恭喜安徽大学童望宇获国家专利权
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龙图腾网恭喜安徽大学申请的专利一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN107475169B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:201710851385.6,技术领域涉及:C12N1/21;该发明授权一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法是由童望宇;杨兴旺;曹素丽设计研发完成,并于2017-09-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法在说明书摘要公布了:本发明首次公开了一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法,包括蛋白表达质粒、基因编辑质粒及基因编辑过程。原核生物中该双基因即可分开转录也可位于同一操纵子同时转录,故该方法对原核生物基因组可方便、灵活、有效地进行基因编辑;可望有效地应用于基础生物科学及制药、食品、农业等其它领域。
本发明授权一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法在权利要求书中公布了:1.一种基于I型Cas系统中Cas7和Cas3的原核生物基因编辑方法,其特征在于:具体包括以下步骤:1蛋白表达质粒plasmid-cas7-3的构建根据载体相关序列信息设计用于连接cas基因的引物,通过PCR反应扩增得到线性化克隆载体;根据维吉尼亚链霉菌IBL14中cas7与cas3基因及相关序列信息设计引物,以提取到的维吉尼亚链霉菌IBL14基因组为模板,通过PCR反应扩增得到末端带有与载体有15-25bp重叠区域及含有重叠区的cas7与cas3两个基因,并通过overlapPCR方式将cas7与cas3基因连接起来,最后再将overlapPCR产物通过一步法连接到线性质粒上,得到蛋白表达质粒plasmid-cas7-3;2基因编辑质粒plasmid-tg-DNA的构建根据原核生物靶向基因DNA序列信息设计引物,以提取到的原核生物基因组为模板,通过PCR反应分别扩增得到末端带有限制性内切酶切割位点以及overlapPCR互补序列的靶向基因的上、下游同源臂片段,并用overlapPCR将上、下游同源臂片段连接起来构建基因编辑模板t-DNA,同时根据原核生物靶向基因序列信息设计并化学合成首尾分别含T7启动子和RNA终止子的靶向基因片段g-DNA,将t-DNA与g-DNA连接到质粒上得基因编辑质粒plasmid-tg-DNA;3基因编辑重组子的构建与检验制备原核生物感受态细胞,并将按步骤1得到的pIasmid-cas7-3和按步骤2得到的pIasmid-tg-DNA同时或分别转化到感受态细胞中得到候选的基因编辑的重组子,对重组子直接进行单克隆PCR或提取基因组PCR,并进一步通过基因测序,以确证编辑后的目的重组子;所述的原核生物指大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。
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