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申请/专利权人：上海交通大学医学院附属瑞金医院
摘要：本发明涉及动物模型领域，具体是一种COL4A3突变动物模型的制备方法。本发明首先在临床遗传性肾病家系中，通过全外显子组测序发现了致病性COL4A3p.G799R点突变位点。进一步通过比对小鼠和人类COL4A3基因序列，我们发现小鼠COL4A3基因第799位氨基酸与人类COL4A3基因801位点同源，通过CrisprCas9技术构建了COL4A3p.G799R点突变小鼠。本发明模型小鼠的临床表型和病理结果都能有效模拟COL4A3突变相关临床疾病的自然进展，可用于相关临床研究和药物开发。
主权项：1.一种COL4A3p.G799R点突变动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：确定小鼠COL4A3基因的突变位点为COL4A3p.G799R；通过体外转录的方式，获得Cas9mRNA和gRNA，gRNA的序列如SEQIDNo.1、SEQIDNo.2或SEQIDNo.3所示；通过In-Fusioncloning的方法构建同源重组载体donorvector；将Cas9mRNA、gRNA和donorvector显微注射到C57BL6J小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠；步骤二：小鼠基因型鉴定和模型将注射后的受精卵移植到假孕母鼠中，20天左右出生的小鼠为F0代小鼠；通过PCR扩增及测序对其进行基因型鉴定，获得目标COL4A3p.G799R点突变小鼠；并将C57BL6背景COL4A3p.G799R点突变小鼠杂交为129S2Sv背景肾病易感性小鼠；步骤四：F1代小鼠获得及基因型鉴定F0代阳性小鼠与野生型C57BL6J小鼠交配，繁育获得F1代小鼠，通过PCR鉴定及测序对其进行基因型鉴定；步骤五：对F2子代进行筛选并获得其中的纯合突变小鼠，即为本发明所要制备的COL4A3p.G799R点突变动物模型。
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权利要求：
百度查询： 上海交通大学医学院附属瑞金医院 一种COL4A3突变动物模型的制备方法
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