买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：重庆国际旅行卫生保健中心(重庆海关口岸门诊部)

摘要：本发明涉及生物溯源技术领域，公开了一种用于黑家鼠分子和家蝇分子溯源的方法，包括S1、获取样本；S2、样本处理；S3核酸提取、扩增及测序；S4、序列分析。本发明可以建立系统的分子溯源技术和数据库，在疫情发生时能及时的为风险评估提供参考，有效防止传染病的传入。

主权项：1.一种用于黑家鼠分子和家蝇分子溯源的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、获取样本；S2、样本处理：黑家鼠样本处理：剪取眼睛附近的皮毛，取部分皮毛放入1.5mlEP管内，剪取下腿部干瘪肌肉，取部分肌肉放入另一只1.5mlEP管内，向两只EP管中分别加入100ul双蒸水，放入-80℃冰箱冻存；家蝇样本处理：将样本晾干，然后取中足或后足部分研磨破碎后保存于干燥的地方；S3、核酸提取、扩增及测序：1核酸提取：采用经步骤S2处理后的黑家鼠的皮毛及部分肌肉进行核酸提取，采用经步骤S2处理后的家蝇的中足或后足进行核酸提取；基因选取：黑家鼠选择COI和Cytb基因，家蝇选择COI和ITS2基因，使用引物序列如下：黑家鼠-COI-F:5'-CCTACTCRGCCATTTTACCTATG-3'；黑家鼠-COI-R:5'-ATCTCTGGGTGTCCAAAGAATCA-3'；黑家鼠-Cytb-F:5'-CCAATGACATGAAAAATCATCGTT-3'；黑家鼠-Cytb-R:5'-TCTCCATTTCTGGTTTACAAGAC-3'；家蝇-COI-F:5'-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3'；家蝇-COI-R:5'-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3'；家蝇-ITS2-F:5'-TGCTTGGACTACATATGGTTGA-3'；家蝇-ITS2-R:5'-GTAGTCCCATATGAGTTGAGGTT-3'；黑家鼠-Cytb的基因序列见SEQIDNO.1所示；2PCR扩增：PCR反应体系为均为25ul：2×TSINGKETMMasterMix12.5ul，灭菌水9.5ul，模板2ul，上下游引物分别0.5ul；扩增程序如下：黑家鼠-COI为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，将上述程序循环35次后72℃延伸10min；黑家鼠-Cytb为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火60s，72℃延伸60s，35个循环，再72℃延伸10min；家蝇-COI为：94℃预变性3min，94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸1min，将上述程序循环35次后72℃延伸5min；家蝇-ITS2为：95℃预变性5min，94℃变性30s、53℃退火30s、72℃延伸1.5min，将上述程序循环35次后72℃延伸10min；3测序；S4、序列分析。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 重庆国际旅行卫生保健中心(重庆海关口岸门诊部) 一种用于黑家鼠分子和家蝇分子溯源的方法