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一种携带AIM2基因的溶瘤腺病毒的构建方法及应用 

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申请/专利权人:徐州医科大学

摘要:本发明涉及一种携带AIM2基因的溶瘤腺病毒的构建方法,属于生物医学技术领域。首先通过PCR反应和克隆技术,构建CAIX启动子载体pZD55‑CAIX,接着构建腺病毒穿梭质粒pZD55‑CAIX‑AIM2,最后将通过鉴定的质粒pZD55‑CAIX‑AIM2与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,待细胞出现病毒噬斑后,得到目的溶瘤腺病毒Ad‑CAIX‑AIM2。该溶瘤腺病毒能特异地到达肿瘤细胞部位,高效、特异性杀伤肿瘤细胞,而不影响正常细胞,并且在肿瘤组织中的复制能力强。

主权项:1.一种携带AIM2基因的溶瘤腺病毒的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)CAIX启动子载体pZD55-CAIX的构建通过PCR反应和克隆技术,从质粒pGL3-CAIX中获取218bp的CAIX核心启动子片段,然后插入到腺病毒质粒pZD55中,得到pZD55-CAIX;(2)腺病毒穿梭质粒pZD55-CAIX-AIM2的构建以pEF-BOS-AIM2为模板,PCR扩增获得不含终止子1029bp的AIM2序列,将其克隆至增殖缺陷腺病毒载体pCA13的HindIII、XbaI位点,获得pCA13-AIM2质粒;从pCA13-AIM2质粒中获取CMV+AIM2+PolyA表达框,将其插入pZD55-CAIX,得到重组腺病毒穿梭质粒pZD55-CAIX-AIM2;(3)目的溶瘤腺病毒的制备将通过鉴定的质粒pZD55-CAIX-AIM2与腺病毒骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,待细胞出现病毒噬斑后,得到目的溶瘤腺病毒Ad-CAIX-AIM2,所述腺病毒穿梭质粒pZD55-CAIX-AIM2的序列如SEQIDNO.:6所示。

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权利要求:

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