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申请/专利权人：扬州大学

摘要：本发明涉及海洋真菌HK1‑6中azaphilones类化合物及其作为抗MRSA药物的应用，具体涉及海洋真菌Penicilliumsp.HK1‑6产生的次级代谢产物1‑4或其药学上可接受的盐：本发明化合物1‑4对MRSA如S.aureusATCC43300和S.aureusATCC33591以及VER如E.faecalisATCC51299均显示出很强的抗菌活性，MIC≤12.5μgmL，尤其是化合物2对E.faecalisATCC51299的MIC比阳性药万古霉素强一倍，显示出了将其开发作为抗耐药菌药物、药物先导化合物以及候选药物的良好前景。

主权项：1.一种海洋真菌来源的azaphilones类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述azaphilones类化合物具有化合物1–4所示的结构：

全文数据：海洋真菌HK1-6中azaphiIones类化合物及其作为抗MRSA药物的应用技术领域[0001]本发明属于海洋真菌次级代谢产物领域，具体涉及一种海洋真菌来源的azaphiIones类化合物。本发明还涉及上述azaphiIones类化合物及其制备方法与作为抗耐药菌药物的应用。本发明的azaphiIones类化合物显示了良好的抗耐药菌活性，尤其是对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌MRSA和万古霉素耐药的粪肠球菌VER。背景技术[0002]耐甲氧西林金黄色葡萄球菌methicillin-resistantStuphylococcusaureus，MRSA是临床感染的首要致病菌，在世界范围内广泛流行，具有高感染率、高致死率等特点，并且感染率逐年持续升高。MRSA可导致机体各种感染，并且由于其表现出的多重耐药性以及耐药性的快速变迀给临床治疗带来了极大困难。在我国，MRSA是主要的耐药菌之一。万古霉素一直作为MRSA感染治疗的最后防线，但是随着临床上大规模的使用和误用，对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌已开始出现。一旦MRSA对抗生素表现出普遍耐药，将严重威胁患者的生命安全。因此，开发针对MRSA感染的新型抗菌药已成为国内外研究热点，对人类社会的可持续发展具有重要意义。[0003]红树植物根际土壤真菌长期适应于红树林生态特殊的生存环境，形成了其特有的生物合成方式，能够产生结构新颖、作用机制独特的次级代谢产物。来源于红树林生态系统的真菌次级代谢产物已经成为海洋药物及其先导化合物的重要来源。并且海洋真菌能够通过人工发酵的方法大量获得化合物，能有效解决药物开发过程中的药源问题，在生态文明建设和可持续发展方面具有独特的优势。发明内容[0004]海洋真菌PeniciIliumsp.HKl-6的菌种保藏信息:保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所;保藏日期:2016年7月5日；保藏编号:CGMCCNo.12762;分类命名：青霉Penicilliumsp.。该真菌ITS区域的序列为：[0006]本发明所述的海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6来源于红树林根际土壤。[0007]本发明提供一类由上述海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6产生的次级代谢产物1-4或其药学上可接受的盐，其特征在于所述次级代谢产物1-4具有如下结构：[0009]本发明提供一种化合物1-4或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤：[0010]1先在菌种培养基中对海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6进行菌种培养；[0011]2再在发酵培养基中对步骤⑴中的海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6进行发酵培养；[0012]⑶将步骤⑵得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用有机溶剂A萃取1〜5次，优选3〜5次，合并萃取液后减压浓缩得到发酵液浸膏;菌体用有机溶剂B浸提1〜5次，优选3〜5次，合并浸提液后减压浓缩得到菌体浸膏;合并发酵液浸膏和菌体浸膏后，经过减压娃胶柱层析，洗脱剂依次采用石油醚：乙酸乙酯=100:0至0:100、氯仿：甲醇=100:0至0:100的梯度进行洗脱，并将其按照极性大小分成10个组分Fr.1〜Fr.10;[0013]4组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=I:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH:H2O=85:15，最后得到化合物4;组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:6至1:3或者甲醇：二氯甲烷=1:30至1:15,再经高效液相色谱冊]^制备所用色谱柱为48；[161^]18,9.4\250_，7以111，流速为211117111；[11，流动相为MeOH:H2O=85:15，得化合物2;组分Fr.8先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=1:1，再经㈤S反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH:H2O=75:25，最后经高效液相色谱HPLC制备所用色谱柱为AgilentC18，9.4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H2O=85:15，分别得到化合物1和3。本发明制备方法中涉及洗脱剂、流动相等比例的均指体积比。[0014]其中所述菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水，发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水。[0015]本发明上述制备方法中，所述的有机溶剂A优选乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或乙醚中的一种或几种;所述的有机溶剂B优选甲醇、乙醇、THF或丙酮中的一种或几种。[0016]本发明上述制备方法中菌种培养基优选含有葡萄糖0.1%-10.0%、酵母膏0.01%-5%、蛋白胨0.01%-5%、琼脂0.1%-6.0%、粗海盐0.05%-10%，适量的水;进一步优选含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-2%、蛋白胨0.01%-2%、琼脂0.1%-3.0%、粗海盐0.05%-5%;上述百分比均为重量百分比;培养温度优选为0-45°C，进一步优选5-30°C，更进一步优选15-25°C;培养时间优选为2-10天，进一步优选为3、5、7天。发酵培养基优选含有葡萄糖0.1-10·〇%、酵母膏0.01%_5%、蛋白胨0.01%-5%、粗海盐0.05%-10%，适量的水;进一步优选含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-2%、蛋白胨0.01%-2%、粗海盐0.05%-5%;上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0-45°C，进一步优选5-30°C，更进一步优选l〇_25°C;培养时间优选为20-40天，进一步优选21、24、28、30、32、35天;所述的正相硅胶柱层析中采用的固定相的硅胶目数为100〜200目、200〜300目或300〜400目，优选200〜300目。[0017]—种抗耐药菌药物，其特征在于包含化合物1-4或其药学上可接受的盐作为活性成分。所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌优选E.faecalisATCC51299。[0018]本发明提供一种药物组合物，其特征在于包含上述化合物1-4或其药学上可接受的盐，和至少一种其他抗菌药物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。该药物组合物优选注射剂、口服制剂、冻干粉针剂、悬浮剂等。所述药物组合物用于预防和或治疗由耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌优选E.faecalisATCC51299感染引起的疾病。[0019]本发明提供上述化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备抗耐药菌药物中的用途。所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌优选E.faecalisATCC51299。[0020]本发明提供上述化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于预防和或治疗由S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591、S.aureusATCC25923、S.aureusATCC29213、E.faecalisATCC51299、E.faeciumATCC35667感染引起的疾病。[0021]本发明提供上述化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备抗耐药菌药物先导化合物中的应用。所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌（优选E.faecalisATCC51299〇[0022]本发明提供上述化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备抗耐药菌候选药物中的应用。所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌优选E.faecalisATCC51299。[0023]本发明中术语“药学上可接受的盐”是指非毒性的无机或有机酸和或碱的加成盐，可参见“Saltselectionforbasicdrugs”，Int.J.Pharm.1986，33,201_217。这些盐可在化合物1-4最后分离和纯化过程中原位制备，或通过使碱或酸官能团分别与适当的有机或无机酸或者碱反应而分别制备。具有代表性的盐包括但不限于下列：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷硫酸盐、乙磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对-甲苯磺酸盐和十一酸盐。此外，碱性含氮基团可以被如下试剂季铵盐化:低级烷基齒化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物;二烷基硫酸酯，例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；长链卤化物，例如癸基、十二烷基、十四烷基、十八烷基氯化物、溴化物和碘化物;劳烷基卤化物，例如苄基和苯乙基溴化物等。如此可获得水或油溶性或可分散的产物。[0024]可以用于形成药学上可接受的酸加成盐的酸的实例包括如下的酸:无机酸，例如盐酸、硫酸、磷酸;有机酸，例如草酸、马来酸、甲烷磺酸、琥珀酸、柠檬酸、富马酸、葡萄糖醛酸、甲酸、乙酸、丁二酸。碱性加成盐可以在化合物1-4的最后分离和纯化过程中原位制备，或通过使羧酸基团与适当的碱例如药学上可接受的金属阳离子的氢氧化物.碳酸盐或碳酸氢盐反应分别制备，或者与氨或有机伯、仲或叔胺反应制备。药学上可接受的盐包括但不限于:基于碱金属和碱土金属的阳离子，例如钠、锂、钾、钙、镁、错盐等，以及非毒性铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙胺、乙胺等。用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、昵嗪等。附图说明[0025]图1化合物1的1HNMR图；[0026]图2化合物1的13CNMR图；[0027]图3化合物2的1HNMR图；[0028]图4化合物2的13CNMR图；[0029]图5化合物3的1HNMR图；[0030]图6化合物3的13CNMR图；[0031]图7化合物4的1HNMR图；[0032]图8化合物4的13CNMR图；[0033]图9化合物1的HSQC图；[0034]图10化合物1的1H-1HCOSY图；[0035]图11化合物1的HMBC图；[0036]图12化合物1的NOESY图。具体实施方式[0037]为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。[0038]实施例1[0039]1海洋真菌PeniciIliumsp.HK1-6菌种的培养[0040]真菌Penicilliumsp.HK1-6的菌种培养所用的培养基为每IOOOmL水中加入:土豆200g煮沸取汁，葡萄糖20g，粗海盐30g，琼脂15g;使用时倒入玻璃培养皿中，制成培养基平板。真菌菌株接种于培养基平板中，在20°C下摇床培养3天。[0041]⑵海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6的发酵[0042]真菌Penicilliumsp.HKl-6的发酵培养所用的发酵培养基为，每IOOOmL水中加入:土豆200g煮沸取汁，葡萄糖20g，粗海盐30g;使用时分装于锥形瓶中。真菌菌株接种于锥形瓶的培养基中，于15〜20°C静置培养28天。[0043]3发酵物中成分的初步分离[0044]取步骤2所得的发酵物10L，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯萃取3〜5次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏;菌体用甲醇浸提3〜5次，减压浓缩得到菌体浸膏;合并发酵液浸膏和菌体浸膏，先进行减压硅胶柱层析，洗脱剂先采用石油醚:乙酸乙酯=100:0至0:100体积百分比，下同）梯度洗脱，再采用氯仿：甲醇=100:0至0:100梯度洗脱，将洗脱得到的成分按照极性大小分成10个组分Fr.1〜Fr.10。[0045]⑷PenicilonesA-D即化合物1-4的分离提取[0046]将步骤（3得到的组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=l:l，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为Me0H:H20=85:15,最后得到peniciloneD即化合物410.9mg;组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:6至1:3或者甲醇：二氯甲烷=1:30至1:15,再经高效液相色谱HPLC制备所用色谱柱为AgilentC18，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H20=85:15，最后得到penicilone8即化合物230.211^;组分?18先经36?111611^-20凝胶柱层析，洗脱剂为01：13:16〇!1=1:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH:H2O=75:25，最后经高效液相色谱HPLC制备所用色谱柱为AgilentC18，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H20=85:15，分别得到peniciloneA即化合物123.7mg和peniciloneC即化合物38.8mg〇[0048]PeniciloneΑ1：[α]15〇156c0.3,MeOH；UVMeOHAmax=332,224nm；CD0·08mM，Me0HAmaxΔε3567·3，270-3·3nm;IRKBrV贴x3415，2925，2854，1703，1635,1453,1377,1321,1099,873011'1;¾NMRCDCl3,600MHzand13CNMRCDCl3,150MHz,见表1;HRESIMSmz497.2536calcdforC29H37〇7,497.2534，519.2353calcdforcalcdforC29H35ClO7Na,553.1964.[0051]PeniciloneD4：[a]15D-167c0.3,Me0H；UVMeOHAmax=347,220nm；CD0.08mM，Me0HHmaxAε366-9.1，23111.1nm;IRKBrV繼3408,2925,2853,1705，1627,1527,1465,1326,1132,1096,997011-1;¾匪RCDC13,600MHzand13C匪RCDC13，150MHz，见表2;HRES頂Smz513.2057calcdforC29H34Cl〇6,513.2038.[0052]表I·化合物I和2的1H600MHzand13C150MHzNMRCDCl3数据[0055]表2·化合物3和4的1H600MHzand13C150MHzNMRCDCl3数据[0057]实施例2[0058]1海洋真菌Penicilliumsp·HK1-6菌种的培养[0059]真菌Penicilliumsp.HK1-6的菌种培养所用的培养基中含有葡萄糖0.1%重量百分比，下同）、酵母膏5%、蛋白胨0.01%、琼脂0.1%、粗海盐10%，其余为水，使用时制成试管斜面，真菌菌株在25°C下培养5天。[0060]2海洋真菌PeniciIliumsp·HK1-6的发酵[0061]真菌Penicilliumsp.HK1-6的发酵培养所用的发酵培养基为含有葡萄糖0.1%重量百分比，下同）、酵母膏0.01%、蛋白胨5%、粗海盐0.05%，适量的水，真菌菌株于15〜20°C培养21天。[0062]3发酵物中成分的初步分离[0063]取步骤2所得的发酵物30L，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙醚萃取3次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用乙醇浸提3次，减压浓缩得到菌体浸膏;合并发酵液浸膏和菌体浸膏，先进行减压硅胶柱层析，洗脱剂先采用石油醚：乙酸乙酯=100:0至0:100体积百分比，下同）梯度洗脱，再采用氯仿：甲醇-100:0至〇:1〇〇梯度洗脱，将洗脱得到的成分按照极性大小分成10个组分Fr.1〜Fr.10。[0064]⑷PenicilonesA-D即化合物1-4的分离提取[0065]将步骤（3得到的组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=l:l，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为Me0H:H20=85:15,最后得到peniciloneD即化合物432mg;组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:6至1:3或者甲醇：二氯甲烷=1:30至1:15,再经高效液相色谱HPLC制备（所用色谱柱为AgilentC18，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H20=85:15，最后得到peniciloneB即化合物287mg;组分Fr.8先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=I:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH:H2O=75:25，最后经高效液相色谱HPLC制备所用色谱柱为AgiIentCl8，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H2O=85:15，分别得到peniciloneA即化合物l74mg和peniciloneC即化合物327mg〇[0066]实施例3[0067]1海洋真菌PeniciIliumsp.HK1-6菌种的培养[0068]真菌青霉Penicilliumsp.HKl-6的菌种培养所用的培养基中含有葡萄糖10%重量百分比，下同）、酵母膏0.01%、蛋白胨5%、琼脂3%、粗海盐0.05%，其余为水，使用时制成试管斜面，真菌菌株在30°C下培养7天。[0069]2海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6的发酵[0070]真菌青霉PeniciIliumsp.HKl-6的发酵培养所用的发酵培养基为含有葡萄糖10%重量百分比，下同）、酵母膏5%、蛋白胨0.01%、粗海盐5%，其余为水，真菌菌株于25〜32°C培养35天。[0071]3发酵物中成分的初步分离[0072]取步骤2所得的发酵物50L，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙醚萃取5次，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏；菌体用乙醇浸提5次，减压浓缩得到菌体浸膏;合并发酵液浸膏和菌体浸膏，先进行减压硅胶柱层析，洗脱剂先采用石油醚：乙酸乙酯=100:0至0:100体积百分比，下同）梯度洗脱，再采用氯仿：甲醇=100:0至〇:1〇〇梯度洗脱，将洗脱得到的成分按照极性大小分成10个组分Fr.1〜Fr.10。[0073]⑷PenicilonesA-D即化合物1-4的分离提取[0074]将步骤（3得到的组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=I:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为Me0H:H20=85:15,最后得到peniciloneD即化合物454mg;组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:6至1:3或者甲醇：二氯甲烷=1:30至1:15,再经高效液相色谱HPLC制备（所用色谱柱为AgilentC18，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H20=85:15，最后得到penicilone8即化合物212811^;组分?18先经36?111611^-20凝胶柱层析，洗脱剂为01：13:16〇!1=1:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH:H2O=75:25，最后经高效液相色谱HPLC制备所用色谱柱为AgiIentCl8，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H2O=85:15，分别得到peniciloneA即化合物l99mg和peniciloneC即化合物338mg〇[0075]实施例1-3中未具体指明的其他菌种培养、发酵条件，以及正相硅胶柱色谱分离、反相硅胶柱色谱、重结晶等其他实验操作条件均为本领域常规的实验操作条件，本领域的技术人员可以根据实际需要，进行合理的选择。[0076]实施例4[0077]在菌种培养基中对海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6进行菌种培养，再在发酵培养基中对上述海洋真菌进行发酵培养，将发酵液和菌体分离后，发酵液用乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、乙醚或热水中的一种或几种萃取，萃取液减压浓缩得到发酵液浸膏;菌体用甲醇、乙醇、THF、丙酮或热水中的一种或几种浸提，浸提液减压浓缩得到菌体浸膏;合并发酵液浸膏和菌体浸膏，进行减压硅胶柱层析，洗脱剂依次采用石油醚：乙酸乙酯=100:0至0:100、氯仿：甲醇=100:0至〇:100的梯度进行洗脱，将其按照极性大小分成10个组分Fr.〜Fr.10;组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=1:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH:H2O=85:15，最后得到化合物4;组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:6至1:3或者甲醇:二氯甲烷=1:30至1:15,再经高效液相色谱HPLC制备（所用色谱柱为AgilentC18，9.4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:出0=85:15，得化合物2;组分?18先经36?1^1611^-20凝胶柱层析，洗脱剂为〇1：13:160!1=1:1，再经㈤S反相硅胶柱层析，洗脱剂Me0H:H20=75:25,最后经高效液相色谱HPLC制备所用色谱柱为AgilentC18,9.4X250mm，7ym，流速为2mLmin，流动相为Me0H:H20=85:15，分别得到化合物1和3。化合物1-4结构确证数据与实施例1一致），其中所述菌种培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼脂、粗海盐、水，所述发酵培养基中含有葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水。[0078]为了探索更广泛的适用于本发明制备化合物1-4或其药学上可接受的盐的方法，本实施例中菌种培养基、发酵培养基中各成分的添加，均按本领域中常规比例添加或按任意比例添加。实验结果表明，上述常规选择的制备方法，均能得到化合物1-4,区别仅仅在于得到的化合物1-4的质量的不同。[0079]实施例1-4的结果表明，按照本领域常规的菌种培养、发酵条件，常规的色谱分离或重结晶的条件对海洋真菌Penici11iumsp.HK1-6进行菌种培养、发酵、分离纯化，均能得到化合物1-4。[0080]实施例5本发明的化合物1-4的抗菌活性的测定[0081]本发明的化合物按照文献方法（PierceC.G.;UppuluriP.;TeistanA.R.;fformleyJr.F.L.；MowatE.；RamageG.；Lopez-ribotJ.L.Nat.Protoc.2008,3,1494-1500，测试6株革兰氏阳性菌:耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌2株:S.aureusATCC43300和S.aureusATCC33591，敏感型金黄色葡萄球菌2株：S.aureusATCC25923和S.aureusATCC29213,耐万古霉素的粪肠球菌1株:E.faecalisATCC51299,敏感型屎肠球菌1株：E.faeciumATCC35667;1株革兰氏阴性菌：大肠杆菌E.coliATCC25922。本发明化合物1-4对大肠杆菌E.coIiATCC25922没有明显抗菌效果，但是对革兰氏阳性菌，尤其是对甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌：S.aureusATCC43300和S.aureusATCC33591以及万古霉素耐药的粪肠球菌:E.faecalisATCC51299均显示出很强的抗菌活性，其最小抑菌浓度minimuminhibitoryconcentration，MIC均小于或等于12.5ygmL表3中仅列出化合物2-4的详细抗菌活性数据），尤其是化合物2对E.faecalisATCC51299的MIC比阳性药万古霉素强一倍，显示出了将其开发作为抗耐药菌药物、药物先导化合物以及候选药物的良好前景。[0082]表3本发明的化合物2-4的抗菌活性数据[0084]本发明化合物1-4对革兰氏阳性菌，尤其是对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌MRSA:S.aureusATCC43300和S.aureusATCC33591以及耐万古霉素的粪肠球菌VER:E.faecalisATCC51299均显示出很强的抗菌活性，远优于甲氧西林的抗菌活性，而且本发明化合物1-4对MRSA和VER的抑菌活性与其类似物CohaerinsA和B相比具有显著提高活性提高4-8倍）。[0085]此外，本发明化合物1-4不仅具有显著的抗耐药菌MRSA和VER活性，而且其具有较低的毒副作用。细胞毒活性测试，化合物1-4在20μΜ浓度时均未显示明显的细胞毒活性。相反CohaerinsA和B在相同浓度条件下则显示出的一定的细胞毒性。[0086]可见本发明化合物1-4或其药学上可接受的盐可用于制备预防和或治疗由耐药菌优选MRSA、VER感染引起的疾病的药物先导化合物、候选药物、药物。[0087]参考文献：[0112]25.中国专利申请号CN201610831163.3[0113]在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考文献，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。本发明中所使用的中英文简称、代号等均可在参考文献或现有技术的技术手册、教科书、工具书中找到。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域的技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

权利要求：1.一种海洋真菌来源的azaphiIones类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述azaphilones类化合物具有化合物1-4所示的结构：2.权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1先在菌种培养基中对海洋真菌PeniciIliumsp.HK1-6进行菌种培养；⑵再在发酵培养基中对步骤⑴中的海洋真菌Penicilliumsp.HKl-6进行发酵培养；3将步骤2得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用有机溶剂A萃取1〜5次，优选3〜5次，合并萃取液后减压浓缩得到发酵液浸膏;菌体用有机溶剂B浸提1〜5次，优选3〜5次，合并浸提液后减压浓缩得到菌体浸膏;合并发酵液浸膏和菌体浸膏后，经过减压硅胶柱层析，洗脱剂依次采用石油醚：乙酸乙酯=100:0至0:100、氯仿：甲醇=100:0至0:100的梯度进行洗脱，并将其按照极性大小分成10个组分Fr.1〜Fr.10;4组分Fr.4先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=1:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂为MeOH:H2O=85:15，最后得到化合物4;组分Fr.5先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯：石油醚=1:6至1:3或者甲醇:二氯甲烷=1:30至1:15,再经高效液相色谱HPLC制备，得化合物2;组分Fr.8先经SephadexLH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl3:MeOH=1:1，再经ODS反相硅胶柱层析，洗脱剂MeOH:H2O=75:25，最后经高效液相色谱HPLC制备，分别得到化合物1和3。所述菌种培养基中包含如下成分:葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、琼月旨、粗海盐、水;所述发酵培养基中包含如下成分:葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、粗海盐、水。所述的有机溶剂A优选乙酸乙酯、二氯甲烷、氯仿或乙醚中的一种或几种;所述的有机溶剂B优选甲醇、乙醇、THF或丙酮中的一种或几种。所述的菌种培养基优选含有葡萄糖0.1%-10.0%、酵母膏〇·〇1%-5%、蛋白胨0·01%-5%、琼脂0·1%-6·0%、粗海盐0·05%-10%，适量的水；进一步优选含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-2%、蛋白胨0.01%-2%、琼脂0.1%-3.0%、粗海盐0.05%-5%;上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0-45°C，进一步优选5-30°C，更进一步优选15-25°C;培养时间优选为2-10天，进一步优选为3、5、7天。所述的发酵培养基优选含有葡萄糖〇.1%-10.〇%、酵母膏〇.〇1%-5%、蛋白胨0.01%-5%、粗海盐0.05%-10%，适量的水;进一步优选含有葡萄糖0.1%-5.0%、酵母膏0.01%-2%、蛋白胨0.01%-2%、粗海盐0.05%-5%;上述百分比均为重量百分比；培养温度优选为0-45°C，进一步优选5-30°C，更进一步优选10-25°C;培养时间优选为20-40天，进一步优选21、24、28、30、32、35天。3.权利要求2所述的方法，其特征在于所述的高效液相色谱HPLC制备的色谱条件为:色谱柱为AgilentC18，9·4X250mm，7μπι，流速为2mLmin，流动相为MeOH:H2O=85:15。4.一种抗耐药菌药物，其特征在于包含权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐作为活性成分。所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌（优选E.faecalisATCC51299〇5.—种药物组合物，其特征在于包含权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐，和至少一种其他抗菌药物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。该药物组合物优选注射剂、口服制剂、冻干粉针剂、悬浮剂等。所述药物组合物用于预防和或治疗由耐药菌感染引起的疾病，所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（优选S.aureusATCC43300、S·aureusATCC33591和耐万古霉素的粪肠球菌（优选E.faecalisATCC51299〇6.权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备抗耐药菌药物中的应用。7.权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备药物中的应用，所述药物用于预防和或治疗由耐药菌感染引起的疾病。8.权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备抗耐药菌药物先导化合物中的应用。9.权利要求1所述的化合物1-4或其药学上可接受的盐在制备抗耐药菌候选药物中的应用。10.权利要求6-9任一项所述的应用，其特征在于所述耐药菌选自耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（优选S.aureusATCC43300、S.aureusATCC33591和耐万古霉素的奠肠球菌（优选E.faecalisATCC51299。

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