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申请/专利权人：南京松天盛科生物科技有限公司
摘要：本发明涉及层析独立C线DNP偶联BSA技术领域，具体为层析独立C线DNP偶联BSA以及其多克隆抗体的制备与精纯，包括步骤一：偶联S1、将加热搅拌离心装置，然后设置80℃，打开加热开关；S2、称量53mg的2，4‑二硝基苯甲酸放在水浴容器内，然后加入5mL20mMpH7.4PBS，在加热搅拌离心装置中温浴3‑5min中，将固体溶解；S3、称量57.5mgNHS和143.8mg的EDC，用2mL的PBS溶解，加入到溶解好的2，4‑二硝基苯甲酸中，震荡反应4h。采用的2,4‑二硝基苯酚的类似物2,4‑二硝基苯甲酸，该物质无毒无害，偶联方法简单，对环境无影响，本装置使用简单便捷，且适用性十分广泛，同时能够进行水浴加热和搅拌的工作，同时用户在离心时亦能够提高使用的安全性。
主权项：1.层析独立C线DNP偶联BSA以及其多克隆抗体的制备，其特征在于：包括：步骤一：偶联S1、将加热搅拌离心装置，然后设置80℃，打开加热开关；S2、称量53mg的2，4-二硝基苯甲酸放在水浴容器内，然后加入5mL20mMpH7.4PBS，在加热搅拌离心装置中温浴3-5min中，将固体溶解；S3、称量57.5mgNHS和143.8mg的EDC，用2mL的PBS溶解，加入到溶解好的2，4-二硝基苯甲酸中，震荡反应4h；S4、称量32mgBSA，用1mLPBS溶解，缓慢滴加到上述反应液中，常温反应12-24h；S5、透析到20mMpH7.4PBS，每4h换液一次，共换4-6次；S6、透析结束后，用PBS做空白，用微量分光光度计测BSADNPDNP-BSA的全波长，观察偏移情况确定是否偶联上；步骤二：免疫S1、取3只8周龄的新西兰大白兔；S2、首免取1mg的抗原和1mL完全弗氏佐剂混匀，免疫大白兔后背六个点进行免疫；S3、每隔两个星期取1mg的抗原和1mL不完全弗氏佐剂混匀加免一次；S4、第四次测定效价，当效价达到1:640000时，采取耳静脉持续采血；S5、最后心脏采血处死。
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权利要求：
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