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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明提供一种在胡柚果实汁胞中实现基因瞬时表达的方法，逐个剥离胡柚果实汁胞并对其进行农杆菌侵染液浸泡的方式，在柑橘果肉组织中实现基因瞬时表达，步骤如下：1胡柚果实的选择；2农杆菌侵染液的制备3汁胞的准备与侵染；4汁胞取样和基因表达量检测。本发明操作简便、试验周期短、实验成本低、转化效果好，弥补了稳定转化体系难以获得柑橘果实的不足，可快速高效地进行基因功能在柑橘果实内的同源验证。
主权项：1.一种在胡柚果实汁胞中实现基因瞬时表达的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：1胡柚果实的选择：选择大小、着色、成熟度一致的绿熟期或商业采收期胡柚果实，以汁胞外观饱满、易分离且不易破损时最佳；2农杆菌侵染液的制备：使用同源重组法将目标基因构建于pGreenII002962-SK表达载体，将获得的含有目的基因的重组质粒、空质粒分别电转至农杆菌GV3101::pSoup，空质粒作为对照，扩大培养所述农杆菌，并用渗透液重悬至OD600＝0.75；3汁胞的准备与侵染：对步骤1中选取的果实进行汁胞分离，取外观饱满未破损的汁胞浸泡于装有30ml步骤2的农杆菌侵染液中，轻柔颠倒混匀5min后静置。静置侵染20-30min后倒出农杆菌侵染液，加入无菌水轻柔摇晃洗涤，接着倒出无菌水，将汁胞倒在滤纸上，用滤纸吸干汁胞表面的水珠，最后夹取晾干的汁胞放于MS固体培养基上避光培养；4汁胞取样和基因表达量检测：取步骤3侵染后的汁胞避光培养6-8天，去除失水皱缩、发霉的汁胞后进行液氮冻存，磨样成粉后进行RNA提取、逆转录和实时荧光定量PCR检测确认基因过表达水平，并对相应表型进行分析。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 一种在胡柚果实汁胞中实现基因瞬时表达的方法
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