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申请/专利权人：青岛农业大学

摘要：本发明涉及一种检测LChV‑1病毒的胶体金试纸条及其制备方法，属于大樱桃病毒病检测领域。所述胶体金试纸条包括PVC板，依次搭接有样品垫，结合垫，硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫是结合有胶体金颗粒标记的兔LChV‑1病毒多克隆抗体的玻璃纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依据样品流动方向依次设置有检测线和质检线，所述检测线包被有LChV‑1病毒重组蛋白，所述质检线包被羊抗兔IgG抗体。本发明制备的胶体金试纸条在田间可以快速检测LChV‑1病毒，且特异性好，灵敏度高。

主权项：1.一种检测LChV-1病毒的胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条包括PVC板，依次搭接有样品垫，结合垫，硝酸纤维素膜和吸水纸；所述结合垫是结合有胶体金颗粒标记的兔LChV-1病毒多克隆抗体的玻璃纤维素膜；所述硝酸纤维素膜上依据样品流动方向依次设置有检测线和质检线，所述检测线包被有LChV-1病毒重组蛋白，所述质检线包被羊抗兔IgG抗体；所述LChV-1病毒重组蛋白核苷酸序列如SEQNo.1所示；所述LChV-1病毒重组蛋白的制备方法，步骤如下：设计带有酶切位点的特异性引物用于构建原核表达载体，引物序列如下：LChV-1-CP-BamHI-12061-F：AAGGATCCATGGCGAATTTAGCTTTCACGAAA；LChV-1-CP-NotⅠ-13275-R：TTGCGGCCGCTTAATTTCTTCTACCGCGACGTGG；成功构建PE-HIS-LChV-1-CP原核表达载体；将PE-HIS-LChV-1-CP转入大肠杆菌表达株系的Rosetta细胞中，加IPTG诱导表达获得LChV-1病毒CP的重组蛋白；并过镍柱纯化，经得到纯化后的LChV-1病毒重组蛋白；利用纯化后的LChV-1病毒重组蛋白通过常规方法制备兔LChV-1病毒多克隆抗体；所述胶体金颗粒标记的兔LChV-1病毒多克隆抗体的制备，步骤如下：调节胶体金溶液pH至7.2，将兔LChV-1病毒多克隆抗体加入胶体金溶液中，其中兔LChV-1病毒多克隆抗体的浓度为0.24mgµL；涡旋震荡，室温放置1h后加入终浓度为1%的BSA，震荡，室温静置1h；13000rpm，4℃离心25min，弃上清，加浓度为2%的BSA重悬沉淀，加TBS重悬沉淀，获得胶体金颗粒标记的兔LChV-1病毒多克隆抗体。

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