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一种EBER和CD3全自动双染色的检测方法及其应用 

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申请/专利权人:杭州百殷生物科技有限公司

摘要:本发明涉及病毒检测技术领域,具体为一种EBER和CD3全自动双染色的检测方法及其应用,包括以下检测步骤,S1、脱蜡;S2、蛋白酶修复;S3、DAB显色;S4、碱性修复;S5、快红染色;S6、复染。分别通过酶和碱两次修复过程将EBER原位杂交及CD3免疫组化染色有机结合,进行顺式双染色,可以在同一张切片上清晰地观察到EBV阳性细胞及CD3的染色结果,判断EBV阳性细胞的特性,该方法特异性好、阳性信号强,有利于病理诊断医师进行组织学判读,做出明确诊断。

主权项:1.一种EBER和CD3全自动双染色的检测方法,其特征在于:包括以下检测步骤,S1、脱蜡;加热块加热至80℃,持续2分钟;脱蜡液80℃孵育1分钟,重复4次;开启散热,酒精孵育1分钟,重复4次;开启散热,TBS清洗液清洗1分钟,重复4次;S2、蛋白酶修复;蛋白酶修复液37℃条件下孵育12~20分钟;开启散热,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;S3、DAB显色;过氧化物酶阻断剂EBER孵育8分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;EBER探针EBER孵育120分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;地高辛一抗EBER孵育30分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;二抗增强剂EBER孵育30分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;二抗EBER孵育30分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次,配置DAB显色液;DAB显色液孵育5分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;S4、二次修复;抗原修复液清洗1分钟,重复2次;抗原修复液在37℃条件下孵育20分钟;开启散热20分钟;抗原修复液散热2分钟,重复2次;TBS清洗液散热2分钟,重复5次;S5、快红染色;一抗孵育30分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;二抗增强剂孵育30分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;二抗孵育30分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;配置快红染色液;快红染色液孵育10分钟,TBS清洗液清洗1分钟,重复5次;S6、复染;将切片浸泡苏木素溶液中10~20秒,纯水清洗数秒,返蓝液返蓝1~5秒,纯水清洗后,烘干,水性封片剂封片。

全文数据:

权利要求:

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