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申请/专利权人：四川大学
摘要：本发明涉及基因干扰技术领域，具体公开了一种SIX1基因干扰构建涡虫视神经系统缺失模型的方法，包括以下步骤：步骤一：扩增SIX1基因，作为dsRNA体外合成的模板；步骤二：dsRNA体外合成与纯化；步骤三：干扰涡虫，完成涡虫视神经系统眼点缺失模型构建。本发明构建的涡虫视神经系统眼点缺失模型为筛选独立于脑部缺陷的视神经系统眼点调控基因的研究奠定基础。
主权项：1.一种SIX1基因干扰构建涡虫视神经系统缺失模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：扩增SIX1基因，作为dsRNA体外合成的模板。从现存的涡虫转录组测序结果中获得SIX1基因的cDNA序列。利用PrimerPrimer5软件进行引物设计，随后，配置SIX1扩增体系，均匀混合后放入PCR仪中，程序结束后，将PCR扩增产物进行DNA凝胶电泳点样并胶回收以纯化PCR产物；将纯化产物与pMD19-T载体4℃连接过夜，然后转化感受态DH5α细胞；37℃培养箱培养10-12h，挑取10个单克隆菌落摇菌和菌落PCR鉴定。将PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，选取PCR产物大小和目的基因大小相对应的样品，送生物公司测序，剩余菌液保存于4℃；待测序结果返回后，使用SnapGene软件进行测序结果比对，将测序结果正确的菌液扩大培养。需要扩大培养的菌液接种到30mL氨苄抗性LB培养基中，放入恒温震荡培养箱，37℃过夜培养；待菌液浑浊时，取700μL菌液保种，剩余菌液用于提取质粒。步骤二：dsRNA体外合成与纯化。从质粒上扩增带有T7启动子序列的目的基因，PCR程序结束后，胶回收PCR产物；配置dsRNA体外合成体系于37℃金属浴过夜孵育，第二天利用乙酸铵纯化dsRNA。步骤三：干扰涡虫，完成涡虫视神经系统眼点缺失模型构建。选取饥饿7天、体长相近的涡虫进行头尾切割，浸泡在含有一定浓度dsRNA的水中，每天换水，第7天检测干扰效果及涡虫眼点发育情况。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川大学 一种SIX1基因干扰构建涡虫视神经系统缺失模型的方法
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