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申请/专利权人：国科温州科技发展有限公司
摘要：小鼠链球菌性乳腺炎模型构建方法，利用无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌和实验小鼠，通过哺乳期的母鼠乳腺的乳腺导管将三种链球菌注射液注入乳腺组织内进行感染定植，通过检测乳腺组织的外观变化、三种链球菌细菌载量、炎症因子丰度、病理变化综合评估，成功在小鼠上构建了链球菌性乳腺炎模型，构建过程最大程度的模拟临床实际奶牛乳腺炎疾病的发生。本发明建立的无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌性小鼠乳腺炎模型，其操作便捷且成本低。为奶牛链球菌性乳腺炎的疾病研究及相应治疗方法的开发提供实验动物模型。
主权项：1.小鼠链球菌性乳腺炎模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、链球菌注射液的制备：用无菌磷酸盐缓冲液分别悬浮过夜培养的无乳链球菌、停乳链球菌或乳房链球菌中的一种得到细菌悬液注射液，所述的无乳链球菌、停乳链球菌或乳房链球菌的细菌悬液状态浓度分别为5×103CFU50μL、104CFU50μL、5×104CFU50μL；S2、实验小鼠的选择及实验前期准备：所述的小鼠种类是BALBc，并以公母1：2的比例配种，待母鼠怀孕分娩后哺乳14天时进行实验，腹膜注射将实验小鼠麻醉，仰躺保定，从上数至下的第四对乳腺，用剪刀减去乳头0.5mm；S3、实验小鼠乳腺组织攻菌：注射器分别吸取无乳链球菌、停乳链球菌及乳房链球菌悬液注射液50μL，通过母鼠第四对乳腺导管缓慢注入乳腺组织；S4、实验小鼠的乳腺组织腺组织处理：攻菌48h后使用CO2窒息安乐处死小鼠，无菌摘取第四对乳腺组织，取部分乳腺组织称制作成乳腺组织研磨液，取12乳腺组织研磨液离心取上清，制作成乳腺组织研磨上清液，取部分乳腺组织用4%多聚甲醛固定；S5、实验小鼠乳腺组织结检测：肉眼观察无乳链球菌、停乳链球菌或乳房链球菌的攻菌对实验小鼠第四对乳腺组织的外观区别，通过平板培养基分离培养乳腺组织研磨液中的链球菌检测乳腺组织中链球菌定植情况；通过酶联免疫吸附试验检测乳腺组织研磨上清液中的炎症因子INF-α和IL-6含量检测乳腺炎组织炎性变化，通过将实验小鼠乳腺组织制成切片经HE染色，用显微镜观察乳腺组织的病理变化。
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