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申请/专利权人：成都海关技术中心;中国检验检疫科学研究院

摘要：本发明公开了鉴定珍稀肉苁蓉及其混伪品的引物组合物、方法及试剂盒，属于肉苁蓉鉴别技术领域。本发明解决了建立肉苁蓉属多目标快速鉴定的方法的问题。本发明通过基因组比对，寻找珍稀肉苁蓉及肉苁蓉伪混品的特异性靶标位点，并设计对应引物和SNP位点，获得引物组，并利用该引物组对疑似肉苁蓉组织提取的DNA进行检测，根据获得的产物质量数及SNP位点进行珍稀肉苁蓉及其它肉苁蓉伪混品的精准鉴定；一方面，可一次性对珍稀肉苁蓉及肉苁蓉伪混品同时进行定性检测，从而珍稀肉苁蓉的快速筛查；另一方面，还能鉴定出管花肉苁蓉、盐生肉苁蓉、沙苁蓉、黄肉苁蓉、莫桑比克肉苁蓉、脊肉苁蓉和玫瑰肉苁蓉，为肉苁蓉属植物的生态分布提供依据。

主权项：1.鉴定珍稀肉苁蓉及其混伪品的引物组合物，其特征在于：由两组用于扩增珍稀肉苁蓉靶标及其混伪品基因位点的扩增引物组和用于实现单碱基延伸的延伸引物组组成：第一组扩增引物组和第一组延伸引物组如下：用于扩增珍稀肉苁蓉第一个靶标基因位点的CdITS-2扩增引物和相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:1所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:2所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:3所示；所述CdITS-2延伸引物对应的SNP为C；用于扩增管花肉苁蓉第二个靶标基因位点的Ct-2扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:4所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:5所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:6所示；用于扩增盐生肉苁蓉第一个靶标基因位点的Csa-1扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:7所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:8所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:9所示；用于扩增盐生肉苁蓉第二个靶标基因位点的Csa-2扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:10所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:11所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:12所示；用于扩增沙苁蓉第二个靶标基因位点的Csi-2扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:13所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:14所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:15所示；用于扩增沙苁蓉第一个靶标基因位点的Csi-1扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:16所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:17所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:18所示；用于扩增黄肉苁蓉靶标基因位点的CpITS扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:19所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:20所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:21所示；用于扩增莫桑比克肉苁蓉靶标基因位点的CaITS扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:22所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:23所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:24所示；用于扩增玫瑰肉苁蓉靶标基因位点的CroITS扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:25所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:26所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:27所示；其中，所述Ct-2延伸引物对应的SNP为A；所述Csi-2延伸引物对应的SNP为C；所述CpITS延伸引物对应的SNP为T；所述CaITS延伸引物对应的SNP为C；所述CroITS延伸引物对应的SNP为T；所述Csa-1延伸引物对应的SNP为A；所述Csa-2延伸引物对应的SNP为C；所述Csi-1延伸引物对应的SNP为G；第二组扩增引物组和第二组延伸引物组如下：用于扩增珍稀肉苁蓉第二个靶标基因位点的Cd-2扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:28所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:29所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:30所示；用于扩增珍稀肉苁蓉第三个靶标基因位点的Cd-1扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:31所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:32所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:33所示；用于扩增珍稀肉苁蓉第四个靶标基因位点的CdITS-1扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:34所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:35所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:36所示；其中，所述Cd-2延伸引物的对应SNP为A；所述Cd-1延伸引物的对应SNP为A；所述CdITS-1延伸引物的对应SNP为T；用于扩增管花肉苁蓉第一个靶标基因位点的Ct-1扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:37所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:38所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:39所示；用于扩增脊肉苁蓉靶标基因位点的CriITS扩增引物及相应的延伸引物：正向引物：其碱基序列如SEQIDNO:40所示，反向引物：其碱基序列如SEQIDNO:41所示；延伸引物：其碱基序列如SEQIDNO:42所示；其中，所述CriITS延伸引物对应的SNP为A；所述Ct-1延伸引物对应的SNP为A。

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