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申请/专利权人：深圳先进技术研究院

摘要：本发明提供了一种人源化FKBP8基因敲入动物模型的构建方法，包括（1）构建人源化FKBP8基因敲入的打靶载体，将打靶载体、Cas9、sgRNA转染到供体动物受精卵中；（2）将成活的受精卵细胞移植入假孕动物输卵管中，得到F0代动物，对F0代动物进行鉴定，同源重组呈现阳性的动物即为嵌合体动物；（3）将嵌合体动物与野生型动物交配，获得F1代动物并进行鉴定，同源重组呈现阳性的F1动物即为人源化FKBP8基因敲入动物。本发明提供的构建方法采用人源FKBP8基因序列替换供体动物FKBP8基因序列，以实现供体动物FKBP8基因人源化的目的，成功建立了人源化FKBP8基因敲入动物模型，可实现在动物模型上筛查靶向FKBP8基因及其产物的药物或研究FKBP8基因及其产物在相关临床疾病中的发病及治疗机制。

主权项：1.一种人源化FKBP8基因敲入动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）构建人源化FKBP8基因敲入的打靶载体，将打靶载体、Cas9、sgRNA转染到供体动物受精卵中；（2）将成活的受精卵细胞移植入假孕动物输卵管中，得到F0代动物，对F0代动物进行鉴定，同源重组呈现阳性的动物即为嵌合体动物；（3）将嵌合体动物与野生型动物交配，获得F1代动物并进行鉴定，同源重组呈现阳性的F1动物即为人源化FKBP8基因敲入动物；其中：所述步骤（1）具体为：基于CRISPRCas9开发的EGE系统设计打靶策略，使用人FKBP8基因胞外区替换供体动物FKBP8基因胞外区，sgRNAs分别设计在供体动物FKBP8基因Exon2及Exon8中；在5’端和3’端靶点区域设计sgRNAs，检测体外活性，结合sgRNA特异性和切割位置，选择sgRNAs，将sgRNAs以及Cas9进行体外转录，制备用于显微注射的RNA；根据打靶方案，构建重组打靶载体，将重组打靶载体、Cas9、sgRNAs转染到供体动物受精卵中；所述步骤（1）中在5’端靶点区域设计4条sgRNAs，序列如SEQIDNO.1-4所示；在3’端靶点区域设计4条sgRNAs，序列如SEQIDNO.5-8所示；选择活性最高的5’靶位点和3’靶位点进行下一步的实验；所述步骤（2）中采用PCR对F0代动物进行基因型鉴定；引物序列如SEQIDNO.9-12所示。

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