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申请/专利权人：中农威特生物科技股份有限公司

摘要：本发明涉及一种微量法测定口蹄疫灭活疫苗聚乙二醇6000残留量的方法，该方法包括以下步骤：⑴采用正戊醇对口蹄疫灭活疫苗样品进行破乳，即得水相抗原；水相抗原用三氯乙烯和去离子水进行除脂和稀释处理后，即得处理后的水相抗原；⑵精密量取10μgml~90μgml聚乙二醇6000系列对照品溶液和处理后的水相抗原，加高氯酸溶液混匀，室温放置15分钟后离心；取离心后各浓度聚乙二醇6000系列对照品溶液和处理后的水相抗原的上清液加至96孔平底酶标板中，加氯化钡溶液和碘溶液混匀，室温孵育后放入酶标仪读取各OD值；⑶建立直线回归方程；⑷计算口蹄疫灭活疫苗中的聚乙二醇6000残留量。本发明快速、高效、准确。

主权项：1.一种微量法测定口蹄疫灭活疫苗聚乙二醇6000残留量的方法，包括以下步骤：⑴采用正戊醇对口蹄疫灭活疫苗样品进行破乳，即得水相抗原；所述水相抗原用三氯乙烯和去离子水进行除脂和稀释处理后，即得处理后的水相抗原；⑵精密量取10μgml、20μgml、30μgml、40μgml、50μgml、60μgml、70μgml、80μgml、90μgml聚乙二醇6000系列对照品溶液和处理后的水相抗原各200µl至2ml离心管中，每管加入浓度为0.5molL的高氯酸溶液1.0ml，混匀，室温放置15分钟，4000rpm离心10分钟；取离心后各浓度聚乙二醇6000系列对照品溶液和处理后的水相抗原的上清液200μl加至96孔平底酶标板中，每孔用多通道移液器迅速加入质量浓度为5%的氯化钡溶液50µl和浓度为0.1molL的碘溶液25µl，混匀，室温孵育15分钟；平底酶标板放入酶标仪，在535nm波长处读取各OD值；⑶根据10~90μgml系列聚乙二醇6000对照品液的浓度及其535nmOD值，使用EXCEL以535nmOD值为X轴，以聚乙二醇6000对照品浓度为Y轴，建立直线回归方程；⑷将处理后的水相抗原的535nmOD值代入直线回归方程计算，即得其聚乙二醇6000残留量，再按下式计算口蹄疫灭活疫苗中的聚乙二醇6000残留量： ；式中：c为口蹄疫灭活疫苗聚乙二醇6000残留量；w为水相抗原聚乙二醇6000残留量；k为水相抗原的稀释倍数。

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