恭喜浙江博真生物科技有限公司倪万茂获国家专利权
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龙图腾网恭喜浙江博真生物科技有限公司申请的专利一种基于流式细胞术检测DNA倍体的方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN119178710B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-25发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202411656066.6,技术领域涉及:G01N15/14;该发明授权一种基于流式细胞术检测DNA倍体的方法是由倪万茂;迟妍妍;林鹏程;倪汇熙;倪成根;倪声雷;陈乐芝;朱怡婕;陈鹏贵设计研发完成,并于2024-11-19向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于流式细胞术检测DNA倍体的方法在说明书摘要公布了:本发明涉及DNA倍体检测技术领域,具体地说,涉及一种基于流式细胞术检测DNA倍体的方法。其包括步骤一、试剂准备;步骤二、尿液浓缩;步骤三、细胞清洗;步骤四、加入固定液;步骤五、固定细胞;步骤六、再次清洗;步骤七、染色;步骤八、上机检测;该基于流式细胞术检测DNA倍体的方法中,通过控制试剂用量及储存条件,确保了试剂的有效性和稳定性,在实验过程中,精确的尿液浓缩、细胞清洗、固定及染色步骤,提高了检测的准确性,例如,对不同细胞密度的样本有针对性的处理方法,同时,细胞固定与染色的二次结合,确保了细胞DNA的特异性染色,从而提高了分析DNA倍体性质的准确性。
本发明授权一种基于流式细胞术检测DNA倍体的方法在权利要求书中公布了:1.一种基于流式细胞术检测DNA倍体的方法,其特征在于,由以下步骤组成:S1、试剂准备:尿液、核酸染料、固定液、清洗液,所述核酸染料的主要成分为PI;其中,尿液的用量为50mL;核酸染料的用量为0.6mL,核酸染料在2℃-8℃冷藏保存,避免光照;固定液的用量为1.2mL,固定液在2℃-8℃冷藏保存;清洗液每次的用量为2.5mL;S2、尿液浓缩:将尿液倒入容器中,使用离心浓缩装置进行浓缩,浓缩过程中注意观察尿液的体积变化确保浓缩效果达到要求,浓缩完成后,将上清液吸出弃去,避免扰动底部的细胞沉淀,保留底部的细胞;S3、细胞清洗:在含有细胞沉淀的容器中加入清洗液,使用离心机进行离心工作,离心机的离心速度为245g,离心机的离心时间为6min,离心过程中确保离心机的平衡,再吸取上清液弃去,去除干净,重复上述步骤1-2次;S4、加入固定液:晃动含有细胞沉淀的容器,使细胞分散均匀,再将容器放置在震荡器上,震荡器的震荡频率为110rmin,边振荡边加入固定液,加入固定液的速度为每秒2滴,避免产生气泡;S5、固定细胞:将加入固定液的容器放入冰箱中进行固定,冰箱的温度控制在3℃,放入冰箱中固定的时间为10h;如果需要长期保存,可以将加入固定液的容器放入-20℃冰箱中,能够至少保存一年,在保存过程中,应确保样本密封良好,避免污染;S6、再次清洗:从冰箱中取出容器,重复3-4次S3中的清洗步骤;S7、染色:去除上清液后,将容器放在震荡器上,边振荡容器边缓慢加入核酸染料,确保细胞与染色液充分接触,随后将容器放在室温、避光环境中作用15min,染色过程中使用遮光材料覆盖容器;S8、上机检测:上机检测前,对容器进行振荡,使细胞均匀分布在溶液中,再采用流式细胞仪对细胞进行检测,减少对细胞的损伤,并对数据进行分析,仔细观察并排除碎片、粘连体,准确确定G0G1峰的位置,当细胞密度相对一致时,可参考相邻正常样本进行对比分析;如果密度相差较多,则需另做一管混入正常人全血的样本,以确认G0G1峰位置。
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