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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明公开了猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用。根据猪GADD45a基因全长序列和载体pLEX‑MCS，设计并合成含有酶切位点的GADD45a全长的扩增引物；从小猪脂肪组织中扩增得到GADD45a基因全长序列，回收并酶切，与酶切后的pLEX‑MCS连接，构建pLEX‑MCS‑GADD45a慢病毒质粒，单克隆测序鉴定并验证后，采用脂质体转染法将pLEX‑MCS‑GADD45a慢病毒质粒和pSPAX.2及pMD2.G共转染到293T细胞中，获得重组慢病毒；采用步骤2）获得的重组慢病毒转染猪IPEC‑J2细胞，获得高表达猪GADD45a基因的IPEC‑J2细胞系。猪GADD45a基因的新用途，用于调控营养吸收代谢。本发明开拓了猪GADD45a基因的新功能及其在肠道上皮细胞中研究的新方法。
主权项：1.一种高表达猪GADD45a基因的细胞系的构建方法，其特征是：包括以下步骤：1）、根据猪GADD45a基因全长序列和LentiORFTM-pLEX-MCS载体，简称pLEX-MCS，设计并合成含有酶切位点的GADD45a全长的扩增引物；2）从小猪脂肪组织中扩增得到GADD45a基因全长序列，回收并酶切，与酶切后的pLEX-MCS连接，构建pLEX-MCS-GADD45a慢病毒质粒，单克隆测序鉴定并验证后，采用脂质体转染法将pLEX-MCS-GADD45a慢病毒质粒和pSPAX.2及pMD2.G共转染到293T细胞中，获得重组慢病毒；3）采用步骤2）获得的重组慢病毒转染猪IPEC-J2细胞，获得高表达猪GADD45a基因的IPEC-J2细胞系。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用
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