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申请/专利权人：河北科技大学
摘要：本发明公开了一种作用于谷氨酸结合位点的GluN2B单域抗体制备方法，包括以下步骤：GluN2B谷氨酸结合结构域的表达及鉴定、GluN2B单域抗体噬菌体文库的构建、GluN2B单域抗体的富集与筛选和GluN2B单域抗体的表达、纯化及鉴定。本文以重组GluN2B谷氨酸结合结构域蛋白为抗原，构建作用于谷氨酸结合位点的GluN2B单域抗体，可为开发高选择性单域抗体类GluN2B拮抗剂提供方法学基础。
主权项：1.一种GluN2B单克隆抗体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1：构建载有GluN2B谷氨酸结合结构域序列基因的pcDNA3.1-His-S1-GT-S2质粒，将该重组质粒导入哺乳动物HEK293细胞中表达目的蛋白，通过镍亲和层析柱纯化获得S1-GT-S2蛋白；步骤S2：用S1-GT-S2蛋白免疫羊驼，提取RNA，反转录之后通过巢式PCR法扩增GluN2B单域抗体基因序列，将该基因与pComb3X载体连接后转化到大肠杆菌XL1-Blue中，构建GluN2B单域抗体噬菌体展示文库；步骤S3：使用S1-GT-S2蛋白对噬菌体文库进行富集与筛选，通过酶联免疫吸附测定（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）鉴定出阳性菌株；步骤S4：将阳性克隆基因连接至真核表达载体pcDNA3.1，转染至HEK293细胞中进行单域抗体的表达和纯化，并对获得的GluN2B特异性单域抗体进行亲和活性检测。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 河北科技大学 一种GluN2B单域抗体制备方法
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