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申请/专利权人：河北省农林科学院植物保护研究所

摘要：本发明公开了一对玉蜀黍黑粉菌组合，包括玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UM01和玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UM02；其中所述UM01的保藏编号为CGMCCNo.15263；所述UM02的保藏编号为CGMCCNo.15387。本发明玉蜀黍黑粉菌组合致病力强，接种成功率高，对玉米品种的抗玉米瘤黑粉病抗性鉴定结果准确、可靠，且重复性、一致性好；用于玉米蘑菇生产时不仅玉米蘑菇产量高，且玉米蘑菇包裹在苞叶内，便于采收和运输。

主权项：1.一对玉蜀黍黑粉菌组合，其特征在于包括玉蜀黍黑粉菌（Ustilagomaydis）单倍体菌株UM01和玉蜀黍黑粉菌（Ustilagomaydis）单倍体菌株UM02；其中所述的单倍体菌株UM01的保藏编号为CGMCCNo.15263；所述的单倍体菌株UM02的保藏编号为CGMCCNo.15387。

全文数据：一对玉蜀黍黑粉菌组合及其应用技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一对玉蜀黍黑粉菌组合，还涉及该对玉蜀黍黑粉菌组合的用途。背景技术[0002]玉米瘤黑粉病或称玉米黑粉病是由玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis，或称为玉米黑粉菌、玉米瘤黑粉菌等）引起的玉米病害，主要发生于温暖干燥地区，且春播区比夏播区发病严重，一般发病率为5〜10%，严重的可造成30〜80%的产量损失，是一个亟待解决的问题。[0003]除了给玉米造成危害以外，玉蜀黍黑粉菌感染玉米果穗后在果穗上形成的菌癭还是一种美味食品，墨西哥的阿兹特克人食用它已有600多年的历史，被称为“墨西哥松露”，在我国称为玉米蘑菇、玉米乌霉、玉米瘤黑粉菌、玉米黑霉、棒子包、稔头、乌米或黑胆等。玉米蘑菇既可生食、亦可炒菜吃，味道非常鲜美。除了具有食用价值外，它还有极高的药用价值，经常食用能益气养阴，补气安神，补中解毒，可预防和治疗肝脏系统和胃肠道溃疡，并能助消化和通便；也可用于血虚或津液不足，口干舌燥，或热病气阴两伤，烦倦口渴、心神不安、失眠多梦者;还可用于脾胃虚弱、倦怠食少、脘腹作痛或食物、药物中毒等病症。此外，玉米蘑菇的蛋白质含量在所有蘑菇家族中属于最高的之一，比玉米本身的蛋白质含量更高，尤其人体必需的赖氨酸含量非常高。因此，玉米蘑菇是一种极具市场开发潜力的食用菌资源。目前，美国已将玉米蘑菇列入食用菌行列。我国农民虽然也有吃玉米蘑菇的传统，但是还没有进行大规模生产，仅限于田间零星的自然发病的玉米蘑菇。[0004]无论是玉米品种的抗玉米瘤黑粉病鉴定，还是玉米蘑燕的生产，都需要进行玉蜀黍黑粉菌的接种。专利《一种玉米蘑菇生产方法及产品》CN10540409593A公开了将混有玉米黑粉菌厚垣孢子或担孢子的水溶液注射到玉米果穗顶端进行接种生产玉米蘑菇的方法，此方法虽然操作简单，但由于厚垣孢子中很容易混入其他致病菌且不易发现，所以用玉米黑粉菌厚垣孢子水溶液直接接种，经常会使整个玉米植株腐烂导致试验失败;其次，由于玉蜀黍黑粉菌属于异宗结合方式进行繁殖，必须将两种性亲和的担孢子混合并一起接种到植株体内才能成功，而现有方法是直接将厚垣孢子萌发后的担孢子混合物制成接种液进行接种，这样的混合物随机性强，并不一定能保证接种液中包含两种性亲和的单倍体菌株，从而导致人工接菌的结果存在很大不确定性，试验的准确性、一致性和重复性都很差。因此，选择性亲和的玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株是成功进行人工接种的前提。发明内容[0005]本发明目的在于提供一对玉蜀黍黑粉菌组合，该玉蜀黍黑粉菌组合致病性强、发病率高，适于玉米育种中玉米瘤黑粉病抗性鉴定和玉米蘑菇的大规模生产。[0006]本发明第二目的在于提供上述玉蜀黍黑粉菌组合在玉米黑粉病抗性鉴定或玉米蘑菇生产等方面的用途。[0007]本发明第三目的在于提供含有上述玉蜀黍黑粉菌组合的接种液。[0008]本发明第四目的在于提供上述接种液的制备方法。[0009]本发明第五目的在于提供上述接种液在玉米黑粉病抗性鉴定或玉米蘑菇生产或等方面的用途。[0010]本发明通过以下技术方案实现：[0011]本发明一对玉蜀黍黑粉菌组合，包括玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UMOl和玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UM02;其中UMOl的保藏编号为CGMCCNo.15263;UM02的保藏编号为CGMCCNo.15387。[0012]上述玉蜀黍黑粉菌组合中，所述单倍体菌株UMOl的交配型为mfa2。[0013]上述玉蜀黍黑粉菌组合中，所述单倍体菌株UM02的交配型为mfal。[0014]本发明还提供了上述玉蜀黍黑粉菌组合在玉米黑粉病抗性鉴定上的应用。[0015]本发明还提供了上述玉蜀黍黑粉菌组合在玉米蘑菇生产上的应用。[0016]含有上述玉蜀黍黑粉菌组合的接种液，所述的接种液中含有玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UMOl和玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UM02。[0017]上述接种液，其含有上述单倍体菌株UMOl和单倍体菌株UM02的担孢子数为IXIO5〜IXIO6个ml〇[0018]上述接种液的制备方法，包括如下步骤：[0019]1将低温保存的UMOl菌株接种在PDA平板培养基上，在25°C〜28°C、黑暗条件下培养1〜2天，得到活化菌株；[0020]2用接种针挑取步骤⑴中所得的活化菌株，然后均匀涂布在PDA平板培养基上，在25°C〜28°C、黑暗条件下培养3〜5天，得到接种用菌体；[0021]3单倍体菌株接种母液的配制：用灭菌载玻片将步骤2所得菌体从PDA平板培养基上全部刮下，并按照1个培养皿平板上培养皿直径为9cm的菌体用IL灭菌水的比例进行稀释，即得单倍体菌株UMOl的接种母液；[0022]⑷按照步骤⑴〜步骤⑶所述方法制备单倍体菌株UM02的接种母液；[0023]5按照1:1的体积比比例将步骤3所得的UMOl接种母液和步骤4所得的UM02接种母液混合均匀，再按照体积百分比为〇.01%的比例加入吐温20，混合均匀，即得含有本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液。[0024]上述制备方法步骤（1或⑵中所述的PDA平板培养基的组成成分及其重量比为：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。[0025]所述PDA平板培养基按照常规方法制备，即将马铃薯200g去皮后切成小块，放入800ml蒸馏水中煮沸20min，4层纱布过滤后，按照比例加入葡萄糖20g和琼脂20g，煮沸后定容至IOOOml，121°C灭菌20min。[0026]上述接种液的接种方法:在玉米花丝抽出前通过注射方式将上述接种液注射到雌穗顶部，用于生产玉米蘑菇;或者在玉米的6-7叶期将上述接种液注射到茎部用于玉米瘤黑粉病鉴定。[0027]上述接种液在玉米蘑菇生产上的应用。[0028]上述接种液在玉米瘤黑粉病抗性鉴定上的应用。[0029]本发明具有的优点和有益效果：（1本发明玉蜀黍黑粉菌组合致病力强，接种成功率高，在高感玉蜀黍黑粉病的玉米品种伟科966上接种成功率可达80%，可用于进行玉米瘤黑粉病抗性鉴定，以及用于玉米蘑菇的生产；（2用本发明玉蜀黍黑粉菌组合进行玉米瘤黑粉病抗病性鉴定试验，其试验结果准确、稳定可靠，一致性、重复性好；（3用本发明玉蜀黍黑粉菌组合生产玉米蘑菇产量高，且包裹在苞叶内，便于采收和运输；（4本发明玉蜀黍黑粉菌组合的两株单倍体菌株可以作为基因工程的出发菌株，对玉米瘤黑粉菌品种进行基因工程改造，如提高玉米瘤黑粉菌中多糖、花青素等。[0030]生物保藏[0031]本发明玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UMOl，由本发明的发明人自行筛选得到，已于2018年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为:CGMCCNo.15263。[0032]本发明玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UM02,由本发明的发明人自行筛选得到，已于2018年2月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为:CGMCCNo.15387。附图说明[0033]图1.单倍体菌株筛选和交配型鉴定的电泳图谱;其中1号、2号、4号、5号、9号和10号为未成功单孢分离的单倍体混合菌株，3号、6号、7号、8号、11号为单倍体菌株;其中3号和11号单倍体菌株的交配型为mfal;6号、7号和8号单倍体菌株的交配型为mfa2。[0034]图2为玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UMOl和UM02的交配型检测电泳图谱;其中1为单倍体菌株UMOl，2为单倍体菌株UM02。[0035]图3玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UMOl的系统发育树图。[0036]图4玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UM02的系统发育树图。具体实施方式[0037]以下通过实施例对本发明做进一步的解释和说明，但是不对本发明构成任何限制。除非特别说明，以下实施例中所用方法均为常规方法，所用化学药剂均可从商业渠道购买。[0038]实施例1本发明玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株的分离筛选和鉴定[0039]按照如下方法进行：[0040]1收集冬孢子并制备冬孢子悬液：2016年12月在海南采集自然风干的玉米瘤黑粉菌癭，从玉米瘤黑粉菌癭上直接挑取少量的冬孢子置于灭菌的2ml离心管中，然后加入重量百分比为1%的次氯酸钠溶液Iml，颠倒混勾2min，12000rpm下离心lmin，去上清，加入灭菌水将沉淀清洗3遍，最后用无菌水将沉淀稀释，即得冬孢子悬液，其终浓度为为IO3个孢子ml〇[0041]2冬孢子培养:取步骤（1所得的冬孢子悬液200μ1涂布于PDA培养基上，在25°C下培养2天，即可观察到肉眼可见的细小菌落。[0042]3单孢分离培养：用灭菌牙签挑取单个肉眼可见的单菌落至Iml灭菌水中，用涡旋振荡器震荡混匀，取200μ1均匀涂布于PDA平板培养基上，在25°C培养2天，长出的单菌落即为待筛选和鉴定的单倍体担孢子菌落。[0043]4单倍体菌株的鉴定:通常玉蜀黍黑粉菌中控制遗传交配的a位点共有2种交配型mfal和mfa2。一个单倍体菌株只可能存在一种mfa基因，而两个性亲和的单倍体菌株中mfa基因必然不同。因此设计特异性引物用于检验分离得到的单倍体的交配型并判断其彼此的亲和性。以步骤（3所得的待鉴定的单倍体担孢子的DNA为模板，以下述UmfaIF、UmfalR、Umfa2F和Umfa2R引物进行PCR扩增，所述的引物序列为：[0044]UmfalF:5，-CCTGGGAGGTTGACAAAGAA-3，，[0045]UmfalR:5’-CCTTGAGACAAGCGAAGTCC-3’；[0046]Umfa2F:5，-CCAACCACACACCCTCTTCT-3，，[0047]Umfa2R:5’-CTGCAATTGCTCTGGAAACA-3’。[0048]以UmfalF和UmfalR为引物进行PCR扩增，所得扩增产物大小为549bp，以Umfa2F和Umfa2R为引物进行PCR扩增所得扩增产物大小为637bp;PCR的反应体系（25yL为:UmfalF10ymolL0.5yL,UmfalR10ymolL0.5yL,Umfa2F10ymolL0.5yL,Umfa2RIOymoIL0.5yL，EsTaqMasterMix康为世纪）12.5yL，DNA模板2yL，加CldH2O至25yL。所述的PCR反应程序为:95°C预变性5min;95°C变性4〇8,50°：退火4〇8,72°：延伸11^11，共30个循环；72°：延伸10min。[0049]结果见图1所获得的11个待鉴定菌株中，3号、6号、7号、8号和11号菌株仅扩增出一条带，说明是单倍体菌株，予以保留；其中3号和11号菌株的扩增产物大小为500bp左右，其交配型为mfal;6号、7号和8号菌株的扩增产物大小为600bp左右，其交配型为mfa2;其余的1、2、4、5、9和10为未成功单孢分离的单倍体混合菌，予以淘汰。[0050]实施例2:不同玉蜀黍黑粉菌组合的筛选试验[0051]1单倍体菌株的繁殖:将实施例1中所得的单倍体菌株3号、6号、7号、8号和11号5种菌株分别均匀涂布于不同的PDA平板培养基上，在25°C、黑暗条件下培养3天，得到单倍体菌体。[0052]2单倍体菌株接种母液的制备：用灭菌载玻片将步骤（1所得菌体从PDA平板培养基上全部刮下并按照1培养皿培养皿直径为9cm种子平板上的菌体用IL灭菌水的比例进行稀释，分别得3号、6号、7号、8号或11号单倍体菌株接种母液。[0053]3根据实施例1中的各单倍体菌株的交配型，将不同交配型的单倍体菌株两两组合，即将步骤2制备的不同交配型的2种单倍体菌株的接种母液按照1:1的体积比等比例混合，并按照体积百分比为0.01%的比例加入吐温20,混合均匀，共制得6中不同组合的接种液见表1。注意要将菌体充分混匀或进行过滤，否则在接种时容易造成连续注射器堵塞。[0054]42017年3月30日在河北省农林科学院植物保护研究所的试验温室的花盆中播种易感瘤黑粉病的玉米品种伟科966,每个处理播种60株，定期对幼苗进行浇水。待玉米6叶-7叶期采用联动注射器从幼苗茎侧方向刺入进行接种，接种量为2ml。接种后20天调查发病率。[0055]结果（见表1不同交配型菌株组合接种后都能发病，但是不同组合之间发病率差异很大，其中3号单倍体菌株和7号单倍体菌株组合接种后玉米瘤黑粉病发病率最高，为80.0%;其次，6号单倍体菌株和11号单倍体菌株组合的接种发病率达70%。说明3号单倍体菌株和7号单倍体菌株组合的致病力最强，接种后发病率最高，可用于玉米瘤黑粉病抗性鉴定和玉米蘑菇生产。本试验由于是在温室中进行，玉米植株生长较弱，抗病能力较差，所以导致各处理发病率较大田试验中发病率高。[0056]表1不同玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株组合筛选试验结果[0058]将7号单倍体菌株命名为UMOl，将3号单倍体菌株命名为UM02,并于中国微生物菌株管理委员会普通微生物中心进行保藏。[0059]按照实施例1步骤⑷所述方法对UMOl和UM02的交配型再次进行鉴定，结果（见图2再次证明UMO1的交配型为mfa2，UM02的交配型为mfa1。[0060]实施例3本发明单倍体菌株UMOl和UM02的分类鉴定[0061]提取UMOl或UMO2的基因组DNA，以UMOl或UMO2菌株的基因组DNA为模板，使用真菌通用引物ITSl和ITS4对真菌基因组ITS区段进行PCR扩增，所述引物序列为：[0062]ITS1:5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’；[0063]ITS4:5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’。[0064]所述的PCR反应体系（25yL，其中：ITSl10ymolL0.5yL，ITS410ymolL0.5yL，EsTaqMasterMix康为世纪）12.5yL，模板2yL，加ddH20至25yL。所述的PCR反应程序：95°C预变性5min，95°C变性30s，56°C退火45s，72°C延伸lmin，35个循环；最后72°C延伸10min，4°C保存。取5yL扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，在紫外透射仪下检测PCR产物大小，将PCR扩增产物直接送交生物工程上海股份有限公司测序，得到菌株UMOl的ITS序列（SEQIDNO.1或菌株UM02的ITS序列（SEQIDNO.2。将测序结果在NCBI网站上进行Blast比对，结果本发明单倍体菌株UMOl或UM02与玉蜀黍黑粉菌的序列同源性达到99%，同时利用MEGA5.2软件构建系统发育树，结果UMOl或UM02见图3和图4都与玉蜀黍黑粉菌聚合到一起，说明菌株UMOl或UM02属于玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis。[0065]综合以上分析结果可知，本发明单倍体菌株UMOl或UM02都属于玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis，且和现有的玉蜀黍黑粉菌菌株不同，都是新的玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株。[0066]实施例4本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液的制备[0067]按照如下方法进行：[0068]1菌种活化:将低温保存的UMOl菌株接种在PDA平板培养基其制备方法为:将马铃薯200g去皮后切成小块，放入800ml蒸馏水中煮沸20min，4层纱布过滤后，加入葡萄糖20g和琼脂20g，煮沸后定容至1000ml，121°C灭菌20min上，在25°C、黑暗条件下培养1天，得到活化菌株；[0069]2菌体制备：用接种针挑取适量步骤⑴中所得的UMOl活化菌株均匀涂布在PDA平板培养基上，在25°C、黑暗条件下培养3天，得到UMOl或UM02菌体；[0070]3接种母液的制备：用灭菌载玻片将步骤2所得菌体从PDA平板培养基上全部刮下并按照1培养皿培养皿直径为9cm平板上的菌体用IL灭菌水的比例进行稀释，配制成单倍体菌株UMOl的接种母液；[0071]⑷按照步骤1-步骤⑶所述方法制备单倍体菌株UM02的接种母液；[0072]5按照1:1的体积比比例将步骤3所得的UMOl接种母液和步骤4所得的UM02接种母液混合均匀，再按照体积百分比为〇.01%的比例加入吐温20，混合均匀，即得本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液。[0073]实施例5:本发明玉蜀黍黑粉菌组合接种效果对比试验[0074]一试验材料:伟科966高感玉米瘤黑粉病）[0075]二试验处理：[0076]1处理1:实施例4制备的本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液。[0077]2处理2:将2016年12月在海南采集的玉蜀黍黑粉菌冬孢子按照专利《一种玉米蘑菇生产方法及产品》201510937192.3公开的方法制备的接种液。[0078]三试验方法[0079]1本试验在河北省农林科学院植物保护研究所的试验农场进行。2017年6月19日播种，每个处理2行，行长5米，每行播种20-25株，行距0.6米，田间管理同一般大田管理。待玉米6叶-7叶期开始接种。[0080]2配制好的处理1和处理2接种液中担孢子浓度均调整为IXIO5-IXIO6个ml，使用连续注射器从幼苗茎侧方向刺入接种，接种量为2ml。接种后15-20天进行调查，调查时随机选择连续10株作为一组进行调查，共调查3组，记录每组的发病数，计算每组的发病率。[0081]结果（见表2处理1的接种成功率或发病率）明显高于处理2,其次，处理1各组发病率数据的方差明显小于处理2,说明用本发明玉蜀黍黑粉菌组合接种发病率比未经单倍体分离的黑粉菌单倍体混合物致病力强，发病率高，且发病更加稳定，试验重复性、一致性好，试验可靠性高。[0082]表2本发明玉蜀黍黑粉菌组合接种效果对比试验结果"[0084]~实施例6:利用本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液对玉米品种进行抗玉米黑粉病_鉴定试验[0085]一试验材料：[0086]1恒源5号、东单335和中单909已经通过玉米品种审定的对玉米瘤黑粉病有不同抗性的玉米品种）；[0087]2齐319玉米瘤黑粉病抗性鉴定抗病对照自交系）；[0088]3掖478玉米瘤黑粉病抗性鉴定感病对照自交系）。[0089]二试验方法：[0090]12017年6月23日在河北省农林科学院植物保护研究所的试验农场播种，每个品种种植2行，行长5米，行距0.6米，田间管理同一般大田管理。[0091]2在玉米6〜7叶期进行接种，采用连续注射器将实施例4制备的本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液从幼苗茎侧方向刺入接种，每株接种量为2ml。接种后15〜20天进行调查，记录每个品种的发病数，计算发病率，并进行抗病等级鉴定。[0092]结果见表3用本发明玉蜀黍黑粉菌UMOl和UM02组合的接种液对玉米品种进行抗瘤黑粉病的抗病性鉴定试验结果与已公布的玉米品种审定公告中的该品种的抗病性鉴定结果完全一致，说明用本发明玉蜀黍黑粉菌组合对玉米品种的抗瘤黑粉病的抗病性鉴定结果准确、可靠，可用于玉米新品种的抗瘤黑粉病的接种鉴定。[0093]表3利用本发明玉蜀黍黑粉菌组合对不同品种玉米抗瘤黑粉病抗性鉴定试验结果[0095]注：“HS”代表高感，“S”代表感病，“MR”代表中抗，“R”代表抗病[0096]实施例7:利用本发明玉蜀黍黑粉菌组合生产玉米蘑菇试验[0097]一试验材料:伟科966高感瘤黑粉病）[0098]二试验设计：[0099]1处理1:实施例4制备的本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液。[0100]2处理2:将2016年12月在海南采集的玉蜀黍黑粉菌冬孢子按照《一种玉米蘑菇生产方法及产品》201510937192.3的公开的方法制备的接种液。[0101]三试验方法：[0102]12017年5月5日播种，每处理1行，3次重复。行长5m，行距60cm，株距25cm，田间管理同一般的大田管理。于玉米花丝抽出前接种。[0103]2处理1和处理2接种液中担孢子浓度均为IXIO5-IXIO6个ml，用连续注射器从雌穗顶部通过花丝通道向果穗内部注射接种液2ml。接种后的第16-19天进行采收，并统计发病率及玉米蘑燕产量。[0104]表4用本发明玉蜀黍黑粉菌组合接种的发病率及玉米蘑菇产量试验结果[0106]结果见表4用本发明玉蜀黍黑粉菌组合接种液接种的处理1的发病率为52.9%，折算玉米蘑菇的亩产量为325.7kg;而用处理2的接种液接种的发病率为40.2%，折算玉米蘑菇的亩产量为233.8kg，处理1的发病率和亩产量都明显高于处理2。说明本发明玉蜀黍黑粉菌组合致病力强，接种成功率高，可用于玉米蘑菇的生产。另外，本发明接种时期选择在花丝抽出前，多为整个果穗发病，生产的玉米蘑菇不仅产量高，而且包裹在苞叶内部，便于米收和运输

权利要求：1.一对玉蜀黍黑粉菌组合，其特征在于包括玉蜀黍黑粉菌Ustilagomaydis单倍体菌株UMOl和玉蜀黍黑粉菌（Ustilagomaydis单倍体菌株UM02;其中所述的单倍体菌株UMOl的保藏编号为CGMCCNo.15263;所述的单倍体菌株UMO2的保藏编号为CGMCCNo.15387。2.根据权利要求1所述的玉蜀黍黑粉菌组合，其特征在于所述单倍体菌株UMOl的交配型为mfa2;所述的单倍体菌株UM02的交配型为mfal。3.权利要求1所述的玉蜀黍黑粉菌组合在玉米瘤黑粉病抗性鉴定上的应用。4.权利要求1所述的玉蜀黍黑粉菌组合在玉米蘑菇生产上的应用。5.含有权利要求1所述的玉蜀黍黑粉菌组合的接种液，其特征在于所述的接种液中含有玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UMOl和玉蜀黍黑粉菌单倍体菌株UM02。6.权利要求5所述的接种液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1将低温保存的UMOl菌株接种在HM平板培养基上，在25°C〜28°C、黑暗条件下培养1〜2天，得到活化菌株；2用接种针挑取步骤（1中所得的活化菌株，然后均匀涂布在PDA平板培养基上，在25°C〜28°C、黑暗条件下培养3〜5天，得到接种用菌体；3单倍体菌株接种母液的配制：用灭菌载玻片将步骤2所得菌体从PDA平板培养基上全部刮下，并按照1个培养皿培养皿直径为9cm平板上的菌体用IL灭菌水的比例进行稀释，即得单倍体菌株UMOl的接种母液；⑷按照步骤⑴〜步骤⑶所述方法制备单倍体菌株UM02的接种母液；5按照1:1的体积比比例将步骤3所得的单倍体菌株UMOl的接种母液和步骤⑷所得的单倍体菌株UM02接种母液混合均匀，再按照体积百分比为0.01%的比例加入吐温20，混合均匀，即得本发明玉蜀黍黑粉菌组合的接种液。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于步骤（1或2中所述的TOA平板培养基的组成成分及其重量比为:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。8.权利要求5所述的接种液在玉米黑粉病抗性鉴定上的应用。9.权利要求5所述的接种液在玉米蘑菇生产上的应用。

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