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申请/专利权人：华中农业大学
摘要：本发明公开了一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法，该方法包含：将含有TRV2‑CpCHLD载体的重组质粒转入农杆菌GV3101中，用含有卡那霉素和利福平的LB液体培养基分别对含有TRV2‑CpCHLD或TRV1的农杆菌进行过夜活化培养，之后离心收集菌体，弃上清液后重悬菌体；将TRV2‑CpCHLD重悬菌液与TRV1重悬菌液混合，于室温、避光下静置，最后注入蜡梅子叶、幼叶和成熟叶的背面刻伤处。本发明解决了现有技术未曾在蜡梅中实现VIGS高效基因沉默的问题，首次实现VIGS技术在蜡梅中的应用，用于注射侵染的最佳器官是蜡梅子叶，用于注射侵染的农杆菌菌液最佳OD600为1.2～1.5。
主权项：1.一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法，其特征在于，该方法包含：1将TRV2-CpCHLD载体转入大肠杆菌的感受态中，挑取阳性菌株，经PCR鉴定，提取含有TRV2-CpCHLD载体的重组质粒，将含有TRV2-CpCHLD载体的重组质粒转入农杆菌GV3101中，得到含有TRV2-CpCHLD的农杆菌GV3101；2将含有TRV1的农杆菌GV3101和TRV2-CpCHLD的农杆菌GV3101分别接种到含卡那霉素和利福平的LB液体培养基上，于28℃、200r·min-1下活化培养，于20℃离心收集菌体，弃上清液后用重悬液重悬菌体，分别得到含有TRV1的重悬菌液和含有TRV2-CpCHLD的重悬菌液；3将含有TRV1的重悬菌液和含有TRV2-CpCHLD的重悬菌液混合，于室温、避光下静置得到注射液；在蜡梅的子叶、幼叶和成熟叶的背面划出伤口，在伤口处将注射液注入，先置于避光、室温下培养，再置于20～25℃培养。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 华中农业大学 一种利用子叶在蜡梅中进行VIGS基因沉默的方法
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