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摘要：本发明公开了一种筛选和研究调节鸡性别决定和分化关键因素功能的方法，通过构建E0‑E18.5的转录组文库，进一步分析性别决定和分化的关键因素，以期深入揭示性别决定的复杂机制。从转录水平上系统的阐述鸡性别决定过程中全基因组水平上的表达和转录情况，并结合小分子激活剂和抑制剂处理E18.5d性腺，通过观察性腺组织切片的形态学变化，qRT‑PCR检测性别相关基因的表达，ELISA检测性腺的性激素分泌变化，论证相关因素对于性别控制的影响，为鸡的性别决定机制的相关研究提供有力的参考，也为后续进一步验证能量代谢和表观遗传修饰在鸡性别决定和分化过程中的功能奠定基础。
主权项：1.一种筛选和研究调节鸡性别决定和分化关键因素功能的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、筛选E0d囊胚、E3.5-E6.5d的生殖嵴和E18.5d的性腺样品，提取RNA，并进行RNA质量评估，质量合格的RNA备用；S2、对雌雄差异表达基因分析和功能富集，寻找与性别决定和分化有关的相关因素；S3、分离培养雌雄胚胎干细胞ESC和鸡成纤维细胞CEF，验证筛选的相关因素是否与性别决定和分化相关，通过检测雌雄ESC和CEF中的葡萄糖摄取、乳酸生成和组蛋白乙酰化的水平以及ESC的DNA甲基化水平验证糖酵解、组蛋白乙酰化和DNA甲基化在雌雄ESC和CEF是否存在性别偏好；S4、利用糖酵解激活剂、DNA甲基化抑制剂和组蛋白去乙酰化修饰酶抑制剂分别对分离的E18.5d性腺样品处理，随后利用qRT-PCR检测性别相关基因的表达；通过ELISA试剂盒检测雌二醇和睾酮的含量以及制备睾丸和卵巢石蜡切片观察性腺形态的变化。
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百度查询： 扬州大学 一种筛选和研究调节鸡性别决定和分化关键因素功能的方法
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