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申请/专利权人：复旦大学附属肿瘤医院
摘要：本发明涉及一种含5hmC单细胞的检测方法，通过将含有叠氮化物的葡萄糖部分转移到5hmC的羟基上与“Split‑Pool”法整合的策略，进而经测序检测被链霉亲和素珠富集标记后的含5hmC单细胞类型。与现有技术相比，本发明实验流程简单易操作，实现从单细胞水平检测到含5hmC修饰的DNA片段，可应用于人脐带血造血干细胞正常和疾病状态下异质性的研究，为相关领域提供基于DNA片段上5hmC修饰层面揭示细胞异质性的实用工具。
主权项：1.一种含5hmC单细胞的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、收集并固化细胞；S2、在S1步骤处理后的细胞中加入裂解缓冲液1混合反应，然后加入裂解缓冲液2继续混合反应，再加入PBS缓冲液和十二烷基硫酸钠缓冲液重悬细胞孵育，最后加入TritonX-100裂解液终止反应，离心即得到细胞核；S3、在S2步骤得到的细胞核中加入HpyCH4V酶进行DNA片段化，再加入终止液终止酶切反应，最后加入缓冲液洗涤细胞核，离心后去除上清液，计数细胞核；S4、在S3步骤得到的细胞核中加入NEBNextdA-TailingModule进行修复，用缓冲液洗涤细胞核，离心后去除上清液；S5、在S4步骤得到的细胞核中加入Tris-HCl缓冲液洗涤并重悬细胞核，然后加入不同的条形码标签、连接混合液充分振荡混合进行DNA连接反应，然后加入终止液终止DNA连接反应并洗涤细胞核，重复DNA连接反应至少3次；S6、在S5步骤得到的细胞核中加入RNaseA酶除去细胞核内残余的RNA，然后加入蛋白酶K进行孵育反应，并进行DNA纯化；S7、在S6步骤得到的细胞核中加入尿苷二磷酸-6-叠氮-葡萄糖，纯化，加入二苯并环辛炔修饰生物素，纯化，加入裂霉素亲和素珠富集，最后根据条形码的不同鉴定含5hmC的单细胞类型。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 复旦大学附属肿瘤医院 一种含5hmC单细胞的检测方法
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