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申请/专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种绵羊脂尾单细胞转录组图谱及其构建方法与应用。本发明图谱构建方法包括：同时采集绵羊尾脂沉积发生前后不同胚胎发育阶段尾组织样品，制备为单细胞悬液；捕获单个细胞，进行细胞裂解、cDNA合成、cDNA文库质检，构建测序文库，进行上机测序；与参考基因组比对，获得原始比对数据和基因在各细胞表达量矩阵；基于各细胞捕获的mRNA数量和线粒体基因比例进行细胞质控；移除少于10个细胞中表达的基因；进行双细胞预测及过滤，合并质控后的各时期样本获得基因‑细胞表达矩阵；进行数据预处理；基于不同细胞类型已知标记基因进行细胞注释。本发明为单细胞转录组测序技术在脂肪生成相关研究领域的应用具有重要借鉴意义。

主权项：1.一种构建绵羊脂尾单细胞转录组图谱的方法，其特征在于，包括：1同时采集绵羊尾脂沉积发生前后不同胚胎发育阶段尾组织样品，分别制备为单细胞悬液；2捕获所述单细胞悬液中的单个细胞，进行细胞裂解、cDNA合成、cDNA文库质检、片段化和末端修复后，构建测序文库，进行上机测序获得原始测试数据；3将所述原始测试数据与参考基因组比对，获得原始比对数据和基因在各细胞表达量矩阵；4基于各细胞捕获的mRNA数量和线粒体基因比例进行细胞质控；移除在少于10个细胞中表达的基因；进行双细胞预测及过滤，获得质控后的各时期样本，将所述质控后的各时期样本进行合并，获得质控后的基因-细胞表达矩阵用于下游分析；5对质控后的所述基因-细胞表达矩阵进行数据预处理；6基于不同细胞类型已知标记基因进行细胞注释，构建获得绵羊脂尾单细胞转录组图谱；步骤1中，通过分阶段同期发情和人工授精处理，调整发情时间和配种时间，保证同时采集绵羊尾脂沉积发生前后不同胚胎发育阶段尾组织样品；各母本配种时均使用同一个父本；同期发情和人工授精处理方法包括：阴道埋植孕激素海绵栓，11d后取出；肌肉注射1ml浓度为0.1mgml的氯前列醇注射液；2d后用试情公羊进行发情鉴定；采集种公羊精液，以维生素B12注射液稀释精液并镜检精子活力，所述维生素B12注射液与精液的体积比为3：1，镜检精子活力大于50％后，对发情母羊进行人工授精，共授精3次，每12h一次；配种30d后，使用B超仪进行发情鉴定；所述不同胚胎发育阶段指妊娠50、55、60、63、66、69、72、75和80日龄；步骤1中，制备单细胞悬液时，使用胶原酶Ⅳ、DNA酶和胰蛋白酶消化组织，并使用红细胞裂解液裂解红细胞，获得单细胞悬液；所述单细胞悬液中细胞浓度为500-2000个μl，细胞总数106个，细胞活率86％。

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