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利用PiggyBac转座系统构建稳定基因敲低细胞株的方法及其应用 

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申请/专利权人:右江民族医学院

摘要:本发明公开了一种利用PiggyBac转座系统构建稳定基因敲低细胞株的方法。包括以下步骤:将U6启动子整合到PiggyBacDualpromoter载体中,得到PB‑U6P载体;将基因敲低片段连接至PB‑U6P载体;再将基因敲低载体PB‑U6P和SuperPiggyBacTransposase载体按照摩尔比1:1混合后转染真核细胞系中;利用嘌呤霉素对转染细胞系进行筛选;利用RT‑qPCR和WesternBlot对进行鉴定,获得稳定基因敲低细胞株。

主权项:1.利用PiggyBac转座系统构建稳定基因敲低细胞株的方法,其特征在于,具体步骤如下:1将包含多克隆位点和U6启动子的基因合成序列通过同源重组将PiggyBacDualpromoter载体中的CMV启动子替换,得到PB-U6P载体。2将靶标基因的敲低片段连接到步骤1中的PB-U6P载体,位于U6启动子下游,即可构建成基因敲低载体PB-U6P-Shgene。3将PB-U6P-Shgene和SuperPiggyBacTransposase载体混合后,转染至细胞株中。利用嘌呤霉素进行稳转细胞株筛选。4对步骤3中稳转细胞株进行RT-qPCR和WesternBlot检测,鉴定目标基因敲低的效果。

全文数据:

权利要求:

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