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申请/专利权人：安徽大学
摘要：本发明公开了一种Bmal1基因突变细胞株及其构建方法和应用，本发明将筛选后突变Bmal1基因的细胞株，提取基因组扩增Bmal1基因组编辑区域，扩增产物后经PCR纯化回收后测序。测序结果显示Bmal1基因组92478位到92490位被编辑，对应的外显子为第13个外显子的156位至165位，由CCACAACCAGCGA序列编辑为TCGC序列。经过脱靶检测，其他位置均为未发生编辑。本发明构建得到的Bmal1基因突变细胞株在对细胞的昼夜节律和细胞周期的产生了影响。实验表明细胞株NIH3T3B1‑B10G5相较于野生型细胞，细胞周期在G2M期停滞，差异极为显著。
主权项：1.一种突变Bmal1基因的细胞株的构建方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）设计sgRNA引物序列，合成sgRNA引物；（2）px459-mBmal1载体的构建：通过合成的sgRNA引物构建px459-mBmal1载体；（3）细胞转染：取NIH3T3B1-B10细胞培养并转染px459-mBmal1载体；（4）确定用于筛选基因编辑阳性细胞的最低致死嘌呤霉素的浓度；（5）筛选及鉴定阳性细胞株，得到阳性细胞株NIH3T3B1-B10G5。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 安徽大学 一种Bmal1基因突变细胞株及其构建方法和应用
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