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检测RNA的方法 

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摘要:本发明提供一种检测样品中靶标RNA的方法,该方法包括使用发夹探针,所述探针在与其靶标RNA序列结合时解折叠露出3’端区域,所述3’端区域首先能够结合环形或可环化探针并在必要时作为可环化探针连接从而令探针环化的模板,并且能够引发后续环化环形探针的RCA反应。然后,对环化或环形探针进行RCA并检测RCA产物,由此检测靶标RNA。还提供了用于实施这种方法的探针和试剂盒。

主权项:1.一种检测样品中靶标RNA的方法,包括:a将样品与至少一种靶标特异性发夹探针接触,所述探针包括:i第一结构域,其包含与靶标RNA中的靶序列互补的第一区域并且能够与靶标RNA杂交;ii第二结构域,其不能与所述靶标RNA杂交,其包含与同源环形或可环化探针互补的第二区域,并且能够作为RCA反应的引物;其中,所述第二结构域至少部分包含在所述探针的发夹结构之内,从而使得所述第二结构域在从发夹结构中释出之前不能结合同源环形或可环化探针和或引发RCA反应,以及让发夹探针与所述靶标RNA杂交,其中第一结构域与靶序列杂交引起所述发夹结构打开并释出第二结构域;b令样品接触与发夹探针同源的环形或可环化探针,其中,所述环形或可环化探针包含一个或多个与所述第二结构域中互补性的第二区域互补的区域,并将挂锁探针与所述发夹探针在第二结构域杂交,其中,如果所述探针是可环化探针,它包含与所述第二结构域中互补性的第二区域互补的3’端和5’端区域从而两端并排杂交以实现直接或间接地彼此连接;c如果探针是可环化探针,令挂锁探针的末端直接或间接连接来环化可环化探针,由此提供RCA反应模板;d用b中所述环形探针或c中所述RCA反应模板进行RCA反应,其中,由所述第二结构域引发RCA反应;以及e检测RCA反应的产物,其中,所述发夹探针是寡核苷酸,其中所述寡核苷酸至少其5’端区域的部分与所述寡核苷酸3’端的区域互补使得所述寡核苷酸形成发夹结构;并且其中,所述发夹结构从5’至3’包含:i5’端的单链区;ii第一茎链区;iii单链环区;和iv3’端的第二茎链区,其中,包含与靶序列互补的所述第一区域的所述第一结构域包含所述发夹探针5’单链区的全部或部分和所述第一茎链区的至少部分,并且所述单链区起到作为结合所述靶标RNA的立足点的作用;或其中,所述发夹结构从5’至3’包含:i5’端的第一茎链区;ii单链环区;和iii3’端的第二茎链区,其中,所述第一结构域位于所述发夹结构的所述环区,且所述第二结构域位于所述发夹结构的所述第二茎链区。

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