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酿酒酵母代谢工程菌株从头合成东莨菪亭的方法 

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申请/专利权人:浙江工业大学

摘要:本发明公开了一种酿酒酵母代谢工程菌株从头合成东莨菪亭的方法,在酿酒酵母中成功构建一条从葡萄糖开始生产对香豆酸的完整合成路径,以构建好的代谢工程菌株C02摇瓶发酵84h产对香豆酸110mgL;接着通过引入入咖啡酸合成模块,构建好的代谢菌株C0201摇瓶发酵72h产咖啡酸29.12mgL;为增加对香豆酸至咖啡酸的转化率,将C0201中的HpaBC基因拷贝数增加至三个,构建的的菌株C0203摇瓶发酵72h可产咖啡酸78.14mgL;在C0203中导入阿魏酸合成基因后,构建的菌株FA01摇瓶发酵72h可产阿魏酸21.11mgL;最后引入东莨菪亭合成模块,构建菌株SP01可利用葡萄糖合成东莨菪亭0.51mgL,首次实现酿酒酵母利用葡萄糖从头合成东莨菪亭。

主权项:1.一种酿酒酵母代谢工程菌株从头合成东莨菪亭的方法,其特征在于,包括如下步骤:1从p42H-spCas9扩增Cas9表达盒,并将其整合到酿酒酵母CEN.PK2-1C中的IX-1基因组位点,由此产生的菌株C00;2葡萄糖从头合成对香豆酸途径的构建:通过步骤1的菌株C00依次构建C01菌株和C02菌株,发酵产香豆酸;3对香豆酸至咖啡酸生物合成途径的构建:以C02菌株为基础构建C0201菌株,发酵产咖啡酸;4通过增加咖啡酸模块拷贝数以增加咖啡酸的产量:将C0201菌株的HpaBC基因拷贝数增加至三个,构建C0203菌株,发酵增产咖啡酸;5咖啡酸至阿魏酸生物合成途径的构建:在C0203菌株中导入阿魏酸合成基因后,构建FA01菌株,发酵产阿魏酸;6葡萄糖从头合成东莨菪亭途径的构建:引入东莨菪亭合成模块,构建菌株SP01,利用葡萄糖合成东莨菪亭。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 浙江工业大学 酿酒酵母代谢工程菌株从头合成东莨菪亭的方法

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