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申请/专利权人：吉林鑫水科技开发有限公司

摘要：玉蜀黍须和秸秆成分提取及各成分体外降糖活性检验方法属于植物药提取技术领域。本发明重点研究玉蜀黎的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位中总黄酮对α‑葡萄糖苷酶和α‑淀粉酶活性的抑制作用。经皮尔逊相关性分析玉蜀黍不同部位总黄酮含量与α‑葡萄糖苷酶IC50成显著的负相关性，并且在一定浓度范围内对α‑淀粉酶有抑制作用。这一结果表明，可以充分利用玉蜀黍须、秸秆中的有效成分，加大秸秆资源技术的开发利用，不仅可以提高玉米秸秆等作物的总体的利用率，解决玉蜀黍须、秸秆闲置、焚烧、生活燃烧等粗放的利用方式问题，还可对推动我国玉蜀黍资源重组乃至农业经济的快速发展，具有重要的意义。

主权项：1.玉蜀黍须和秸秆成分提取及各成分体外降糖活性检验方法，其特征是：包括以下步骤，并且以下步骤顺次进行，步骤一、获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮和玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总皂苷①取玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位阴干至含水量低于20％，粉碎过3号筛，分别称取50g过筛后的粉末，须粉末按照质量比1:15加入质量含量为80％的乙醇溶液，秸秆皮粉末按照质量比1:15加入质量含量为80％的乙醇溶液，秸秆芯粉末按照质量比1:45加入质量含量为80％的乙醇溶液，获得三种溶液；②将上述三种溶液分别40℃超声提取1小时～3小时，将提取液于40℃水浴锅上水浴至乙醇挥尽，加氨水至溶液为碱性，用乙酸乙酯萃取3次，取上层萃取液同时收集相应的下层萃取液，将上层萃取液浓缩至干膏，获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮；③分别在各下层萃取液中加入盐酸调pH值至1～2，放置4℃冰箱12小时～24小时，使其充分沉淀，以4000rmin速度离心30min，取沉淀，干燥至恒重，获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总皂苷；步骤二：采用亚硝酸钠-硝酸铝法以及总黄酮含量计算公式测定并获得步骤一中获得的各部位的总黄酮含量，采用香草醛-冰醋酸-高氯酸紫外显色法以及总皂苷含量计算公式测定并获得步骤一中获得的各部位的总皂苷含量，并绘制反应曲线；步骤三：获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总多糖冻干粉①取玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位阴干至含水量低于20％，粉碎过3号筛，分别称取50g过筛后的粉末，须粉末按照质量比1:15加入蒸馏水，秸秆皮粉末按照质量比1:15加入蒸馏水，秸秆芯粉末按照质量比1:45加入蒸馏水，获得三种悬浊液；②将上述三种悬浊液分别在40℃～60℃条件下超声提取1小时，3000rmin离心5min后，将收集的上清液于60℃旋蒸浓缩，收集浓缩液，加入无水乙醇，使其无水乙醇最终质量浓度达到75％，保鲜膜封口，放于4℃冰箱过夜，4000rmin离心30min，取沉淀，冷冻干燥，获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总多糖冻干粉；步骤四：采用苯酚-硫酸法以及总多糖含量计算公式分别测定并获得步骤三中获得的各部位的总多糖含量，并绘制反应曲线；步骤五：获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总蛋白质冻干粉①取玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位阴干至含水量低于20％，粉碎过3号筛，分别称取50g过筛后的粉末，须粉末按照质量比1:15加入Tris-HCl缓冲液，秸秆皮粉末按照质量比1:15加入Tris-HCl缓冲液，秸秆芯粉末按照质量比1:45加入Tris-HCl缓冲液，获得三种悬浊液；②将上述三种悬浊液分别用搅拌器搅拌4小时～6小时，4000rmin离心30min，取上清液，加入硫酸铵，使其硫酸铵最终质量浓度达到50％，静置12小时～24小时后，4000rmin离心30min，取沉淀物，加50％～80％蒸馏水溶解，经透析袋透析后，冷冻干燥，获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总蛋白质冻干粉；步骤六：采用考马斯亮蓝G250法以及总蛋白质含量的计算公式测定并获得步骤五中获得的各部位的总蛋白质含量，并绘制反应曲线；步骤七：分别取玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮、总皂苷、总多糖冻干粉、总蛋白质冻干粉，用千分之一DMSO的磷酸盐缓冲溶液溶解样品，配置成不同浓度的样品溶液，备用；步骤八：采用酶底物反应法测定玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮、总皂苷、总多糖冻干粉、总蛋白质冻干粉提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性取3份pH值为6.8的0.1molL磷酸盐缓冲液80μL，加入20μL含千分之一DMSO的磷酸盐缓冲溶液，再加入100μL0.5UmL的α-葡萄糖苷酶溶液，加入在37℃摇床中孵育10min后，加入5mmolL的PNPG溶液4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷50μL，并用酶标仪于0min和5min时刻在405nm处测定吸光度作为吸光度对照基准；取180份pH值为6.8的0.1molL磷酸盐缓冲液80μL，分别加入20μL步骤七中获得的样品溶液，再加入100μL0.5UmL的α-葡萄糖苷酶溶液，在37℃摇床中孵育10min后，加入5mmolL的PNPG溶液50μL，并用酶标仪于0min和5min时刻在405nm处测定吸光度，根据吸光度对照基准，利用SPSS17.0软件查找相应的半数抑制浓度，获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮、总皂苷、总多糖冻干粉、总蛋白质冻干粉提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性，并通过α-葡萄糖苷酶抑制率公式分别计算并获得抑制率；所述α-葡萄糖苷酶抑制率公式为： 其中，A5min-A0min对照为酶标仪分别于0min和5min时刻，在405nm处测定对照品的吸光度A值；A5min-A0min样品为酶标仪分别于0min和5min时刻，在405nm处测定样品的吸光度A值；步骤九：采用SPSS17.0软件进行皮尔逊相关性分析，玉蜀黍各部位总黄酮对α-葡萄糖苷酶对抑制率测定结果以平均值±标准差表示，以皮尔逊相关系数P0.05作为差异显著性判断的标准；步骤十：采用3，5-二硝基水杨酸比色法测定玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮、总皂苷、总多糖冻干粉、总蛋白质冻干粉提取物对α-淀粉酶抑制活性取3个试管，分别在试管中加入含千分之一DMSO二甲基亚砜的磷酸盐缓冲溶液200μL，再加入288μL蒸馏水，在37℃摇床中孵育5min后，加入质量浓度0.5％淀粉溶液320μL，于37℃摇床中反应3min后，从中取出200μL溶液于试管中，并加入100μL二硝基水杨酸DNS终止液，沸水浴15min，取出冷却后，加入900μL蒸馏水，混合并取出200μL于96孔板中，在540nm下测定吸光度，作为空白吸光度值；取3个试管，分别在试管中加入含千分之一DMSO二甲基亚砜的磷酸盐缓冲溶液200μL，再加入128μL蒸馏水，160μL1UmL的α-淀粉酶溶液，在37℃摇床中孵育5min后，加入质量浓度0.5％淀粉溶液320μL，于37℃摇床中反应3min后，从中取出200μL溶液于试管中，并加入100μL二硝基水杨酸DNS终止液，沸水浴15min，取出冷却后，加入900μL蒸馏水，混合并取出200μL于96孔板中，在540nm下测定吸光度，作为对照的吸光度值；取180个试管，分别在试管中加入一种样品溶液200μL，再加入128μL蒸馏水，160μL1UmL的α-淀粉酶溶液，在37℃摇床中孵育5min后，加入质量浓度0.5％淀粉溶液320μL，于37℃摇床中反应3min后，从中取出200μL溶液于试管中，并加入100μL二硝基水杨酸DNS终止液，沸水浴15min，取出冷却后，加入900μL蒸馏水，混合并取出200μL于96孔板中，在540nm下测定吸光度，根据空白吸光度值和对照的吸光度值获得玉蜀黍的须、秸秆皮以及秸秆芯三个部位的总黄酮、总皂苷、总多糖冻干粉、总蛋白质冻干粉提取物对α-淀粉酶抑制活性，并通过α-淀粉酶抑制率公式分别计算并获得抑制率；所述α-淀粉酶抑制率公式为： 其中，A样品为酶标仪在540nm处测定样品的吸光度A样品值，A空白为酶标仪在540nm处空白的吸光度A空白值，、A对照为酶标仪在540nm处对照品的吸光度A对照值。

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