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申请/专利权人：杭州清大科瑞生物科技有限公司

摘要：本发明公开了一种改良的高效的大鼠脐带间充质干细胞培养、扩增方法，涉及细胞培养技术领域，本发明包括以下步骤：S1、配置rUCMSCs完全培养基：89％DMEM低糖培养基+10％FBS+1％青链霉素+1mmolLL‑谷氨酰胺；S2、腹腔注射5ml多聚甲醛麻醉的大鼠，处死后用75％乙醇浸泡；S3、腹部备皮后，用无菌组织剪剪开大鼠腹腔，见子宫为狭长葫芦形伸向2侧，每侧约7‑8个胚胎，剪开子宫壁和羊膜，紧贴胎鼠脐部和胎盘剪断脐带；S4、将S3中得到的脐带泡入含1％青链霉素的PBS溶液中，洗净管腔内的血液后，放入提前准备好的75％酒精溶液中短暂浸泡后快速取出。本发明提供的培养方法，所得到的大鼠脐带间充质干细胞数量多、活性好，并且本发明组成配方简单，培养效果理想，具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种改良的高效的大鼠脐带间充质干细胞培养、扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、配置rUCMSCs完全培养基：89％DMEM低糖培养基+10％FBS+1％青链霉素+1mmolLL-谷氨酰胺；S2、腹腔注射5ml多聚甲醛麻醉的大鼠，处死后用75％乙醇浸泡；S3、腹部备皮后，用无菌组织剪剪开大鼠腹腔，见子宫为狭长葫芦形伸向2侧，每侧约7-8个胚胎，剪开子宫壁和羊膜，紧贴胎鼠脐部和胎盘剪断脐带；S4、将S3中得到的脐带泡入含1％青链霉素的PBS溶液中，洗净管腔内的血液后，放入提前准备好的75％酒精溶液中短暂浸泡后快速取出，再将其泡入洁净的含1％青链霉素的PBS溶液中清洗；S5、用无菌眼科剪将洗净后的脐带尽量剪碎，组织块大小约1mm2左右，均匀铺于10cm无菌细胞培养皿内，间隔约为0.5cm左右，将培养皿倒置放于37℃细胞培养箱中10-30min，待组织粘附后，缓慢加入适量完全培养基，没过组织块即可，24h后补足培养基；S6、培养48h后初次换液，除去未贴壁的细胞和死细胞，此后2-3天换液一次，待细胞融合度到80％时，去除组织块并使用步骤S5内的铺板方式重新贴壁组织块，培养皿则用0.25％胰酶-EDTA进行消化传代；S7、消化细胞后，再使用冻存液重悬消化后的细胞，并将细胞于-80℃液氮冻存；传至P3代即可进行细胞鉴定。

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