恭喜信天翁生物科技(广州)有限公司柯焕春获国家专利权
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龙图腾网恭喜信天翁生物科技(广州)有限公司申请的专利一种基于磁珠法的核酸提取方法获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN118685397B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-03-18发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202410993535.7,技术领域涉及:C12N15/10;该发明授权一种基于磁珠法的核酸提取方法是由柯焕春;严广华设计研发完成,并于2024-07-24向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种基于磁珠法的核酸提取方法在说明书摘要公布了:本发明提供了一种基于磁珠法的核酸提取方法,包括以下步骤:步骤一、磁珠表面修饰;步骤二、磁珠悬浮液制备;步骤三、样品裂解孵育;步骤四、磁吸吸附;步骤五、磁珠洗涤除杂。本发明通过对磁珠进行表面修饰,制得磷脂双分子层磁珠,能够降低核酸与磁珠之间的界面张力,使得核酸更容易与磁珠表面接触并结合。本发明在样品裂解孵育时采用特定成分的裂解液并结合紫光灯照射。通过对磁珠表面修饰、采用特定裂解液裂解孵育,使得本发明的磁珠与核酸特异性结合程度高,只经一次洗涤,免去了洗脱步骤,制得的得到磁珠‑核酸复合物可直接作为后续核酸检测靶标,减少了多次洗涤和洗脱过程中造成的核酸损失和稀释,提高了核酸的浓度和纯度。
本发明授权一种基于磁珠法的核酸提取方法在权利要求书中公布了:1.一种基于磁珠法的核酸提取方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、磁珠表面修饰:在40-60℃下将磁性微球、磷脂酰肌醇、甲醇以80-100rmin震荡混匀60-90s,向上述混合液中缓慢加入3-吗啉丙磺酸、氯化钠并将pH调节至6.8-7.2,反应25-35min,并采用无菌去离子水清洗磁珠微球,得到磷脂双分子层磁珠;所述磁性微球、磷脂酰肌醇、甲醇、3-吗啉丙磺酸、氯化钠质量体积比gml为6-10:3-5:5-7:1-3:1-3;步骤二、磁珠悬浮液制备:将吐温20、聚乙二醇加入到生理盐水中,以100-200rmin搅拌1-3min,加入磷脂双分子层磁珠以20-40rmin震荡混匀10-20s,得到磁珠悬浮液;所述吐温20、聚乙二醇、生理盐水体积比为0.1-0.3:1.5-2.5:90-100,所述磷脂双分子层磁珠在溶液中浓度为10-30mgmL;步骤三、样品裂解孵育:取样品加入到1.5mL的离心试管中,向上述离心试管中加入磁珠混悬液、细胞裂解液以20-40rmin震荡混匀10-20s,在24-26℃并在紫光灯照射下孵育4-6min;所述样品加入量为100-200μL、磁珠混悬液加入量为15-25μL、细胞裂解液加入量为100-200μL;所述的细胞裂解液由质量体积比gmL为3-5:0.5-1.0:1-2:0.4-0.6:1-3的奎宁、蛋白酶K、十二烷基硫酸钠、4,4'-二羟基偶氮苯、氨丁三醇组成;步骤四、磁吸吸附:将上述离心管置于磁力架中,静置1-2min,使磁珠完全被吸附到磁力架上,使用移液枪吸取并弃去上清液;步骤五、磁珠洗涤除杂:向上述离心管中加入洗涤液,20-40rmin震荡混匀20-30s,静置15-25s,使磁珠完全被吸附到磁力架上,使用移液枪吸取并弃去上清液,得到磁珠-核酸复合物,完成核酸提取;所述洗涤液加入量为400-600μL;所述洗涤液由质量体积比gmL为5-10:5-10:70-80的椰油酰胺丙基甜菜碱、尿素、乙醇组成。
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