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申请/专利权人：天津科技大学
摘要：本发明公开了一种基于荧光淬灭技术的碱性蛋白酶的活性检测方法，本发明以Dabcyl‑KTXXV↓L↓QXXF↓RXM↓E‑Edans为模版构建了3200000条多肽序列，该模板的N端基团Dabcyl是一种荧光淬灭剂，C端Edans是一种荧光基团，氨基酸序列采用单字母表示，X为20种常见的氨基酸中的任意一种。然后经过分子模拟方法筛选确定了Dabcyl‑KTSAVLQSGFRKME‑Edans为最优的荧光底物。将碱性蛋白酶和荧光底物共孵育后，检测他们在510nm处的荧光强度，并据此来判断碱性蛋白酶的酶活。本发明的检测最低限为2.8UmL，与现有方法相比更为简单快速，可以提高检测效率、降低检测成本，在碱性蛋白酶突变株的高通量筛选中具有较好的应用前景。
主权项：1.一种基于荧光淬灭技术的碱性蛋白酶的活性检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1制备待测样品、荧光底物及缓冲液；2在避光96孔板中加入缓冲液及荧光底物，封闭孔板预热，随后加入待测样品进行反应，测定其荧光强度；对照组以缓冲溶液替代待测样品；3检测反应体系在510nm处的荧光强度，根据荧光值的强弱比较待测样品中碱性蛋白酶的活性。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津科技大学 一种基于荧光淬灭技术的碱性蛋白酶活性检测方法和应用
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