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申请/专利权人：武汉爱博泰克生物科技有限公司
摘要：本发明涉及一种构建MLH1基因敲除细胞系的方法，涉及基因工程技术领域。所述方法是采用CRISPRCas9系统来制备MLH1基因敲除细胞系，首先针对MLH1基因设计两个sgRNA序列，利用分子克隆技术构建重组质粒；然后将重组质粒转染至HeLa细胞，通过PCR验证sgRNA的活性后，进行嘌呤霉素药物筛选和单克隆化处理，然后提取单克隆细胞株基因组DNA以及总蛋白，进行MLH1基因水平测序鉴定以及蛋白水平表达检测，获得MLH1基因敲除HeLa细胞系。本发明构建的MLH1基因敲除HeLa细胞系是一种基因稳定遗传的细胞系。本发明提供的方法可用于MLH1基因的定向敲除致使其功能失活，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于MLH1基因功能和相关通路的研究具有重要意义。
主权项：1.一种敲除MLH1基因的sgRNA，包括如SEQIDNO：1所示的sgRNA1以及如SEQIDNO：2所示的sgRNA2。
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百度查询： 武汉爱博泰克生物科技有限公司 一种构建MLH1基因敲除细胞系的方法
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