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申请/专利权人：广州达博生物制品有限公司
摘要：本发明提供一种多靶点溶瘤腺病毒的构建方法及应用，属于基因工程药物领域。本发明通过在穿梭载体插入hTERT启动子、E1A基因区、55kDE1B相关片段和p53基因构建得到改造穿梭载体，对E1和E3区缺失的腺病毒的骨架载体进行改造得到改造腺病毒载体，并将改造穿梭载体和改造腺病毒载体共转染细胞后表达获得多靶点溶瘤腺病毒。本发明的多靶点溶瘤病毒对肿瘤细胞杀伤力强，且对正常细胞安全性高，能够在肿瘤模型小鼠体内有效的抑制肿瘤的生长，有很好的临床应用前景。
主权项：1.一种多靶点溶瘤腺病毒的构建方法，其特征在于，包括：（1）在穿梭载体插入hTERT启动子、E1A基因区、55kDE1B相关片段和p53基因构建得到改造穿梭载体，其中：所述E1A基因区为缺少CR2区片段的E1A基因；所述55kDE1B相关片段包括缺失19kD片段的E1B基因和E1B基因启动子区，所述的缺失19kD片段的E1B基因为SEQIDNO.1；（2）对E1和E3区缺失的腺病毒的骨架载体进行改造得到改造腺病毒载体：将Ad5腺病毒Fiber分子上的Knob和Shaft序列替换成Ad35型腺病毒上的Knob和Shaft序列；并将hGM-CSF基因插入骨架载体的E3缺失区；（3）改造穿梭载体和改造腺病毒载体共转染细胞后表达；所述的步骤（1）中，所述的hTERT启动子为SEQIDNO.2；所述的E1A基因区为SEQIDNO.6；所述的p53基因区序列为SEQIDNO.5；所述的步骤（1）中穿梭载体为pDC316；所述的步骤（2）中Ad35型腺病毒上的Knob和Shaft序列为SEQIDNO.7；所述的步骤（2）中hGM-CSF基因为SEQIDNO.8。
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