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一种通过靶向敲除基因建立的早衰细胞模型及其sgRNA、构建方法和应用 

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申请/专利权人:浙江大学

摘要:本公开提供一种通过靶向敲除基因建立的早衰细胞模型及其sgRNA、构建方法和应用,采用双sgRNA靶向敲除法,在GDF11基因的第二个外显子以及其上游的内含子序列中同时产生两个DNA双链断裂点,针对GDF11基因的第二个外显子上的两个位点进行切割,敲除效率高,同时鉴定手段简单且鉴定效率高,只需PCR扩增和电泳即可确定是否敲除成功,大大降低了敲除后的鉴定成本;建立了GDF11基因敲除的神经母瘤细胞系即Neuro‑2a细胞系,为探究内源性GDF11的生物学功能提供了体外细胞模型,基于实验结果首次发现敲除GDF11基因的Neuro‑2a细胞系具有衰老表征,为衰老领域的研究提供了研究工具,促进抗衰老课题的研究,为延缓衰老提供研究基础。

主权项:1.一种敲除GDF11基因的Neuro-2a细胞系在制备神经元细胞衰老的疾病模型中的应用,其特征在于,包括利用CRISPRCas9系统敲除Neuro-2a细胞系的GDF11基因,所述CRISPRCas9系统使用靶向敲除GDF11基因的双sgRNA;其中,所述双sgRNA,包括GDF11-sgRNA1和GDF11-sgRNA2;所述GDF11-sgRNA1的靶向序列为:GCCGAAGGTACACCCACAGT,所述GDF11-sgRNA2的靶向序列为:GAACCGGGTAAGGTAGCTTG。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 浙江大学 一种通过靶向敲除基因建立的早衰细胞模型及其sgRNA、构建方法和应用

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