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申请/专利权人：无锡市人民医院;江南大学

摘要：本文公开了一种检测中性粒细胞胞外诱捕网、评估血栓风险的系统。本发明通过对外周血样的显微观测，根据细胞的形态特征鉴定出中性粒细胞胞外诱捕网和中性分叶核粒细胞，并通过定量分析中性粒细胞胞外诱捕网的比率来评估血栓形成的严重程度，甚至死亡风险。本文公开的方法可以是半自动化，操作步骤少，耗时短，在10min内快速得到定量结果；本法稳定程度高，对各阶段的NETs都有准确的鉴别，可以更准确地评估患者的病情。

主权项：1.一种基于检测中性粒细胞胞外诱捕网评估血栓风险的系统，其特征在于，所述系统包括检测装置与评估装置，其中检测装置用于处理全血样本，制备血涂片，获取血涂片的光学显微图像；评估装置用于统计显微图像内中性粒细胞和中性粒细胞胞外诱捕网数量，基于样本内中性粒细胞胞外诱捕网与中性粒细胞的比率，评估样本血栓的风险；所述检测装置包括如下模块：样本收集模块，将全血样本置于抗凝管中进行抗凝处理，并混匀全血；其中，添加18.0％~23.0％WV的牛血清白蛋白进行处理，其中，牛血清白蛋白和抗凝全血以体积比0.8~1.2：4~6混匀，静置处理5~10min；及，制片染色模块，将全血制成血涂片，并对血涂片进行刘氏染色；其中，制片染色模块中染色的步骤为：S1、加LiuASolution1~2mL；S2、将LiuBSolution滴加于LiuASolution液上面，使两液充分混合，LiuBSolution的滴加量为LiuASolution的1.5~3倍，染色20~40秒；S3、水洗、干燥、镜检；及，图片采集模块，获取血样白细胞细胞形态光学显微图像；所述评估装置包括如下模块：信息处理模块，根据细胞形态统计显微图像中白细胞内的中性杆状粒细胞个数Ns、中性分叶核粒细胞个数Nn和中性粒细胞胞外诱捕网的个数Nnets；其中，信息处理模块中是统计每100个白细胞中的中性杆状粒细胞个数Ns、中性分叶核粒细胞个数Nn和中性粒细胞胞外诱捕网的个数Nnets；其中，细胞形态呈杆状的中性粒细胞计为中性杆状粒细胞；细胞形态为分叶核的中性粒细胞计为中性分叶核粒细胞；细胞形态为如下状态中的一种计为中性粒细胞胞外诱捕网：1分叶核肿胀，细胞胞体肿大、结构模糊、边缘不清晰；2分叶核肿胀加剧，伴有核溶解和核碎裂，核染色质结构不清、着色浅淡、开始喷发，细胞核轮廓模糊；3细胞核膜破碎、核解离，释放纤维样染色体物质到细胞质中，中性粒细胞结构破坏；4细胞核膜破碎、核解离，细胞喷射形成染色体网状结构；5细胞胞膜破裂，释放出颗粒物，并形成染色体网状结构；及，数据处理模块，计算中性粒细胞胞外诱捕网比率R，比率R的计算公式如下： 及，结果判定模块，比较R与安全阈值Rθ；R小于Rθ，则认为血栓致命风险较低；R大于Rθ则认为血栓致命风险较大；其中，结果判定模块中安全阈值Rθ由医学实际统计模型得出，所述医学实际统计模型构建方法如下：S1、收集不同组分的数据样本，根据四分位差方法排除异常值；S2、通过Kolmogorov-Smirnovtest确定每组数据满足的概率分布；S3、在95％置信水平下计算每组的置信区间，对照组CI0a0，b0；轻症组CI1a1，b1，中症组CI2a2，b2；重症组CI3a3，b3；危症组CI4a4，b4；死亡组CI5a5，b5；S4、对各组置信区间比较，小于等于b2则被认为是安全参考范围，即R00，b2；大于b2且小于等于a5则被认为是低风险区，即R1b2，a5；大于a5则被认为是高风险区，即R3a5，∞，即Rθ为b2，a5；所述Rθ为（32.5％，50.4％）。

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