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申请/专利权人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所

摘要：本发明涉及azaphilones类化合物，具体的说是一种从土曲霉中获得的结构新颖的azaphilones类单体化合物及其制备和应用。化合物结构式为式一、式二或式三所示，本发明从土曲霉获得发酵粗提物，通过减压正相硅胶柱层析，减压反相硅胶柱层析以及半制备高压液相色谱的制备获得。该类化合物的肿瘤细胞毒活性测试通过抑制细胞增殖实验SRB法进行，测试结果显示部分化合物对肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2和结肠癌细胞HCT116均具有较好的增殖抑制活性，具有潜在成为抗肿瘤药物的可能性。式一中，R1为H或C1‑C5的烷基；R2为X1、X2、X3或X4；R3为CH2OH、CH2OCH3、CHO或CHOCH32；其中，X1为X2为X3为X4为

主权项：1.一种从土曲霉中获得的azaphilones类化合物，其特征在于：化合物结构式为式一、式二或式三所示， 式一中，R1为H或C1-C5的烷基；R2为X1、X2、X3或X4；R3为CH2OH、CH2OCH3、CHO或CHOCH32；其中，X1为X2为X3为X4为

全文数据：一种从土曲霉中获得的azaphilones类化合物及其制备和应用技术领域本发明涉及azaphilones类化合物，具体的说是一种从土曲霉中获得的结构新颖的azaphilones类单体化合物及其制备和应用。背景技术从天然产物中寻找治疗疾病的药物一直以来都是新药研发中的重要内容，目前市场上已经存在多种直接或间接的来源于天然产物的药物，如抗疟药物青蒿素、抗肿瘤药物紫杉醇等。而来源于真菌的天然产物中也有一些成药的案例，如青霉素类抗生素、他汀类调血脂药物等。azaphilones类化合物常见于丝状真菌的次级代谢中，因其结构类型的复杂性、生物活性的多样性一直受到科研人员的关注。该类化合物是一类以高度氧化的γ吡喃醌二元环为母核骨架的化合物。由于其独特的母核结构，在伯胺的存在下，氮原子能够很容易的将化合物吡喃环上的氧原子替换下来，形成插烯γ吡啶酮的结构，因此又称为嗜氮酮类化合物。生物体内存在大量含有伯胺基团的化合物，例如氨基酸、蛋白质和核酸等，因此azaphilones类化合物很容易与其共价结合，这也是该类化合物能够产生广泛生物活性的机制。目前已经有部分azaphilones类化合物作为药物先导化合物或食品类添加剂用于研究和实际应用中。发明内容本发明的目的在于提供一种创造涉及一种从土曲霉中获得的结构新颖的azaphilones类单体化合、及其制备方法和应用。为实现上述目的，本发明采用技术方案为：一种从土曲霉中获得的azaphilones类化合物，化合物结构式为式一、式二或式三所示，式一中，R1为H或C1-C5的烷基；R2为X1、X2、X3或X4；R3为CH2OH、CH2OCH3、CHO或CHOCH32；其中，X1为X2为X3为X4为或，上述化合物的异构体。优选，所述式一中R1为H、甲基或乙基。一种从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的制备方法，1将每升去离子水中含1-2×108个A.terreusCICC40205菌株市购，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。的孢子的水溶液接种于发酵培养基中发酵培养至发酵液变红；2将上述发酵液经乙酸乙酯萃取，发酵后菌体经甲醇与二氯甲烷混合物萃取，而后将发酵液与菌体萃取后有机相合并，减压浓缩蒸干获得发酵粗提物；3将上述获得发酵粗提物依次通过减压正相硅胶柱层析、减压反相硅胶柱层析以及半制备高压液相色谱，即可依次获得式一、式二或式三所示化合物。所述步骤1将菌株A.terreusCICC40205接种到土豆琼脂平板PDA上，28-30℃培养7-10天，待孢子长满平板，用无菌水洗下孢子按照1-2×108个L的浓度接种到发酵培养基中28-30℃，220-250rpm摇床培养7-10天。所述发酵培养基为每升水中，葡萄糖20-70g，蔗糖10-40g,蛋白胨1-5g，酵母抽提物1-5g，醋酸钠1-5g，磷酸二氢钾0.04-0.4g，七水硫酸镁0.1-1g，柠檬酸钠2-10g和碳酸钙1.5-5g，PH调至6.0-7.0。所述步骤2发酵后将菌体与发酵液分离，发酵液采用乙酸乙酯萃取3-4遍，菌体采用甲醇与二氯甲烷混合液1:1萃取3-4遍，合并有机相，减压浓缩蒸干获得发酵粗提物；其中，甲醇与二氯甲烷混合液为按体积比为1-2:1-2混合。所述步骤3将粗提物首先进行减压正相硅胶柱层析，固定相为200-300目的正相硅胶，流动相先采用10％的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂洗脱，然后采用100％乙酸乙酯洗脱，收集100％乙酸乙酯的洗脱液减压浓缩蒸干，再进行减压反相硅胶柱层析，固定相为粒径40μm的反相硅胶，流动相用20-100：80-0的甲醇-水进行洗脱，收集各洗脱组份采用半制备液相进行分离纯化，即得式一、式二或式三所示化合物；其中，采用半制备液相进行分离。本发明部分化合物如下表所示表1一种从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的应用，所述式一、式二或式三所示化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述式一、式二或式三所示化合物在制备抗肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2或结肠癌细胞HCT116中的应用。本发明的优点：本发明从土曲霉A.terreusCICC40205中分离鉴定了22个结构新颖的azaphilones类化合物，并对这些新化合物做了抗肿瘤细胞毒活性测试，测试结果表明部分化合物对肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2和结肠癌细胞HCT116具有较好的增殖抑制活性，具有潜在成为抗肿瘤药物的可能性。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步的阐述。本发明从土曲霉获得发酵粗提物，通过减压正相硅胶柱层析，减压反相硅胶柱层析以及半制备高压液相色谱的制备获得。该类化合物的肿瘤细胞毒活性测试通过抑制细胞增殖实验SRB法进行，测试结果显示部分化合物对肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2和结肠癌细胞HCT116均具有较好的增殖抑制活性，具有潜在成为抗肿瘤药物的可能性。实施例1发酵菌株的培养，将菌株A.terreusCICC40205接种到土豆琼脂平板PDA上，28℃培养7天，待孢子长满平板，用无菌水洗下孢子按照1×108个L的浓度接种到发酵培养基中葡萄糖20gL，蔗糖10gL,蛋白胨1gL，酵母抽提物1gL，醋酸钠1gL，磷酸二氢钾0.4gL，七水硫酸镁0.1gL，柠檬酸钠2gL，碳酸钙1.5gL，PH调至6.5，28℃，220rpm摇床培养7天。2粗提物的制备，待菌株发酵结束后，将菌体与发酵液分离，发酵液采用乙酸乙酯萃取3遍，菌体采用甲醇：二氯甲烷1:1萃取3遍，合并有机相，减压浓缩蒸干获得发酵粗提物。3化合物的分离纯化，首先将粗提物进行减压正相硅胶柱层析，固定相为200-300目的正相硅胶，洗脱用流动相先采用10％的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂洗脱，然后采用100％乙酸乙酯洗脱。将100％乙酸乙酯的洗脱液减压浓缩蒸干，进行减压反相硅胶柱层析，固定相为粒径40μm的反相硅胶，洗脱用流动相分别为20％甲醇-水，40％甲醇-水，60％甲醇-水，80％甲醇-水和100％甲醇-水进行洗脱，收集20％甲醇-水洗脱得到的组份采用半制备液相进行分离，分离方法为普通C18色谱柱在18％乙腈-水洗脱条件下在保留时间4.5min得到化合物15，7.8min得到化合物16，10.2min得到化合物18，14.1min得到化合物20；收集40％甲醇-水洗脱得到的组份采用半制备液相进行分离，分离方法为普通C18色谱柱在35％乙腈-水洗脱条件下在保留时间6.8min得到化合物13，7.4min得到化合物14，11.1min得到化合物17，14.5min得到化合物19，17.6min得到化合物22；收集60％甲醇-水洗脱得到的组份采用半制备液相进行分离，分离方法为普通C18色谱柱在30％乙腈-水洗脱条件下在保留时间8.4min得到化合物4，10.3min得到化合物5，13.2min得到化合物10，19.8min得到化合物11；收集80％甲醇-水洗脱得到的组份采用半制备液相进行分离，分离方法为普通C18色谱柱在60％乙腈-水洗脱条件下在保留时间8.3min得到化合物1,12.5min得到化合物2,15.7min得到化合物3,18.5min得到化合物6,20.8min得到化合物7，22.4min得到化合物21；收集100％甲醇洗脱得到的组份采用半制备液相进行分离，分离方法为普通C18色谱柱在75％乙腈-水洗脱条件下在保留时间12.5min得到化合物8,15.1min得到化合物9，26.0min得到化合物12参见表1。表1所得部分化合物的波谱数据如下所示：azasperpyranoneA11HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.781H,s,H-1',6.941H,d,15.6,H-11,6.381H,s,H-8,6.271H,d,15.6,H-10,5.611H,d,9.6,H-13,5.041H,d,13.2,H-1,4.841H,d,13.2,H-1,4.792H,brs,H-9',2.511H,m,H-14,2.283H,s,H-8',1.853H,brs,H-18,1.431H,m,H-15,1.373H,s,H-19,1.341H,m,H-15,1.003H,d,6.6,H-17,0.853H,t,7.2,H-16.13CNMR150MHz,acetone-d6,δ,ppm:194.7C,C-3,162.0C,C-9,147.5C,C-5',146.0CH,C-13,144.5C,C-7,140.6CH,C-11,138.9C,C-6',133.3C,C-7',133.2C,C-12,129.7C,C-3',125.8CH,C-1',123.0C,C-6,120.2CH,C-10,118.8C,C-4',113.1C,C-2',111.7C,C-2,100.2CH,C-8,97.3C,C-5,79.6C,C-4,64.6CH2,C-1,57.4CH2,C-9',35.2CH,C-14,30.8CH2,C-15,24.1CH3,C-19,20.6CH3,C-17,12.6CH3,C-18,12.2CH3,C-16,11.2CH3,C-8'.HRESIMSmz497.2172[M+H]+calcdforC28H33O8,497.2170.azasperpyranoneB21HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.881H,s,H-1',6.931H,d,15.6,H-11,6.331H,s,H-8,6.251H,d,15.6,H-10,5.611H,d,9.6,H-13,5.011H,d,13.2,H-1,4.811H,d,13.2,H-1,4.811H,d,12.0,H-9',4.771H,d,12.0,H-9',3.113H,s,5-OCH3,2.511H,m,H-14,2.263H,s,H-8',1.853H,brs,H-18,1.431H,m,H-15,1.313H,s,H-19,1.311H,m,H-15,0.993H,d,6.6,H-17,0.853H,t,7.2,H-16.13CNMR150MHz,acetone-d6,δ,ppm:195.1C,C-3,161.7C,C-9,147.9C,C-5',146.0CH,C-13,143.6C,C-7,140.9C,C-6',140.4CH,C-11,133.3C,C-12,131.5C,C-7',129.6C,C-3',125.7CH,C-1',120.6CH,C-10,120.1C,C-6,118.6C,C-4',112.7C,C-2,111.5C,C-2',102.1C,C-5,100.3CH,C-8,80.5C,C-4,64.5CH2,C-1,57.2CH2,C-9',51.8CH3,C-5-OCH3,35.5CH,C-14,30.8CH2,C-15,24.2CH3,C-19,20.6CH3,C-17,12.6CH3,C-18,12.2CH3,C-16,11.1CH3,C-8'.HRESIMSmz533.2150[M+Na]+calcdforC29H34NaO8,533.2146.azasperpyranoneC31HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.841H,s,H-1',6.931H,d,15.6,H-11,6.321H,s,H-8,6.251H,d,15.6,H-10,5.611H,d,9.6,H-13,5.011H,d,13.2,H-1,4.811H,d,13.2,H-1,4.801H,d,12.0,H-9',4.761H,d,12.0,H-9',3.402H,q,6.65-OCH2-,2.511H,m,H-14,2.263H,s,H-8',1.853H,brs,H-18,1.431H,m,H-15,1.313H,s,H-19,1.311H,m,H-15,0.993H,d,6.6,H-17,0.913H,t,6.6,5-OCH2CH3,0.853H,t,7.2,H-16.13CNMR150MHz,aceton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erpyranoneL121HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:8.241H,s,H-1',6.931H,d,15.6,H-11,6.221H,d,15.6,H-10,6.031H,s,H-8,5.671H,s,H-9',5.621H,d,9.6,H-13,5.011H,d,13.2,H-1,4.801H,d,13.2,H-1,3.453H,s,9-OCH3,3.393H,s,9-OCH3,3.093H,s,5-OCH3,2.511H,m,H-14,2.293H,s,H-8',1.853H,brs,H-18,1.431H,m,H-15,1.321H,m,H-15,1.303H,s,H-19,0.993H,d,6.6,H-17,0.853H,t,7.2,H-16.13CNMR150MHz,acetone-d6,δ,ppm:195.3C,C-3,161.7C,C-9,147.1C,C-5',146.1CH,C-13,143.5C,C-7,141.3C,C-6',140.7CH,C-11,133.3C,C-12,132.0C,C-7',128.2CH,C-1',126.7C,C-6,126.7C,C-4',120.3CH,C-10,118.3C,C-3',112.8C,C-2,110.6C,C-2',104.9CH,C-9',101.9C,C-5,100.0CH,C-8,80.4C,C-4,64.5CH2,C-1,55.79-OCH3,55.19-OCH3,51.75-OCH3,35.5CH,C-14,30.8CH2,C-15,24.1CH3,C-19,20.7CH3,C-17,12.6CH3,C-18,12.2CH3,C-16,11.1CH3,C-8'.HRESIMSmz555.2592[M+H]+calcdforC31H39O9,555.2589.azasperpyranoneM131HNMR600MHz,DMSO-d6,δ,ppm:7.531H,s,H-1',6.081H,s,H-8,4.891H,d,13.2,H-1,4.741H,d,13.2,H-1,4.621H,d,12.0,H-9',4.561H,d,12.0,H-9',2.272H,td,6.6,2.4,H-10,2.153H,s,H-8',1.572H,m,H-11,1.273H,s,H-13,0.943H,t,7.2,H-12.13CNMR150MHz,DMSO-d6,δ,ppm:193.6C,C-3,166.5C,C-9,146.0C,C-5',141.5C,C-7,137.8C,C-6',132.3C,C-7',128.2C,C-3',123.7CH,C-1',122.5C,C-6,117.8C,C-4',111.5C,C-2',110.5C,C-2,96.1C,C-5,95.8CH,C-8,78.9C,C-4,63.7CH2,C-1,55.7CH2,C-9',35.5CH2,C-10,24.4CH3,C-13,20.0CH2,C-11,13.5CH3,C-12,11.1C,C-8'.HRESIMSmz439.1370[M+Na]+calcdforC22H24NaO8,439.1363.azasperpyranoneN141HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.841H,s,H-1',6.061H,s,H-8,4.941H,d,12.6,H-1,4.791H,d,12.6,H-1,4.782H,m,H-9',3.013H,s,H-5-OCH3,2.302H,td,7.8,2.4,H-10,2.263H,s,H-8',1.612H,m,H-11,1.293H,s,H-13,0.973H,t,7.2,H-12.13CNMR150MHz,DMSO-d6,δ,ppm:195.4C,C-3,168.6C,C-9,147.9C,C-5',143.5C,C-7,140.9C,C-6',131.5C,C-7',129.7C,C-3',126.7CH,C-1',120.5C,C-6,118.6C,C-4',111.5C,C-2',111.5C,C-2,102.1C,C-5,96.6CH,C-8,80.5C,C-4,64.6CH2,C-1,57.2CH2,C-9',51.8CH3C-5-OCH336.7CH2,C-10,24.2CH3,C-13,21.2CH2,C-11,13.9CH3,C-12,11.1C,C-8'.HRESIMSmz429.1559[M-H]-calcdforC23H25O8,429.1555.azasperpyranoneO151HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.761H,s,H-1',6.131H,s,H-8,4.971H,d,13.2,H-1,4.831H,d,13.2,H-1,4.782H,m,H-9',3.612H,t,6.0,H-12,2.412H,m,H-10,2.273H,s,H-8',1.802H,m,H-11,1.383H,s,H-13.13CNMR150MHz,DMSO-d6,δ,ppm:195.1C,C-3,169.1C,C-9,147.5C,C-5',144.4C,C-7,138.9C,C-6',133.4C,C-7',129.5C,C-3',126.0CH,C-1',122.8C,C-6,118.8C,C-4',113.1C,C-2',110.7C,C-2,97.2C,C-5,96.4CH,C-8,79.7C,C-4,64.8CH2,C-1,61.5CH2,C-12,57.3CH2,C-9',31.6CH2,C-10,31.2CH2,C-11,24.1CH3,C-13,11.2C,C-8'.HRESIMSmz431.1349[M-H]-calcdforC22H23O9,431.1348.azasperpyranoneP161HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.861H,s,H-1',6.091H,s,H-8,4.961H,d,13.2,H-1,4.791H,d,13.2,H-1,4.782H,m,H-9',3.612H,t,6.6,H-12,3.113H,s,H-5-OCH3,2.422H,m,H-10,2.253H,s,H-8',1.822H,m,H-11,1.323H,s,H-13.13CNMR150MHz,DMSO-d6,δ,ppm:195.3C,C-3,169.1C,C-9,148.6C,C-5',144.4C,C-7,141.5C,C-6',132.6C,C-7',129.6C,C-3',127.0CH,C-1',120.2C,C-6,118.6C,C-4',111.4C,C-2',110.7C,C-2,102.3C,C-5,96.5CH,C-8,80.6C,C-4,64.7CH2,C-1,61.6CH2,C-12,57.1CH2,C-9',51.8CH3C-5-OCH331.5CH2,C-10,24.2CH3,C-13,21.2CH2,C-11,11.1C,C-8'.HRESIMSmz445.1505[M-H]-calcdforC23H25O9,445.1504.azasperoneA211HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:7.011H,d,15.6,H-11,6.151H,d,15.6,H-10,6.071H,s,H-6,5.921H,s,H-8,5.631H,d,9.6,H-13,5.481H,s,H-1,3.433H,s,H-1-OCH3,2.511H,m,H-14,1.843H,brs,H-18,1.673H,s,H-19,1.431H,m,H-15,1.311H,m,H-15,0.993H,d,9.6,H-17,0.861H,t,7.2,H-16.13CNMR150MHz,acetone-d6,δ,ppm:203.0C,C-3,196.4C,C-5,155.8C,C-9,149.4C,C-7,145.9CH,C-13,140.2CH,C-11,133.4C,C-12,121.3CH,C-6,120.6CH,C-10,103.9CH,C-8,101.5CH,C-1,83.1C,C-4,69.0C,C-2,57.3CH3,C-1-OCH3,35.1CH,C-14,30.8CH2,C-15,29.7CH3,C-19,20.7CH3,C-17,12.6CH3,C-18,12.2CH3,C-16.HRESIMSmz363.1811[M+H]+calcdforC20H27O6,363.1802.azasperoneB221HNMR600MHz,acetone-d6,δ,ppm:8.001H,d,1.2,H-1,5.561H,d,1.2,H-6,3.783H,s,H-8-OCH3,3.642H,t,6.0,H-12,2.752H,m,H-10,2.342H,t,7.2,H-2',1.862H,m,H-11,1.622H,m,H-3',1.473H,s,H-13,0.963H,t,7.2,H-4'.13CNMR150MHz,acetone-d6,δ,ppm:193.8C,C-5,192.3C,C-3,172.6C,C-1',156.7C,C-9,153.4CH,C-1,141.4C,C-8,140.5C,C-7,116.8C,C-2,102.3CH,C-6,85.2C,C-4,61.4CH2,C-12,60.7CH3,C-8-OCH3,35.6CH2,C-2',30.5CH2,C-11,25.3CH2,C-10,22.6CH3,C-13,19.0CH2,C-3',13.7CH3,C-4'.HRESIMSmz351.1433[M+H]+calcdforC18H23O7,351.1438.应用例对上述获得化合物的肿瘤细胞毒活性测试：采用抑制细胞增殖实验SRB法进行测定，将处于对数生长期的A549、HepG2或HCT116细胞以5000个孔180μL孔分别接种于96孔板，培养24小时后，加入浓度分别为20μM、10μM、5μM、2.5μM、1.25μM、0.625μM的上述实施例制备获得单体化合物样品，每个样品设4个复孔。溶剂对照组DMSO的用量以受试组所用的最大剂量为准。药物作用72小时后，每孔加入50％mv冰冷的三氯乙酸TCA固定细胞，SRB染色后，加入150μL孔的Tris溶液，于酶标仪上测定540nm处的OD值，而后计算获得IC50值参见表2。肿瘤细胞生长的抑制率按以下公式计算：抑制率＝[OD540对照孔－OD540给药孔OD540对照孔]×100％表2以上所述实施例，为本发明专利较佳应用案例，但并非对本发明产生任何形式上的限制。在实际应用过程中，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例。

权利要求：1.一种从土曲霉中获得的azaphilones类化合物，其特征在于：化合物结构式为式一、式二或式三所示，式一中，R1为H或C1-C5的烷基；R2为X1、X2、X3或X4；R3为CH2OH、CH2OCH3、CHO或CHOCH32；其中，X1为X2为X3为X4为或，上述化合物的异构体。2.按权利要求1所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物，其特征在于：所述式一中R1为H、甲基或乙基。3.一种权利要求1所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的制备方法，其特征在于：1将每升去离子水中含1-2×108个A.terreusCICC40205菌株的孢子的水溶液接种于发酵培养基中发酵培养至发酵液变红；2将上述发酵液经乙酸乙酯萃取，发酵后菌体经甲醇与二氯甲烷混合物萃取，而后将发酵液与菌体萃取后有机相合并，减压浓缩蒸干获得发酵粗提物；3将上述获得发酵粗提物依次通过减压正相硅胶柱层析、减压反相硅胶柱层析以及半制备高压液相色谱，即可依次获得式一、式二或式三所示化合物。4.按权利要求3所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤1将菌株A.terreusCICC40205接种到土豆琼脂平板PDA上，28-30℃培养7-10天，待孢子长满平板，用无菌水洗下孢子按照1-2×108个L的浓度接种到发酵培养基中28-30℃，220-250rpm摇床培养7-10天。5.按权利要求4所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的制备方法，其特征在于：所述发酵培养基为每升水中，葡萄糖20-70g，蔗糖10-40g,蛋白胨1-5g，酵母抽提物1-5g，醋酸钠1-5g，磷酸二氢钾0.04-0.4g，七水硫酸镁0.1-1g，柠檬酸钠2-10g和碳酸钙1.5-5g，PH调至6.0-7.0。6.按权利要求3所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤2发酵后将菌体与发酵液分离，发酵液采用乙酸乙酯萃取3-4遍，菌体采用甲醇与二氯甲烷混合液1:1萃取3-4遍，合并有机相，减压浓缩蒸干获得发酵粗提物；其中，甲醇与二氯甲烷混合液为按体积比为1-2:1-2混合。7.按权利要求3所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤3将粗提物首先进行减压正相硅胶柱层析，固定相为200-300目的正相硅胶，流动相先采用10％的乙酸乙酯-石油醚混合溶剂洗脱，然后采用100％乙酸乙酯洗脱，收集100％乙酸乙酯的洗脱液减压浓缩蒸干，再进行减压反相硅胶柱层析，固定相为粒径40μm的反相硅胶，流动相用20-100：80-0的甲醇-水进行洗脱，收集各洗脱组份采用半制备液相进行分离纯化，即得式一、式二或式三所示化合物；其中，采用半制备液相进行分离。8.一种权利要求1所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的应用，其特征在于：所述式一、式二或式三所示化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。9.按权利要求8所述的从土曲霉中获得的azaphilones类化合物的应用，其特征在于：所述式一、式二或式三所示化合物在制备抗肺癌细胞A549、肝癌细胞HepG2或结肠癌细胞HCT116中的应用。

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