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申请/专利权人：苏州丹罗医药有限公司
摘要：本申请提供了一种CAR‑NK细胞培养的滋养层细胞、制备方法及病毒载体质粒，涉及免疫细胞技术领域。所述CAR‑NK滋养层细胞表达膜绑定的细胞因子mbIL15和mbIL21，共刺激信号CD137L，以及CAR结构中scFV结构能够识别的靶点序列。制备方法包括：构建重组慢病毒载体质粒或逆转录病毒载体质粒；重组慢病毒或重组逆转录病毒制备；重组慢病毒或重组逆转录病毒感染K562细胞；筛选得到表达靶蛋白的滋养层细胞；用于CAR‑NK细胞扩增培养。本申请所获得的用于CAR‑NK细胞培养的滋养层细胞能够极大提高CAR‑NK细胞培养过程中CAR表达的阳性率和扩增效率，增强CAR‑NK细胞的杀伤效果，制备方法简单高效，具有广阔的应用前景。
主权项：1.一种用于CAR-NK细胞培养的滋养层细胞制备方法，其特征在于，所述用于CAR-NK细胞培养的滋养层细胞制备方法包括：步骤S1.构建重组慢病毒载体质粒或重组逆转录病毒载体质粒，所述重组慢病毒载体质粒或重组逆转录病毒载体质粒包括CD137L序列，膜结合IL15序列，膜结合IL21序列，以及CAR结构中scFV结构能够识别的靶点序列；步骤S2.将所述重组慢病毒载体质粒或重组逆转录病毒载体质粒包装得到重组慢病毒或重组逆转录病毒；步骤S3.用所述重组慢病毒或重组逆转录病毒感染K562滋养层细胞；步骤S4.将病毒感染后的K562滋养层细胞进行单克隆分选、扩增以及流式检测得到高表达CD137L、膜结合IL-21、膜结合IL-15和靶蛋白全长或靶蛋白胞外段的K562滋养层细胞；步骤S5.使用伽马射线辐照处理同时表达CD137L、膜结合IL-21、膜结合IL-15和CAR结构中scFV结构能够识别的靶点蛋白的K562滋养层细胞，得到用于CAR-NK细胞培养的滋养层细胞。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 苏州丹罗医药有限公司 CAR-NK细胞培养的滋养层细胞、制备方法及病毒载体质粒
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