的用于制备利拉鲁肽的高效方法。发明目的本发明的目的是开发借助于无机盐、新颖且高效的偶联条件来制备式I的利拉鲁肽的简单、稳健且商业上可行的顺序法。附图说明图1：根据本发明的用于进行利拉鲁肽式-I的固相合成的方法的流程图。图2：示出利拉鲁肽的HPLC色谱图。发明内容本发明的一个实施例涉及用于制备利拉鲁肽的合成方法，该方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使C-末端甘氨酸加载到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使赖氨酸的侧链保护基团脱保护。d在偶联剂和无机盐的存在下，使γ-谷氨酸和棕榈酸以依次方式偶联到赖氨酸的该侧链上。e通过脱除保护基团和从该树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。f纯化粗制的利拉鲁肽。该方法的图示描述如图-1所示。所采用的途径是利拉鲁肽的依次固相肽合成途径，并且在偶联期间涉及无机盐以及常规的偶联剂和添加剂。该方式试图完成偶联反应和脱保护反应并减少外消旋作用，从而控制非常接近靶分子的同分异构杂质并进而简化肽的纯化方法。为了进一步改进本发明，在所述步骤-A中，采用Wang树脂作为树脂固相载体，并使用DIC作为偶联剂、MDC作为溶剂使Wang树脂偶联到Fmoc-Gly-OH上。作为固相载体的2-氯三苯甲基树脂2-chlorotritylresin，CTC的使用受到限制，因为偶联缓慢且在15个氨基酸序列后不能继续完成，并且在偶联洗涤循环期间所采用的温和的酸性条件下，连接在CTC树脂上的肽不稳定且易于浸出。由于利拉鲁肽的合成涉及多个步骤，因此在每个阶段发生部分浸出导致总产率降低。为了进一步改进本发明，在所述步骤-B中，包括以下步骤：B1使用哌啶DMF或哌啶、DBU、DMF混合物使Fmoc保护基团从Fmoc-Gly-树脂上脱保护以得到H-Gly-树脂。B2洗涤加载的树脂B3在偶联剂、偶联添加剂、无机盐和碱的存在下，使Fmoc-ArgPbf-OH偶联到H-Gly-树脂上。B4通过重复步骤B1、B2以及B3，合成利拉鲁肽主链，其中在步骤-B3中，依次偶联受保护的氨基酸以得到利拉鲁肽主链。为了进一步改进本发明，在所述步骤-B和D中，偶联剂选自HBTU、COMU、DEPBT或DIC。偶联添加剂选自oxymapure或HOBt，碱选自DIPEA、NMM或TMP并且无机盐选自氯化镁、氯化锌或氯化铜。如步骤-B2中所述，用0.01-0.1MHOBt的DMF溶液或0.01-0.1MHOBt的异丙醇溶液洗涤加载的树脂。为了进一步改进本发明，如步骤-B所述，使用Mtt作为用于赖氨酸的保护基团，以及如步骤-C所述，通过使用TFAMDC或HFIPTESTFEMDC从赖氨酸的侧链上脱除保护基团Mtt。为了进一步改进本发明，在所述步骤-D中，在选自HBTU、COMU、DEPBT或DIC的偶联剂、选自oxymapure或HOBt的偶联添加剂、选自DIPEA、NMM或TMP的碱以及选自氯化镁、氯化锌或氯化铜的无机盐的存在下，偶联棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu侧链。本发明的另一个实施例涉及用于制备利拉鲁肽的合成方法，该方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使赖氨酸的侧链保护基团脱保护。d在偶联剂和无机盐的存在下，使棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu侧链偶联到赖氨酸的该侧链上。e通过脱除保护基团和从该树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。f纯化粗制的利拉鲁肽。为了进一步改进本发明，在所述步骤-D中，在选自HBTU、COMU、DEPBT或DIC的偶联剂、选自oxymapure或HOBt的偶联添加剂、选自DIPEA、NMM或TMP的碱以及选自氯化镁、氯化锌或氯化铜的无机盐的存在下，偶联棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu侧链。本发明的又一个实施例涉及用于制备利拉鲁肽的合成方法，该方法包括以下步骤：i在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。ii在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。iii使用哌啶的DMF溶液或哌啶DBUDMF混合物使加载的氨基酸Fmoc-脱保护。iv在每个Fmoc脱保护步骤之后，使用HOBt的DMF溶液进行洗涤步骤。v使赖氨酸的侧链保护基团脱保护。vi在偶联剂和无机盐的存在下，使棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu侧链偶联到赖氨酸的该侧链上。vii通过脱除保护基团和从该树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。纯化粗制的利拉鲁肽。此外，作为对上述实施例的改进，编号为9至13的氨基酸[即Fmoc-GluOtBu9、Fmoc-Gly10、Fmoc-ThrtBu11、Fmoc-Phe12、Fmoc-ThrtBu13]在约30-45℃的高温下偶联以形成利拉鲁肽主链。具体实施方式本发明涉及通过采用固相途径的依次偶联来制备利拉鲁肽的高效方法。该方法涉及依次偶联受保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链，并且在完成线性序列后，通过添加γ-谷氨酸和棕榈酸从赖氨酸侧链扩展合成，然后脱除保护基团，从固体载体上切割该肽并纯化获得的粗制的利拉鲁肽。本发明还涉及在偶联过程中使用无机盐、在Fmoc-脱保护步骤后用HOBt的DMF溶液洗涤以抑制肽的聚集并确保反应将要完成，从而避免缺失序列并提高该方法的产率。缩略语：ACN：乙腈Boc：叔丁氧羰基COMU：1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基二甲基氨基-吗啉-碳六氟磷酸盐CuCl2：氯化铜DBU：1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯DEPBT：3-二乙氧基磷酰氧基-1,2,3-苯并三嗪-43H-酮DIC：N,N'-二异丙基碳二亚胺DMAP：二甲胺基吡啶DMF：N,N'-二甲基甲酰胺DIPEA：二异丙基乙胺Fmoc：9-芴甲氧羰基HBTU：O-苯并三氮唑-N,N,N',N’-四甲基脲六氟磷酸盐HOBt：N-羟基苯并三氮唑HFIP：1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇Mtt：甲基三苯甲基MeOH：甲醇MgCl2：氯化镁NMM：N-甲基吗啉NMP：N-甲基-2-吡咯烷酮TES：三乙基硅烷TFE：三氟乙醇TFA：三氟乙酸Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃PdPPh34：四三苯基膦钯0RT：室温tBu：叔丁基TIS：三异丙基硅烷Trt：三苯甲基TMP：2,4,6-三甲基吡啶ZnCl2：氯化锌本发明通过以下实施例来表示。这些实施例仅用于说明，因此不应理解为对本发明范围的限制。实施例1：使用MgCl2合成利拉鲁肽阶段-1：Fmoc–Gly37–Wang树脂的合成将Wang树脂0.3-0.6mmolg，加载量加载到肽合成容器中，用10vMDC洗涤两次，滗析洗液，加入10vMDC并保持溶胀1小时。将Fmoc-Gly-OH3.0-5.0当量溶解在MDC中，加入最少量的DMF以获得澄清的溶液，并将混合物转移到反应容器中。向反应容器中加入DIPC3.0-6.0当量，然后加入DMAP0.01-0.1当量，并在室温下搅拌1.0-3.0小时。排出反应物料并用MDC洗涤加载有氨基酸的树脂两次，然后用DMF洗涤。使用乙酸酐和DIPEA对未反应的功能位点进行封端。阶段-2：Fmoc–ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，和oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-ArgPbf-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-3：Fmoc–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Gly-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实完成氨基酸偶联后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-4：Fmoc–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-ArgPbf-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-5：Fmoc–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成v通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Val-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-6：Fmoc–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Leu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-7：Fmoc–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-TrpBoc-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-8：Fmoc–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Ala-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-9：Fmoc–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Ile-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-10：Fmoc–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Phe-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-11：Fmoc–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成xi通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-GluOtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-12：Fmoc–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-LysMtt-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-13：Fmoc–Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Ala-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-14：Fmoc–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Ala-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-15：Fmoc–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-GlnTrt-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-16：Fmoc–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Gly-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-17：Fmoc–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-GluOtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-18：Fmoc–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Leu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-19：Fmoc–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-TyrtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-20：Fmoc–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-SertBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-21：Fmoc–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-SertBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-22：Fmoc–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Val-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-23：Fmoc–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-AspOtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-24：Fmoc–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-SertBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-25：Fmoc–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-ThrtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和约30-45℃的高温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-26：Fmoc–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Phe-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和约30-45℃的高温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-27：Fmoc–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-ThrtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和约30-45℃的高温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-28：Fmoc–Gly10–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Gly-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和约30-45℃的高温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-29：Fmoc–GluOtBu9–Gly10–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-GluOtBu-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和约30-45℃的高温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-30：Fmoc–Ala8–GluOtBu9–Gly10–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-4.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Ala-OH2.0-4.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-31：Boc–HisTrt7–Ala8–GluOtBu9–Gly10–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysMtt26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用15-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT3.0-5.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure3.0-5.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA6.0-10.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Boc-HisTrt-OH3.0-5.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-32：Boc–HisTrt7–Ala8–GluOtBu9–Gly10–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysFmoc-Glu-OtBu26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过用0.5-2.0％TFA的MDC溶液处理15-20个循环×10v脱除Lys26侧链的Mtt保护基团来进行肽的支化。用MDC2x10v、2x10v、2x10vDMF以及5-10.0％DIPEA的DMF溶液来洗涤肽基树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-5.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-5.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-10.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Fmoc-Glu-OtBu2.0-5.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-33：Boc–HisTrt7–Ala8–GluOtBu9–Gly10–ThrtBu11–Phe12–ThrtBu13–SertBu14–AspOtBu15–Val16–SertBu17–SertBu18–TyrtBu19–Leu20–GluOtBu21–Gly22–GlnTrt23–Ala24-Ala25–LysPalmitoyl-Glu-OtBu26–GluOtBu27–Phe28–Ile29–Ala30–TrpBoc31–Leu32–Val33–ArgPbf34–Gly35-ArgPbf36–Gly37–Wang树脂的合成通过使用10-25％哌啶的DMF溶液洗涤树脂两次5分钟和10分钟来进行加载的氨基酸的Fmoc-脱保护。然后用3-5*8v0.01–0.1MHOBt的DMF溶液来洗涤树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-5.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-4.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-8.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及MDC作为溶剂来偶联棕榈酸2.0-5.0当量。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。阶段-34：H–His7–Ala8–Glu9–Gly10–Thr11–Phe12–Thr13–Ser14–Asp15–Val16–Ser17–Ser18–Tyr19–Leu20–Glu21–Gly22–Gln23–Ala24-Ala25–Lysγ-Glu-palmitoyl26–Glu27–Phe28–Ile29–Ala30–Trp31–Leu32–Val33–Arg34–Gly35-Arg36–Gly37–OH的合成用DMF2×10v、MDC2×10v、MeOH2×10v以及MTBE3×10v洗涤加载的肽基树脂。使用TFA、苯酚、TIS、H2O硫代苯甲醚混合物进行该肽的总切割。浓缩肽-TFA混合物并加入到冰MTBE5-15v中。通过离心和或过滤分离沉淀的化合物，并在VTD中干燥，然后进一步纯化方法产率18.25％，纯度51.3％。实施例2：使用MgCl2合成利拉鲁肽该方法与实施例1中描述的相同，唯一的变化是代替MgCl2，在依次偶联所有单个氨基酸期间采用CuCl2作为催化剂方法产率17.84％，纯度51.16％。实施例3：使用HFIP-TES-TFE混合物进行Mtt保护基团的脱保护来合成利拉鲁肽该方法与实施例1中描述的相同，唯一的变化是在LysMtt26脱除上，其中采用5.0-40.0％HFIP、TES2.0-10.0％、TFE5.0-10％的MDC溶液10-30v，并搅拌混合物2-6小时实际方法产率21.23％，纯度51.7％。实施例4：利拉鲁肽的合成该方法与实施例1中描述的相同，唯一的变化是在偶联期间不使用无机盐方法产率6.79％，纯度34.4％。实施例5：不使用无机盐合成利拉鲁肽该方法与实施例1中描述的相同，唯一的变化是在偶联期间不使用无机盐并且适当用0.1MHOBt的DMF溶液给予IPA洗涤方法产率8.62％，纯度39.1％。实施例6：使用Pal-Glu-OtBu侧链偶联合成利拉鲁肽通过用0.5-2.0％TFA的MDC溶液处理15-20个循环×10v脱除Lys26侧链的Mtt保护基团来进行肽的支化。用MDC2×10v、2×10v、2×10vDMF以及5-10.0％DIPEA的DMF溶液洗涤肽基树脂。使用偶联剂诸如HBTU、COMU、DEPBT以及DIC优选DEPBT2.0-5.0当量，以及oxymapure、HOBt优选oxymapure2.0-5.0当量，以及DIPEA、NMM、TMP优选DIPEA5.0-10.0当量，以及MgCl2、ZnCl2优选MgCl20.01-0.1当量，以及DMFNMP混合物作为溶剂来偶联Pal-Glu-OtBu侧链2.0-5.0当量，表示在图II中。反应在氮气气氛中和室温下进行。由Kaiser试验证实氨基酸偶联完成后，排出过量的试剂并用3×10vDMF洗涤肽基树脂。实施例7：利拉鲁肽的合成该方法与实施例1中描述的相同，并且如实施例3中所描述进行了Mtt脱除。在每个Fmoc-脱保护步骤后，给予额外的0.01-0.1MHOBtDMF洗涤以确保完全脱除哌啶以及避免线性肽在合成期间聚集实际方法产率27.0％，纯度60.0％。实施例8：利拉鲁肽的纯化将粗制的利拉鲁肽溶解在含有5-40％ACN的浓度为5-75mgml的稀碳酸铵溶液中，并加载到预平衡的100-10-C8柱10mm×250mm上。然后加载0.2CV的稀释剂。使用不连续梯度流动相A：0.1％TFA的水溶液；B：0.1％TFA的ACN：IPA溶液来洗脱结合的利拉鲁肽。将纯度92％的馏分真空浓缩，然后进行等电点沉淀。通过离心回收沉淀物。将回收的沉淀物再次在100-10-C8柱10mm×250mm上进行另一个RP-HPLC步骤。使用由以下物质组成的流动相的梯度洗脱来洗脱结合的利拉鲁肽：A：稀乙酸铵；B：ACN。合并98.5％的馏分，真空浓缩，在等电点沉淀&最后冻干。实施例9：利拉鲁肽的纯化将粗制的利拉鲁肽以10-75mgml的浓度溶解在稀氨水中，并在100-10-C8柱10mm×250mm上进行RP-HPLC-1步骤。然后加入0.2CV的稀释剂。使用不连续梯度流动相A：0.1％TFA的水溶液；B：0.1％TFA的ACN:IPA溶液来洗脱结合的利拉鲁肽。将纯度90％的馏分在真空下浓缩，然后进行等电点沉淀。通过离心回收沉淀。将回收的沉淀物再次在100-10-C8柱10mm×250mm上进行RP-HPLC-2步骤。使用由以下物质组成的流动相的梯度洗脱来洗脱结合的利拉鲁肽：A：TFA的水溶液；B：TFA的甲醇溶液。该步骤有助于减少特定杂质。合并93％的馏分，用乙酸铵稀释，并加载到100-10-C8柱10mm×250mm上进行RP-HPLC-3步骤。使用由以下物质组成的流动相的梯度洗脱来洗脱结合的利拉鲁肽：A：乙酸铵；B：ACN。合并98.5％的馏分，真空浓缩，在等电点沉淀&最后冻干。

权利要求：1.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使C-末端甘氨酸加载到树脂固相载体上。b对未反应的功能位点进行封端。c在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。d使赖氨酸的侧链保护基团脱保护。e在偶联剂和无机盐的存在下，使谷氨酸和棕榈酸偶联到赖氨酸的所述侧链上。f通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。g任选地纯化粗制的利拉鲁肽。2.根据权利要求1所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使C-末端甘氨酸加载到树脂固相载体上。b使用乙酸酐和有机碱来对所述未反应的功能位点进行封端。c在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。d使赖氨酸的侧链保护基团脱保护。e在偶联剂和无机盐的存在下，使谷氨酸和棕榈酸以依次的方式偶联到赖氨酸的所述侧链上。f通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。g任选地纯化粗制的利拉鲁肽。3.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使赖氨酸的侧链保护基团脱保护。d在偶联剂和无机盐的存在下，使棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu-OtBu侧链偶联到赖氨酸的所述侧链上。e通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。f任选地纯化粗制的利拉鲁肽。4.根据权利要求3所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使用TFA的二氯甲烷溶液使赖氨酸的侧链甲基三苯甲基保护基团脱保护。d在偶联剂HBTU、COMU、DEPBT、DIC和添加剂oxymapure、HOBt或偶联剂添加剂的组合以及无机盐的存在下，使棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu-OtBu侧链偶联到赖氨酸的所述侧链上。e通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。f任选地纯化粗制的利拉鲁肽。5.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使用哌啶的DMF溶液或哌啶DBUDMF混合物使每个加载的氨基酸进行Fmoc基团脱保护。d在每个Fmoc脱保护步骤之后，使用HOBt的DMF溶液进行洗涤步骤。e使赖氨酸的甲基三苯甲基保护基团脱保护。f在偶联剂和无机盐的存在下，使棕榈酰-谷氨酸酯Pal-Glu-OtBu侧链偶联到赖氨酸的所述侧链上。g通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。h任选地纯化粗制的利拉鲁肽。6.根据权利要求5所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使用哌啶的DMF溶液或哌啶DBUDMF混合物使每个加载的氨基酸进行Fmoc基团脱保护。d在每个Fmoc脱保护步骤之后，使用HOBt的DMF溶液进行洗涤步骤。e使用HFIPTESTFEMDC使赖氨酸的侧链甲基三苯甲基保护基团脱保护。f在偶联剂和无机盐的存在下，使棕榈酰-谷氨酸Pal-Glu-OtBu侧链偶联到赖氨酸的所述侧链上。g通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。h任选地纯化粗制的利拉鲁肽。7.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使用哌啶的DMF溶液或哌啶DBUDMF混合物使每个加载的氨基酸进行Fmoc基团脱保护。d在每个Fmoc脱保护步骤之后，使用HOBt的DMF溶液进行洗涤步骤。e使赖氨酸的甲基三苯甲基保护基团脱保护。f在偶联剂和无机盐的存在下，使受保护的谷氨酸和棕榈酸以依次的方式偶联到赖氨酸的侧链上。g通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。h任选地纯化粗制的利拉鲁肽。8.根据权利要求7所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a在偶联剂的存在下，使Nα-Fmoc保护的甘氨酸Fmoc-Gly-OH偶联到树脂固相载体上。b在偶联剂和无机盐的存在下，依次偶联Nα-保护且侧链保护的氨基酸以制备利拉鲁肽的主链。c使用哌啶的DMF溶液或哌啶DBUDMF混合物使每个加载的氨基酸进行Fmoc基团脱保护。d在每个Fmoc脱保护步骤之后，使用HOBt的DMF溶液进行洗涤步骤。e使用HFIPTESTFEMDC使赖氨酸的甲基三苯甲基保护基团脱保护。f在偶联剂和无机盐的存在下，使受保护的γ-谷氨酸和棕榈酸以依次的方式偶联到赖氨酸的侧链上。g通过脱除保护基团和从所述树脂上切割肽来获得粗制的利拉鲁肽。h任选地纯化粗制的利拉鲁肽。9.根据上述权利要求中任一项所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，包括偶联剂，所述偶联剂选自HBTU、COMU、DEPBT、DIC或其任何组合。10.根据上述权利要求中任一项所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，包括偶联添加剂，所述偶联添加剂选自oxymapure、HOBt或其任何组合。11.一种用于制备所述利拉鲁肽的方法，包括使用偶联剂混合物偶联Boc-组氨酸，所述偶联剂混合物选自HBTU-oxymapure、COMU-oxymapure、DEPBT-oxymapure或DIC-oxymapure。12.根据权利要求11所述的用于制备利拉鲁肽的方法，其特征在于，使用DEPBT-oxymapure偶联Boc-组氨酸。13.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括使用HFIPTESTFEMDC使赖氨酸的甲基三苯甲基保护基团脱保护。14.一种用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括使用高温来偶联氨基酸9至13。15.根据权利要求14所述的用于制备利拉鲁肽的方法，所述方法包括在30-45℃的温度下偶联氨基酸9至13。

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