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摘要：本发明公开了一种诱导黑果腺肋花楸不定根产生花青素的方法，该方法包括如下四步骤：黑果腺肋花楸无菌苗的制备、无菌苗不定根诱导和增殖、不定根悬浮培养、提高不定根悬浮培养的花青素含量。本发明以叶片为外植体“一步式”直接诱导不定根，省去了脱分化和再分化的中间过程；简化了培养操作环节、降低了成本，提高了不定根的诱导效率。同时，以不定根为培养物生产花青素，花青素含量比离体培养的细胞和愈伤组织及果实中更高。本发明通过植物器官培养的手段，建立简便、安全、高效的黑果腺肋花楸不定根培养体系，为不定根由固体、液体放大到生物反应器的培养提供技术参数，为规模化生产提取黑果腺肋花楸花青素提供新途径。

主权项：1.一种诱导黑果腺肋花楸不定根产生花青素的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、黑果腺肋花楸无菌苗的制备：取黑果腺肋花楸的幼嫩枝条作为外植体，剪去叶片，清水冲洗、剪切成茎段，经酒精、升汞溶液浸泡后用无菌水清洗，切成茎芽顶端向上，以每100mL接种4～6根的接种比例接入快繁苗培养基中培养，得到黑果腺肋花楸无菌苗；所述快繁苗培养基是由MS培养基为基础培养基加入0.2mgLNAA，0.8mgL6-BA，30gL蔗糖，7gL琼脂组成的固体培养基；S2、黑果腺肋花楸无菌苗的不定根诱导和增殖：将所得黑果腺肋花楸无菌苗的叶片剪切后以每60mL接种3～5个的接种比例平铺在诱导不定根培养基中，温度为24～26℃，暗培养24～26d后，在光照强度为1500～3000lx，照光时间为12～18hd，蓝红光光照波长比为3～7：1，光照培养7～9d，得到黑果腺肋花楸不定根；所述诱导不定根培养基是由12MS培养基中加入2.5mgLNAA，2mgLIBA，30gL蔗糖，4.5gL琼脂组成的固体培养基；S3、黑果腺肋花楸的不定根悬浮培养：无菌条件下，将所得黑果腺肋花楸不定根剪切成不定根段后，以每120～130mL接种4～6个的接种比例接种于液体培养基悬浮培养；所述液体培养基是由12MS培养基中加入2.5mgLNAA，2mgLIBA，50gL蔗糖组成；S4、提高不定根悬浮培养的花青素含量：无菌条件下，将悬浮培养后的不定根切成0.45～0.55cm的切段，以每1000mL接种15～20个的接种比例转移到新鲜培养基中，灭菌后加入1％乙烯利的磷酸二氢钾水溶液，温度为22～28℃，光照1500～3000lx，光质为蓝红波长比为7:1～3:1的条件下，光照培养25～35d；所述新鲜培养基由12MS、鲜重15gL橘皮提取液，2.5mgLNAA，2mgLIBA，50gL蔗糖组成。

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