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申请/专利权人：周口师范学院

摘要：本发明涉及一种涡虫染色体标本的制备方法。本发明涡虫染色体标本制备方法包括以下步骤：取材、预处理、再生组织培养、组织破碎、离心悬浆、秋水仙素阻断、KC1低渗处理、离心悬浆滴片、染色以及烤干封片。本发明制备方法使再生组织和中期细胞得到充分固定处理，染色体制片背景清晰、细胞分散良好、中期分裂相多，利于核型分析。

主权项： 一种涡虫染色体标本的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）取材及预处理：选取体长3~5cm活泼健康涡虫，置于去氯自来水中，饥饿1~2周，至无代谢废物排出；（2）再生组织培养：将经步骤1处理过的涡虫置于载玻片上，待其完全伸展时，用消毒过的刀片将涡虫切成3~5段，再置于无菌水中后放入10~15℃的恒温培养箱培养3~5天，至断面有白色再生组织长出；（3）组织破碎及秋水仙素处理：将步骤（2）得到的涡虫再生组织分离取下，置于离心管中破碎，然后加入浓度为0.2~0.25gL的秋水仙素水溶液0.5~1.0mL，于10~15℃下静置2.5~3.5小时，然后放入离心机中以800~1000rpm的转速离心5~6分钟，弃去上清液；（4）KC1低渗处理：步骤（3）处理后，加入浓度为0.1~0.2gL的 KCl低渗液0.5~0.8mL，进行低渗处理1.5~2.5小时，然后放入离心机中以800~1000rpm的转速离心5~6分钟，弃去上清液；（5）组织固定及滴片：加入固定液I 1~1.5mL，使再生组织与固定液充分接触后，静置18~25分钟，以700~800rpm的转速离心5~6分钟，弃去上清；加入固定液II 1~1.5mL，使再生组织与固定液充分接触后，静置18~25分钟，以700~800rpm的转速离心5~6分钟，弃去上清；加入固定液Ⅲ 1~1.5mL，使再生组织与固定液充分接触后，静置18~25分钟，再以700~800rpm的转速离心5~6分钟，弃去大部分上清，留下0.1~0.2mL液体，轻微震荡得到组织混悬液，吸取上述混悬液，从5~6cm高度悬滴于载玻片上，均匀涂满载玻片后，烘干或自然晾干；（6）染色：将步骤（5）所得制片滴加Giemsa染色液1~2mL，至其能布满载玻片，平放于通风橱中静置8~12分钟后，用蒸馏水轻柔洗去染液，再置于酒精灯火焰上方2~3cm高度处均匀烤干，即得到染色体片；（7）封片：在显微镜下初步观察所得染色体片，标记后封片保存，即得；所述固定液I由乙醇和冰乙酸以体积比4:1组成，固定液II由乙醇和冰乙酸以体积比2:1组成，固定液III由乙醇和冰乙酸以体积比1:4组成。

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